維生素1對羊肚菌菌絲體生長的影響

賀曉龍等

摘要：維生素B1是影響羊肚菌菌絲體生長的環(huán)境因素之一，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入適量的維生素B1可促進(jìn)菌絲體的生長。試驗研究M延-5、M延-12、M川美 3種羊肚菌菌絲體生長所需的最適維生素B1濃度范圍，結(jié)果表明，M延-5、M延-12、M川美菌絲體生長最適維生素B1濃度分別為25～30、15、15 mg/L。

關(guān)鍵詞：維生素B1；羊肚菌；菌絲體；生長；方差分析

中圖分類號： S646.701文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0230-02

收稿日期：2013-12-18

基金項目：陜西省高水平大學(xué)建設(shè)專項資金 （編號：2012SXTS06）；陜西科技廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)（編號：2011K02-11）；陜西省延安市科技項目（編號：2012ks-13）。

作者簡介：賀曉龍（1982—），男，陜西臨潼人，實驗師，從事生物技術(shù)與食用菌研究。E-mail：ydhelong@163.com。

通信作者：任桂梅（1955—），女，陜西清澗人，教授，從事應(yīng)用微生物及食用菌研究。E-mail：ydrgm@163.com。羊肚菌（Morchella esculenta）屬子囊菌亞門盤菌綱盤菌類，生于闊葉林地上，菌蓋圓錐形，高4～7 cm，表面呈羊肚狀，味美，營養(yǎng)價值高。羊肚菌是一種珍稀的野生食用、藥用真菌，蛋白質(zhì)含量極為豐富，必需氨基酸齊全，還含有游離的稀有氨基酸如順-3-氨基-L-脯氨酸和2，4-二氨基異丁酸等，風(fēng)味奇鮮、香味獨特[1-3]，羊肚菌還含有多種維生素和鐵、鋅等礦質(zhì)元素。羊肚菌作為一種調(diào)味品，在國外已采用深層培養(yǎng)法規(guī)?；a(chǎn)，但至今羊肚菌子實體仍然不能進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化人工栽培。

羊肚菌菌絲體含有子實體固有的營養(yǎng)素和生理活性組分，能較好地保持子實體的獨特風(fēng)味[4]，研究羊肚菌菌絲的生長可以促進(jìn)營養(yǎng)價值和藥用價值的開發(fā)利用。維生素B1是影響羊肚菌M延-5、M延-12、M川美菌絲體生長的環(huán)境因素之一，而關(guān)于維生素B1對羊肚菌菌絲體生長的影響至今尚未見報道。本試驗研究M延-5、M延-12、M川美 3種羊肚菌菌絲體在不同維生素B1濃度混合培養(yǎng)基中的生長狀況，得到適合這3種羊肚菌菌絲體生長各自最佳的維生素B1濃度。

1材料與方法

1.1材料

菌株M延-5、M延-12，從陜北南泥灣野生羊肚菌菌蓋分離篩選而得[5]；菌株M川美引自四川綿陽食用菌研究所。維生素B1片、食用菌制種與培養(yǎng)常用藥品、設(shè)備等來自市購。

1.2方法

在葡萄糖硝酸鉀基礎(chǔ)培養(yǎng)基（葡萄糖20 g、硝酸鉀2 g、硫酸鎂0.5 g、磷酸二氫鉀0.5 g、氯化鈉0.5 g、瓊脂20 g，蒸餾水1000 mL）中，分別加入不同量的維生素B1溶液，配制成含維生素B1為0、10、20、30、40、50 mg/L的培養(yǎng)基各100 mL，分裝于10支試管，供試3種菌株各做1組，重復(fù)3次，進(jìn)行菌株培養(yǎng)基初篩；根據(jù)初篩試驗結(jié)果，菌株M延-5使用含維生素B1濃度為0、20、25、30、35、40 mg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)試驗，菌株M延-12使用含維生素B1濃度為0、10、15、20、25、30 mg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)試驗，菌株M川美使用含維生素B1濃度為0、5、10、15、20 mg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)試驗，每個處理各 100 mL，分裝于10支試管。所有培養(yǎng)基均121 ℃滅菌 30 min，冷卻后取出，擺斜面?zhèn)溆肹6]。

超凈工作臺無菌條件下進(jìn)行接種，每支試管接1個菌種，盡可能將菌種放在試管斜面近上端同一位置處，接種完畢進(jìn)行標(biāo)記；將接種好的試管斜面放入恒溫培養(yǎng)箱中24 ℃培養(yǎng)[7]，24 h后隨機(jī)抽取5支試管測量1次菌絲體的長度，觀察長勢并記錄。每個處理重復(fù)3次。采用SSR法進(jìn)行差異性分析[8]。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度維生素B1培養(yǎng)基篩選試驗

由表1可見，維生素B1濃度為30 mg/L時，菌株M延-5菌絲體生長速度極顯著快于0、10、50 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體，顯著快于40 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體，與20 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體之間沒有顯著性差異，菌株M延-5培養(yǎng)較適宜的維生素B1濃度為20～30 mg/L；維生素B1濃度為20 mg/L時，菌株M延-12菌絲體生長最快，極顯著快于其他各濃度，M延-12菌絲體生長較適宜的維生素B1濃度為20 mg/L左右；維生素B1濃度為10 mg/L時，菌株M川美菌絲體生長最快，除與20 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體相比差異不顯著外，與其他濃度相比存在極顯著差異，M川美菌絲體生長較適宜的維生素B1濃度為10～20 mg/L。

3結(jié)論

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入適量的維生素B1，可促進(jìn)羊肚菌菌絲體的生長，而不同種類的羊肚菌，其最適的維生素B1濃度范圍不盡相同。試驗結(jié)果顯示，菌株M延-5最適維生素B1濃度為25～30 mg/L，菌株M延-12和菌株M川美最適維生素B1濃度均為15 mg/L，這可能是由于菌種本身性質(zhì)不同所致。

在試驗過程中，為使結(jié)果更加精確，需將維生素B1片配制成溶液，并用移液管移加。接種后的試管斜面需在接種處貼一細(xì)小標(biāo)簽，每次測量以此為起點確保測量的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)：

[1]任愛梅，李建宏，謝放，等. 不同培養(yǎng)基對羊肚菌菌絲生長及菌核形成的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（11）：270-272.

[2]秦俊哲，呂嘉櫪. 食用菌栽培學(xué)[M]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)出版社，2002：17.

[3]劉文叢，劉穎，郭相，等. 滇西北地區(qū)羊肚菌的分子鑒定及ITS序列分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（3）：31-34.

[4]陳芳草，劉興蓉，譚方河，等. 尖頂羊肚菌生物培養(yǎng)學(xué)特性研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2004，17（4）：508-514.

[5]任桂梅，高小朋，陳國梁. 陜北野生羊肚菌母種分離研究初報[J]. 延安大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2002，21（3）：65-67.

[6]趙春燕，孫軍德，李敏，等. 培養(yǎng)條件對羊肚菌菌絲生長的影響[J]. 中國食用菌，2005，24（1）：15-17.

[7]孟麗，許桂芳，段利娟. 硫酸亞鐵對食用菌菌絲體生長發(fā)育的影響[J]. 中國食用菌，2004，23（3）：45-47.

[8]杜榮騫. 生物統(tǒng)計學(xué)[M]. 北京：高等教育出版社，2001：113-114.

摘要：維生素B1是影響羊肚菌菌絲體生長的環(huán)境因素之一，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入適量的維生素B1可促進(jìn)菌絲體的生長。試驗研究M延-5、M延-12、M川美 3種羊肚菌菌絲體生長所需的最適維生素B1濃度范圍，結(jié)果表明，M延-5、M延-12、M川美菌絲體生長最適維生素B1濃度分別為25～30、15、15 mg/L。

關(guān)鍵詞：維生素B1；羊肚菌；菌絲體；生長；方差分析

中圖分類號： S646.701文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0230-02

收稿日期：2013-12-18

基金項目：陜西省高水平大學(xué)建設(shè)專項資金 （編號：2012SXTS06）；陜西科技廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)（編號：2011K02-11）；陜西省延安市科技項目（編號：2012ks-13）。

作者簡介：賀曉龍（1982—），男，陜西臨潼人，實驗師，從事生物技術(shù)與食用菌研究。E-mail：ydhelong@163.com。

通信作者：任桂梅（1955—），女，陜西清澗人，教授，從事應(yīng)用微生物及食用菌研究。E-mail：ydrgm@163.com。羊肚菌（Morchella esculenta）屬子囊菌亞門盤菌綱盤菌類，生于闊葉林地上，菌蓋圓錐形，高4～7 cm，表面呈羊肚狀，味美，營養(yǎng)價值高。羊肚菌是一種珍稀的野生食用、藥用真菌，蛋白質(zhì)含量極為豐富，必需氨基酸齊全，還含有游離的稀有氨基酸如順-3-氨基-L-脯氨酸和2，4-二氨基異丁酸等，風(fēng)味奇鮮、香味獨特[1-3]，羊肚菌還含有多種維生素和鐵、鋅等礦質(zhì)元素。羊肚菌作為一種調(diào)味品，在國外已采用深層培養(yǎng)法規(guī)?；a(chǎn)，但至今羊肚菌子實體仍然不能進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化人工栽培。

羊肚菌菌絲體含有子實體固有的營養(yǎng)素和生理活性組分，能較好地保持子實體的獨特風(fēng)味[4]，研究羊肚菌菌絲的生長可以促進(jìn)營養(yǎng)價值和藥用價值的開發(fā)利用。維生素B1是影響羊肚菌M延-5、M延-12、M川美菌絲體生長的環(huán)境因素之一，而關(guān)于維生素B1對羊肚菌菌絲體生長的影響至今尚未見報道。本試驗研究M延-5、M延-12、M川美 3種羊肚菌菌絲體在不同維生素B1濃度混合培養(yǎng)基中的生長狀況，得到適合這3種羊肚菌菌絲體生長各自最佳的維生素B1濃度。

1材料與方法

1.1材料

菌株M延-5、M延-12，從陜北南泥灣野生羊肚菌菌蓋分離篩選而得[5]；菌株M川美引自四川綿陽食用菌研究所。維生素B1片、食用菌制種與培養(yǎng)常用藥品、設(shè)備等來自市購。

1.2方法

在葡萄糖硝酸鉀基礎(chǔ)培養(yǎng)基（葡萄糖20 g、硝酸鉀2 g、硫酸鎂0.5 g、磷酸二氫鉀0.5 g、氯化鈉0.5 g、瓊脂20 g，蒸餾水1000 mL）中，分別加入不同量的維生素B1溶液，配制成含維生素B1為0、10、20、30、40、50 mg/L的培養(yǎng)基各100 mL，分裝于10支試管，供試3種菌株各做1組，重復(fù)3次，進(jìn)行菌株培養(yǎng)基初篩；根據(jù)初篩試驗結(jié)果，菌株M延-5使用含維生素B1濃度為0、20、25、30、35、40 mg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)試驗，菌株M延-12使用含維生素B1濃度為0、10、15、20、25、30 mg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)試驗，菌株M川美使用含維生素B1濃度為0、5、10、15、20 mg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)試驗，每個處理各 100 mL，分裝于10支試管。所有培養(yǎng)基均121 ℃滅菌 30 min，冷卻后取出，擺斜面?zhèn)溆肹6]。

超凈工作臺無菌條件下進(jìn)行接種，每支試管接1個菌種，盡可能將菌種放在試管斜面近上端同一位置處，接種完畢進(jìn)行標(biāo)記；將接種好的試管斜面放入恒溫培養(yǎng)箱中24 ℃培養(yǎng)[7]，24 h后隨機(jī)抽取5支試管測量1次菌絲體的長度，觀察長勢并記錄。每個處理重復(fù)3次。采用SSR法進(jìn)行差異性分析[8]。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度維生素B1培養(yǎng)基篩選試驗

由表1可見，維生素B1濃度為30 mg/L時，菌株M延-5菌絲體生長速度極顯著快于0、10、50 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體，顯著快于40 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體，與20 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體之間沒有顯著性差異，菌株M延-5培養(yǎng)較適宜的維生素B1濃度為20～30 mg/L；維生素B1濃度為20 mg/L時，菌株M延-12菌絲體生長最快，極顯著快于其他各濃度，M延-12菌絲體生長較適宜的維生素B1濃度為20 mg/L左右；維生素B1濃度為10 mg/L時，菌株M川美菌絲體生長最快，除與20 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體相比差異不顯著外，與其他濃度相比存在極顯著差異，M川美菌絲體生長較適宜的維生素B1濃度為10～20 mg/L。

3結(jié)論

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入適量的維生素B1，可促進(jìn)羊肚菌菌絲體的生長，而不同種類的羊肚菌，其最適的維生素B1濃度范圍不盡相同。試驗結(jié)果顯示，菌株M延-5最適維生素B1濃度為25～30 mg/L，菌株M延-12和菌株M川美最適維生素B1濃度均為15 mg/L，這可能是由于菌種本身性質(zhì)不同所致。

在試驗過程中，為使結(jié)果更加精確，需將維生素B1片配制成溶液，并用移液管移加。接種后的試管斜面需在接種處貼一細(xì)小標(biāo)簽，每次測量以此為起點確保測量的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)：

[1]任愛梅，李建宏，謝放，等. 不同培養(yǎng)基對羊肚菌菌絲生長及菌核形成的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（11）：270-272.

[2]秦俊哲，呂嘉櫪. 食用菌栽培學(xué)[M]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)出版社，2002：17.

[3]劉文叢，劉穎，郭相，等. 滇西北地區(qū)羊肚菌的分子鑒定及ITS序列分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（3）：31-34.

[4]陳芳草，劉興蓉，譚方河，等. 尖頂羊肚菌生物培養(yǎng)學(xué)特性研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2004，17（4）：508-514.

[5]任桂梅，高小朋，陳國梁. 陜北野生羊肚菌母種分離研究初報[J]. 延安大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2002，21（3）：65-67.

[6]趙春燕，孫軍德，李敏，等. 培養(yǎng)條件對羊肚菌菌絲生長的影響[J]. 中國食用菌，2005，24（1）：15-17.

[7]孟麗，許桂芳，段利娟. 硫酸亞鐵對食用菌菌絲體生長發(fā)育的影響[J]. 中國食用菌，2004，23（3）：45-47.

[8]杜榮騫. 生物統(tǒng)計學(xué)[M]. 北京：高等教育出版社，2001：113-114.

摘要：維生素B1是影響羊肚菌菌絲體生長的環(huán)境因素之一，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入適量的維生素B1可促進(jìn)菌絲體的生長。試驗研究M延-5、M延-12、M川美 3種羊肚菌菌絲體生長所需的最適維生素B1濃度范圍，結(jié)果表明，M延-5、M延-12、M川美菌絲體生長最適維生素B1濃度分別為25～30、15、15 mg/L。

關(guān)鍵詞：維生素B1；羊肚菌；菌絲體；生長；方差分析

中圖分類號： S646.701文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0230-02

收稿日期：2013-12-18

基金項目：陜西省高水平大學(xué)建設(shè)專項資金 （編號：2012SXTS06）；陜西科技廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)（編號：2011K02-11）；陜西省延安市科技項目（編號：2012ks-13）。

作者簡介：賀曉龍（1982—），男，陜西臨潼人，實驗師，從事生物技術(shù)與食用菌研究。E-mail：ydhelong@163.com。

通信作者：任桂梅（1955—），女，陜西清澗人，教授，從事應(yīng)用微生物及食用菌研究。E-mail：ydrgm@163.com。羊肚菌（Morchella esculenta）屬子囊菌亞門盤菌綱盤菌類，生于闊葉林地上，菌蓋圓錐形，高4～7 cm，表面呈羊肚狀，味美，營養(yǎng)價值高。羊肚菌是一種珍稀的野生食用、藥用真菌，蛋白質(zhì)含量極為豐富，必需氨基酸齊全，還含有游離的稀有氨基酸如順-3-氨基-L-脯氨酸和2，4-二氨基異丁酸等，風(fēng)味奇鮮、香味獨特[1-3]，羊肚菌還含有多種維生素和鐵、鋅等礦質(zhì)元素。羊肚菌作為一種調(diào)味品，在國外已采用深層培養(yǎng)法規(guī)?；a(chǎn)，但至今羊肚菌子實體仍然不能進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化人工栽培。

羊肚菌菌絲體含有子實體固有的營養(yǎng)素和生理活性組分，能較好地保持子實體的獨特風(fēng)味[4]，研究羊肚菌菌絲的生長可以促進(jìn)營養(yǎng)價值和藥用價值的開發(fā)利用。維生素B1是影響羊肚菌M延-5、M延-12、M川美菌絲體生長的環(huán)境因素之一，而關(guān)于維生素B1對羊肚菌菌絲體生長的影響至今尚未見報道。本試驗研究M延-5、M延-12、M川美 3種羊肚菌菌絲體在不同維生素B1濃度混合培養(yǎng)基中的生長狀況，得到適合這3種羊肚菌菌絲體生長各自最佳的維生素B1濃度。

1材料與方法

1.1材料

菌株M延-5、M延-12，從陜北南泥灣野生羊肚菌菌蓋分離篩選而得[5]；菌株M川美引自四川綿陽食用菌研究所。維生素B1片、食用菌制種與培養(yǎng)常用藥品、設(shè)備等來自市購。

1.2方法

在葡萄糖硝酸鉀基礎(chǔ)培養(yǎng)基（葡萄糖20 g、硝酸鉀2 g、硫酸鎂0.5 g、磷酸二氫鉀0.5 g、氯化鈉0.5 g、瓊脂20 g，蒸餾水1000 mL）中，分別加入不同量的維生素B1溶液，配制成含維生素B1為0、10、20、30、40、50 mg/L的培養(yǎng)基各100 mL，分裝于10支試管，供試3種菌株各做1組，重復(fù)3次，進(jìn)行菌株培養(yǎng)基初篩；根據(jù)初篩試驗結(jié)果，菌株M延-5使用含維生素B1濃度為0、20、25、30、35、40 mg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)試驗，菌株M延-12使用含維生素B1濃度為0、10、15、20、25、30 mg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)試驗，菌株M川美使用含維生素B1濃度為0、5、10、15、20 mg/L的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)試驗，每個處理各 100 mL，分裝于10支試管。所有培養(yǎng)基均121 ℃滅菌 30 min，冷卻后取出，擺斜面?zhèn)溆肹6]。

超凈工作臺無菌條件下進(jìn)行接種，每支試管接1個菌種，盡可能將菌種放在試管斜面近上端同一位置處，接種完畢進(jìn)行標(biāo)記；將接種好的試管斜面放入恒溫培養(yǎng)箱中24 ℃培養(yǎng)[7]，24 h后隨機(jī)抽取5支試管測量1次菌絲體的長度，觀察長勢并記錄。每個處理重復(fù)3次。采用SSR法進(jìn)行差異性分析[8]。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度維生素B1培養(yǎng)基篩選試驗

由表1可見，維生素B1濃度為30 mg/L時，菌株M延-5菌絲體生長速度極顯著快于0、10、50 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體，顯著快于40 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體，與20 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體之間沒有顯著性差異，菌株M延-5培養(yǎng)較適宜的維生素B1濃度為20～30 mg/L；維生素B1濃度為20 mg/L時，菌株M延-12菌絲體生長最快，極顯著快于其他各濃度，M延-12菌絲體生長較適宜的維生素B1濃度為20 mg/L左右；維生素B1濃度為10 mg/L時，菌株M川美菌絲體生長最快，除與20 mg/L維生素B1培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲體相比差異不顯著外，與其他濃度相比存在極顯著差異，M川美菌絲體生長較適宜的維生素B1濃度為10～20 mg/L。

3結(jié)論

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入適量的維生素B1，可促進(jìn)羊肚菌菌絲體的生長，而不同種類的羊肚菌，其最適的維生素B1濃度范圍不盡相同。試驗結(jié)果顯示，菌株M延-5最適維生素B1濃度為25～30 mg/L，菌株M延-12和菌株M川美最適維生素B1濃度均為15 mg/L，這可能是由于菌種本身性質(zhì)不同所致。

在試驗過程中，為使結(jié)果更加精確，需將維生素B1片配制成溶液，并用移液管移加。接種后的試管斜面需在接種處貼一細(xì)小標(biāo)簽，每次測量以此為起點確保測量的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)：

[1]任愛梅，李建宏，謝放，等. 不同培養(yǎng)基對羊肚菌菌絲生長及菌核形成的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（11）：270-272.

[2]秦俊哲，呂嘉櫪. 食用菌栽培學(xué)[M]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)出版社，2002：17.

[3]劉文叢，劉穎，郭相，等. 滇西北地區(qū)羊肚菌的分子鑒定及ITS序列分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（3）：31-34.

[4]陳芳草，劉興蓉，譚方河，等. 尖頂羊肚菌生物培養(yǎng)學(xué)特性研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2004，17（4）：508-514.

[5]任桂梅，高小朋，陳國梁. 陜北野生羊肚菌母種分離研究初報[J]. 延安大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2002，21（3）：65-67.

[6]趙春燕，孫軍德，李敏，等. 培養(yǎng)條件對羊肚菌菌絲生長的影響[J]. 中國食用菌，2005，24（1）：15-17.

[7]孟麗，許桂芳，段利娟. 硫酸亞鐵對食用菌菌絲體生長發(fā)育的影響[J]. 中國食用菌，2004，23（3）：45-47.

[8]杜榮騫. 生物統(tǒng)計學(xué)[M]. 北京：高等教育出版社，2001：113-114.