不同頻率電針“解郁方”對抑郁大鼠海馬內(nèi)5-TH和血清ACTH含量的影響

陳 沖，閆麗萍，王敏丹，燕 平

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原 030024）

針灸治療抑郁癥的選穴配伍至今缺乏系統(tǒng)而完整的標準，通過前期研究，我們篩選出治療抑郁癥的較佳穴位配伍處方——“解郁方”。除了穴位，針刺頻率也是影響針灸效應(yīng)的重要因素之一。因此，開展不同針刺頻率療效的研究具有重要意義。本研究旨在探討不同頻率電針“解郁方”對抑郁大鼠血清促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）和海馬內(nèi)五羥色胺（5-TH）含量的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 清潔級雄性SD大鼠［北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，合格證編號為SCXK-（軍）2007-004］100只，體質(zhì)量（160±10）g。

1.1.2 實驗儀器 ACTH ELISA試劑盒（由美國Becton，Dickinson and Company公司提供）。LH-202型HANS電針儀，離心機，漩渦振蕩器，酶標儀，勻漿機，熒光分光光度計。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組與造模 相對濕度45%～55%，溫度20℃～25℃環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，進行曠場試驗，將成功通過曠場試驗篩選的50只大鼠，隨機分為空白組、模型組、2Hz組、30Hz組、100Hz組，每組各 10只。除空白組外，各組動物開始接受21d各種不同的應(yīng)激，包括冷水游泳（4℃，5min）、禁水（24h）、禁食（24h）、晝夜顛倒（24h）、熱烘（45℃，5min）、束縛（3h），夾尾（3min），每天隨機安排 1種，每種刺激方式使用3～4次。

1.2.2 針刺方法 各電針治療組于應(yīng)激造模前1h針刺，各組“解郁方”穴位常規(guī)消毒，選用華佗牌0.25mm×25mm針灸針進行針刺。參照《實驗動物針灸穴位圖譜》取穴，百會穴向前平刺3mm，太沖穴直刺1mm，神門穴直刺2mm，連接到LH-202型HANS電刺激儀。刺激強度以穴位周圍肌肉顫動而又不引起大鼠嘶叫為度［1］，一般不超過2mA，共電針20min，1次/d，連續(xù)治療3w；空白組不做處理，模型組抓取、固定，但不做針刺，其他處理同針刺組。

1.2.3 指標測定 各組動物于第21天末次治療的24h后，大鼠用10%水合氯醛（0.36mL/100g）給大鼠腹腔注射，麻醉后采血4mL，血液在未抗凝試管中靜置，4000r/min離心10min，分離血清，保存在-20℃的冰箱中，以備待測。用ELISA方法檢測血清ACTH，采血后大鼠快速斷頭，按大鼠腦圖譜標示，冰上分離海馬腦，保存于液氮中，以備待測。用熒光分光光度計測大鼠海馬內(nèi)5-TH含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，統(tǒng)計量用均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較用單因素方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

不同頻率電針“解郁方”對抑郁大鼠血清ACTH以及海馬內(nèi)5-TH含量的影響，結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠血清ACTH含量以及海馬內(nèi)5-TH含量比較 （±s）

表1 各組大鼠血清ACTH含量以及海馬內(nèi)5-TH含量比較 （±s）

注：與正常組比較，1）P<0.01；與模型組比較，2）P<0.01；與 30Hz組、100Hz組比較，3）P<0.05

組別 n ACTH（pg/mL） 5-TH（μg/g）正常組 8 14.437±0.459 1.810±0.145模型組 8 16.083±0.6561） 0.584±0.0831）2Hz 組 8 14.992±0.7092）3） 1.166±0.9702）3）30Hz組 8 15.525±0.7642） 0.992±0.0892）100Hz組 8 15.802±0.4632） 0.815±0.0792）

由表1可以看出，與正常組比較，模型組ACTH含量升高，5-TH含量降低（P<0.01），表示抑郁大鼠模型造模成功。各電針治療組ACTH含量較模型組顯著降低（P<0.01），5-TH含量提升（P<0.01）；2Hz組較30Hz組、100Hz組ACTH濃度降低、5-TH含量高（P<0.05）；30Hz組、100Hz組 ACTH 濃度，5-TH 含量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。表明不同頻率電針“解郁方”均能降低抑郁大鼠血清ACTH含量，提升海馬內(nèi)5-TH含量，2Hz效果較好。

3 討 論

針灸治療抑郁癥歷史悠久，療效確切，不同的刺激方法和頻率對機體的調(diào)節(jié)作用不同。 金真等［2］應(yīng)用功能性磁共振研究人腦對不同頻率穴位體表電刺激（TENS）的反應(yīng)，結(jié)果顯示，在相同穴位給予不同頻率的TENS可以在大腦引起不同的反應(yīng)，提示不同頻率的TENS可以激活不同的腦區(qū)，其中低頻TENS選擇性地激活腹側(cè)丘腦、下丘腦和內(nèi)嗅葉，而高頻TENS則激活背側(cè)丘腦和扣帶回。

抑郁癥發(fā)病是多因素的，神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)在抑郁癥的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。HPA軸作為神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的樞紐，主要作用是維持人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，對外界環(huán)境的刺激做出生理心理反應(yīng)，以適應(yīng)環(huán)境的刺激。ACTH是維持腎上腺正常形態(tài)和功能的重要激素，是垂體前葉在下丘腦促皮質(zhì)素釋放激素（CRH）的作用下，在腺垂體嗜堿細胞內(nèi)進行合成和分泌的。隨后激活束狀帶細胞的腺苷酸環(huán)化酶，生成環(huán)腺苷酸，進一步生成應(yīng)激激素皮質(zhì)類固醇（GC）。抑郁癥神經(jīng)內(nèi)分泌改變是下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸功能亢進和下丘腦-垂體-甲狀腺（HPT）軸功能障礙造成的，電針治療抑郁癥的機制之一就是調(diào)整亢進的HPA軸功能。

慢性應(yīng)激是誘導(dǎo)抑郁癥發(fā)病的重要原因，其主要原因之一是導(dǎo)致海馬內(nèi)5-HT含量減少。海馬是應(yīng)激激素的靶區(qū)，主要功能是參與情緒的控制和反應(yīng)，對情緒反應(yīng)起非特異性抑制作用，是前腦抑制系統(tǒng)的一部分，也是介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)最重要的腦區(qū)之一。慢性應(yīng)激（超過24h的持續(xù)或反復(fù)應(yīng)激）可以引起海馬結(jié)構(gòu)發(fā)生器質(zhì)性改變，造成海馬體積縮小，神經(jīng)元缺失［3］。首先是應(yīng)激刺激引起韁核活動水平增強，加強了對中縫核的抑制作用（中縫核含有大量5-HT神經(jīng)元［4］），導(dǎo)致5-HT釋放減少，海馬功能低下，出現(xiàn)抑郁癥狀。電刺激外側(cè)韁核經(jīng)過中縫核使海馬神經(jīng)元發(fā)生興奮［5］，深部腦刺激療法正是基于此原理起效的。應(yīng)激刺激激活了機體的5-HT系統(tǒng)和HPA軸之間原已存在的交互調(diào)節(jié)作用［6］，這兩個系統(tǒng)的病理性變化是抑郁癥癥狀的重要原因，而且與中樞神經(jīng)系統(tǒng)海馬和韁核的活動存在著極密切關(guān)系［7］。HPA軸活動持續(xù)增強是抑郁癥的重要原因，海馬抑制HPA軸活動，也抑制韁核活動。高頻刺激（刺激參數(shù)大于100Hz，可引起與損毀術(shù)類似效應(yīng)）外側(cè)韁核能降低其活動水平。實驗結(jié)果表明，不同頻率電針“解郁方”都能降低抑郁大鼠血清ACTH，抑郁大鼠海馬內(nèi)5-TH含量增加，以2Hz頻率最明顯。這一實驗結(jié)果為“解郁方”的臨床應(yīng)用提供了實驗室依據(jù)，但其作用機制有待進一步研究。

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［5］龔燕，王延武.電針對腦卒中后抑郁模型大鼠行為學(xué)和腦組織NE、5-TH含量的影響［J］.中國中醫(yī)藥科技，2009，16（3）：163-164.

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