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      臺灣榿木組培技術(shù)研究初報

      2014-08-15 15:26:53汪艷云
      關(guān)鍵詞:組織培養(yǎng)

      汪艷云

      摘 要:利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體,研究臺灣榿木組培技術(shù)。結(jié)果表明:臺灣榿木莖段的初代芽誘導(dǎo)存在較大難度,而榿木葉片誘導(dǎo)出愈傷組織則相對容易。

      關(guān)鍵詞:臺灣榿木 組織培養(yǎng) 初代培養(yǎng) 愈傷

      臺灣榿木(Alnus formosana Makino)為樺木科(Betulaceae)榿木屬(Alnus B.Ehrh.)植物,又名臺灣赤揚(yáng)、水柯子,落葉闊葉大喬木,原產(chǎn)臺灣省,是臺灣重要的先鋒造林樹種。臺灣榿木適應(yīng)性強(qiáng),速生,材質(zhì)好,可用作營造工業(yè)用材林、紙漿林、水源林、防護(hù)林及“四旁”植樹,可造純林和混交林,可輪作 [1]。南非于1982年引種臺灣榿木,在排水良好的濕潤土地上,8年生臺灣榿木單株樹高可達(dá)20 m,胸徑27.8 cm,木材年生長量15 m3/hm2,其中6~8年間,木材年生長量24 m3/hm2,生長表現(xiàn)良好,被認(rèn)為是南非最有潛力的商用造林樹種 [2]。廣西于2007年引種臺灣榿木以來,臺灣榿木表現(xiàn)出了明顯的生長優(yōu)勢。我國四川、福建、湖南等地也相繼引種成功 [3-4]。為繁育推廣該樹種,有研究者以臺灣榿木枝條的頂芽或腋芽為外植體進(jìn)行了組織培養(yǎng)研究[1],但取葉片作為外植體繁殖,未見報道。擬研究利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體,開展系列組培技術(shù)研究,以期為該樹種在廣西的推廣種植提供技術(shù)支持。

      1 材料與方法

      1.1 外植體的采集及處理

      于2007年10月中旬從四川引種臺灣榿木,栽培在富川縣林業(yè)局苗圃場內(nèi)。2013年3月初,在晴天,特別是3天以上連續(xù)的晴天,剪取榿木幼嫩枝條,帶回組培實驗室內(nèi)處理。

      將枝條剪成2~3 cm的小段,剪除葉片,在流水下沖洗30 min,然后在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s,用無菌水沖洗3次,用0.1 %的升汞溶液消毒4~10 min ,無菌水沖洗5次,待用。

      剪取榿木嫩葉,在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s,用無菌水沖洗3次,用0.1 %的升汞溶液消毒4~10 min,無菌水沖洗5次,然后將葉片剪切成0.5~1.0 cm左右方塊 [5],接種到培養(yǎng)基上。40 d后統(tǒng)計外植體污染率。

      1.2 初代培養(yǎng)基的篩選

      以MS、B5為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的BA、IBA等激素分別進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)養(yǎng)基的篩選。30 d時記錄生長情況。

      1.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

      以MS、B5為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的BA、NAA、2,4-D等激素分別進(jìn)行葉片愈傷誘導(dǎo)的實驗。30 d時記錄生長情況。

      1.4 培養(yǎng)條件

      培養(yǎng)基瓊脂含量0.4 %,蔗糖3.0 %,pH值為5. 8;培養(yǎng)溫度24 ℃~28 ℃,光照強(qiáng)度2000~3000 l x,每天光照時數(shù)14 h。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 外植體處理效果

      對枝條的處理效果表明:75 %的酒精消毒10 s后,用0.1 %的升汞溶液消毒8 min可取得較好的消毒效果,污染率可控制在10 %以下。處理時間延長會損傷枝條,處理時間不足8 min,污染率會大幅增加。

      對葉片的處理效果表明:75 %的酒精消毒10 s后,用0.1 %的升汞溶液消毒6 min可取得較好的消毒效果,污染率可控制在20 %以下。處理時間延長葉片會褐化死亡,處理時間不足,污染率會大幅增加。

      2.2 初代培養(yǎng)基的篩選

      采用表1的4種培養(yǎng)基對臺灣榿木莖段進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)培養(yǎng),結(jié)果表明僅1、3,2種培養(yǎng)基能誘導(dǎo)初代芽的產(chǎn)生,但芽誘導(dǎo)率很低,誘導(dǎo)后的新芽在培養(yǎng)基內(nèi)長勢良好(見圖1)。編號2、4的2種培養(yǎng)基不能誘導(dǎo)初代芽的萌動,原接種芽在2、4,2種培養(yǎng)基中只有新葉的產(chǎn)生,不會萌發(fā)新芽,原接種芽在2,4 2種培養(yǎng)基中可存活半年,后逐漸死亡,提示較高濃度的BA可能更有利于新芽的誘導(dǎo)萌發(fā)。

      2.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

      用無菌的剪刀將葉片剪成0.5~1.0 cm左右方塊,然后將外植體水平放在培養(yǎng)基上,用鑷子按實,使外植體與培養(yǎng)基充分接觸。各處理生長情況見表2??梢?,4種培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)臺灣榿木葉片產(chǎn)生愈傷組織,誘導(dǎo)率均在80 %以上,表明葉片愈傷的誘導(dǎo)相對容易(見圖2)。高濃度的2,4-D和BA能快速誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生。較低濃度的BA或者單獨(dú)使用NAA也能誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生,但所需時間稍長。

      3 結(jié)論與討論

      3.1 外植體采集容易

      臺灣榿木枝條光滑,無絨毛,無針刺。一年四季均有葉片更新,均可采集到幼嫩葉片,因此外植體消毒相對容易。

      3.2 初代芽誘導(dǎo)率低

      初代培養(yǎng)是繼代增殖培養(yǎng)的前提,只有誘導(dǎo)出初代芽才能進(jìn)入繼代增殖培養(yǎng)階段。從研究的結(jié)果看,誘導(dǎo)初代芽有相當(dāng)?shù)碾y度,但在高濃度的BA刺激下,仍可得到少量初代誘導(dǎo)芽。如何調(diào)整修改培養(yǎng)基成分,提高新芽誘導(dǎo)率,有待進(jìn)一步研究。

      3.3 誘導(dǎo)愈傷組織成芽將后續(xù)研究

      臺灣榿木的葉片很容易誘導(dǎo)出愈傷組織,如何誘導(dǎo)愈傷組織分化成芽及生根、移栽等后續(xù)研究工作需要繼續(xù)進(jìn)行攻關(guān)。

      參考文獻(xiàn)

      [1] 饒紅欣,蔣利媛,彭信海,等. 臺灣榿木的組織培養(yǎng)[J]. 湖南林業(yè)科技,2008,35(3):1-3.

      [2] ZWOLINSKI J B,DONALD D G,GERISCHER G F. Characteristics and wood properties of Alnus formosana successfully introduced into South Africa[J]. South Africa Forestry,1992,163: 31-35.

      [3] 鄒高順. 臺灣榿木引種造林及其培肥能力的研究[J]. 福建林學(xué)院學(xué)報,1995,16(2): 112-117.

      [4] 王金錫,朱萬澤. 臺灣榿木生態(tài)生物學(xué)特性及引種推廣前景[J]. 四川林業(yè)科技,2000,21(4): 16- 19.

      [5] 劉海龍,張日清,汪靈丹. 櫸樹葉器官再生植株技術(shù)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué),2013,42(3): 231- 233.

      摘 要:利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體,研究臺灣榿木組培技術(shù)。結(jié)果表明:臺灣榿木莖段的初代芽誘導(dǎo)存在較大難度,而榿木葉片誘導(dǎo)出愈傷組織則相對容易。

      關(guān)鍵詞:臺灣榿木 組織培養(yǎng) 初代培養(yǎng) 愈傷

      臺灣榿木(Alnus formosana Makino)為樺木科(Betulaceae)榿木屬(Alnus B.Ehrh.)植物,又名臺灣赤揚(yáng)、水柯子,落葉闊葉大喬木,原產(chǎn)臺灣省,是臺灣重要的先鋒造林樹種。臺灣榿木適應(yīng)性強(qiáng),速生,材質(zhì)好,可用作營造工業(yè)用材林、紙漿林、水源林、防護(hù)林及“四旁”植樹,可造純林和混交林,可輪作 [1]。南非于1982年引種臺灣榿木,在排水良好的濕潤土地上,8年生臺灣榿木單株樹高可達(dá)20 m,胸徑27.8 cm,木材年生長量15 m3/hm2,其中6~8年間,木材年生長量24 m3/hm2,生長表現(xiàn)良好,被認(rèn)為是南非最有潛力的商用造林樹種 [2]。廣西于2007年引種臺灣榿木以來,臺灣榿木表現(xiàn)出了明顯的生長優(yōu)勢。我國四川、福建、湖南等地也相繼引種成功 [3-4]。為繁育推廣該樹種,有研究者以臺灣榿木枝條的頂芽或腋芽為外植體進(jìn)行了組織培養(yǎng)研究[1],但取葉片作為外植體繁殖,未見報道。擬研究利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體,開展系列組培技術(shù)研究,以期為該樹種在廣西的推廣種植提供技術(shù)支持。

      1 材料與方法

      1.1 外植體的采集及處理

      于2007年10月中旬從四川引種臺灣榿木,栽培在富川縣林業(yè)局苗圃場內(nèi)。2013年3月初,在晴天,特別是3天以上連續(xù)的晴天,剪取榿木幼嫩枝條,帶回組培實驗室內(nèi)處理。

      將枝條剪成2~3 cm的小段,剪除葉片,在流水下沖洗30 min,然后在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s,用無菌水沖洗3次,用0.1 %的升汞溶液消毒4~10 min ,無菌水沖洗5次,待用。

      剪取榿木嫩葉,在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s,用無菌水沖洗3次,用0.1 %的升汞溶液消毒4~10 min,無菌水沖洗5次,然后將葉片剪切成0.5~1.0 cm左右方塊 [5],接種到培養(yǎng)基上。40 d后統(tǒng)計外植體污染率。

      1.2 初代培養(yǎng)基的篩選

      以MS、B5為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的BA、IBA等激素分別進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)養(yǎng)基的篩選。30 d時記錄生長情況。

      1.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

      以MS、B5為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的BA、NAA、2,4-D等激素分別進(jìn)行葉片愈傷誘導(dǎo)的實驗。30 d時記錄生長情況。

      1.4 培養(yǎng)條件

      培養(yǎng)基瓊脂含量0.4 %,蔗糖3.0 %,pH值為5. 8;培養(yǎng)溫度24 ℃~28 ℃,光照強(qiáng)度2000~3000 l x,每天光照時數(shù)14 h。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 外植體處理效果

      對枝條的處理效果表明:75 %的酒精消毒10 s后,用0.1 %的升汞溶液消毒8 min可取得較好的消毒效果,污染率可控制在10 %以下。處理時間延長會損傷枝條,處理時間不足8 min,污染率會大幅增加。

      對葉片的處理效果表明:75 %的酒精消毒10 s后,用0.1 %的升汞溶液消毒6 min可取得較好的消毒效果,污染率可控制在20 %以下。處理時間延長葉片會褐化死亡,處理時間不足,污染率會大幅增加。

      2.2 初代培養(yǎng)基的篩選

      采用表1的4種培養(yǎng)基對臺灣榿木莖段進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)培養(yǎng),結(jié)果表明僅1、3,2種培養(yǎng)基能誘導(dǎo)初代芽的產(chǎn)生,但芽誘導(dǎo)率很低,誘導(dǎo)后的新芽在培養(yǎng)基內(nèi)長勢良好(見圖1)。編號2、4的2種培養(yǎng)基不能誘導(dǎo)初代芽的萌動,原接種芽在2、4,2種培養(yǎng)基中只有新葉的產(chǎn)生,不會萌發(fā)新芽,原接種芽在2,4 2種培養(yǎng)基中可存活半年,后逐漸死亡,提示較高濃度的BA可能更有利于新芽的誘導(dǎo)萌發(fā)。

      2.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

      用無菌的剪刀將葉片剪成0.5~1.0 cm左右方塊,然后將外植體水平放在培養(yǎng)基上,用鑷子按實,使外植體與培養(yǎng)基充分接觸。各處理生長情況見表2。可見,4種培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)臺灣榿木葉片產(chǎn)生愈傷組織,誘導(dǎo)率均在80 %以上,表明葉片愈傷的誘導(dǎo)相對容易(見圖2)。高濃度的2,4-D和BA能快速誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生。較低濃度的BA或者單獨(dú)使用NAA也能誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生,但所需時間稍長。

      3 結(jié)論與討論

      3.1 外植體采集容易

      臺灣榿木枝條光滑,無絨毛,無針刺。一年四季均有葉片更新,均可采集到幼嫩葉片,因此外植體消毒相對容易。

      3.2 初代芽誘導(dǎo)率低

      初代培養(yǎng)是繼代增殖培養(yǎng)的前提,只有誘導(dǎo)出初代芽才能進(jìn)入繼代增殖培養(yǎng)階段。從研究的結(jié)果看,誘導(dǎo)初代芽有相當(dāng)?shù)碾y度,但在高濃度的BA刺激下,仍可得到少量初代誘導(dǎo)芽。如何調(diào)整修改培養(yǎng)基成分,提高新芽誘導(dǎo)率,有待進(jìn)一步研究。

      3.3 誘導(dǎo)愈傷組織成芽將后續(xù)研究

      臺灣榿木的葉片很容易誘導(dǎo)出愈傷組織,如何誘導(dǎo)愈傷組織分化成芽及生根、移栽等后續(xù)研究工作需要繼續(xù)進(jìn)行攻關(guān)。

      參考文獻(xiàn)

      [1] 饒紅欣,蔣利媛,彭信海,等. 臺灣榿木的組織培養(yǎng)[J]. 湖南林業(yè)科技,2008,35(3):1-3.

      [2] ZWOLINSKI J B,DONALD D G,GERISCHER G F. Characteristics and wood properties of Alnus formosana successfully introduced into South Africa[J]. South Africa Forestry,1992,163: 31-35.

      [3] 鄒高順. 臺灣榿木引種造林及其培肥能力的研究[J]. 福建林學(xué)院學(xué)報,1995,16(2): 112-117.

      [4] 王金錫,朱萬澤. 臺灣榿木生態(tài)生物學(xué)特性及引種推廣前景[J]. 四川林業(yè)科技,2000,21(4): 16- 19.

      [5] 劉海龍,張日清,汪靈丹. 櫸樹葉器官再生植株技術(shù)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué),2013,42(3): 231- 233.

      摘 要:利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體,研究臺灣榿木組培技術(shù)。結(jié)果表明:臺灣榿木莖段的初代芽誘導(dǎo)存在較大難度,而榿木葉片誘導(dǎo)出愈傷組織則相對容易。

      關(guān)鍵詞:臺灣榿木 組織培養(yǎng) 初代培養(yǎng) 愈傷

      臺灣榿木(Alnus formosana Makino)為樺木科(Betulaceae)榿木屬(Alnus B.Ehrh.)植物,又名臺灣赤揚(yáng)、水柯子,落葉闊葉大喬木,原產(chǎn)臺灣省,是臺灣重要的先鋒造林樹種。臺灣榿木適應(yīng)性強(qiáng),速生,材質(zhì)好,可用作營造工業(yè)用材林、紙漿林、水源林、防護(hù)林及“四旁”植樹,可造純林和混交林,可輪作 [1]。南非于1982年引種臺灣榿木,在排水良好的濕潤土地上,8年生臺灣榿木單株樹高可達(dá)20 m,胸徑27.8 cm,木材年生長量15 m3/hm2,其中6~8年間,木材年生長量24 m3/hm2,生長表現(xiàn)良好,被認(rèn)為是南非最有潛力的商用造林樹種 [2]。廣西于2007年引種臺灣榿木以來,臺灣榿木表現(xiàn)出了明顯的生長優(yōu)勢。我國四川、福建、湖南等地也相繼引種成功 [3-4]。為繁育推廣該樹種,有研究者以臺灣榿木枝條的頂芽或腋芽為外植體進(jìn)行了組織培養(yǎng)研究[1],但取葉片作為外植體繁殖,未見報道。擬研究利用臺灣榿木的莖段和葉片為外植體,開展系列組培技術(shù)研究,以期為該樹種在廣西的推廣種植提供技術(shù)支持。

      1 材料與方法

      1.1 外植體的采集及處理

      于2007年10月中旬從四川引種臺灣榿木,栽培在富川縣林業(yè)局苗圃場內(nèi)。2013年3月初,在晴天,特別是3天以上連續(xù)的晴天,剪取榿木幼嫩枝條,帶回組培實驗室內(nèi)處理。

      將枝條剪成2~3 cm的小段,剪除葉片,在流水下沖洗30 min,然后在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s,用無菌水沖洗3次,用0.1 %的升汞溶液消毒4~10 min ,無菌水沖洗5次,待用。

      剪取榿木嫩葉,在超凈工作臺上用75 %酒精消毒10 s,用無菌水沖洗3次,用0.1 %的升汞溶液消毒4~10 min,無菌水沖洗5次,然后將葉片剪切成0.5~1.0 cm左右方塊 [5],接種到培養(yǎng)基上。40 d后統(tǒng)計外植體污染率。

      1.2 初代培養(yǎng)基的篩選

      以MS、B5為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的BA、IBA等激素分別進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)養(yǎng)基的篩選。30 d時記錄生長情況。

      1.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

      以MS、B5為基本培養(yǎng)基,附加不同濃度的BA、NAA、2,4-D等激素分別進(jìn)行葉片愈傷誘導(dǎo)的實驗。30 d時記錄生長情況。

      1.4 培養(yǎng)條件

      培養(yǎng)基瓊脂含量0.4 %,蔗糖3.0 %,pH值為5. 8;培養(yǎng)溫度24 ℃~28 ℃,光照強(qiáng)度2000~3000 l x,每天光照時數(shù)14 h。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 外植體處理效果

      對枝條的處理效果表明:75 %的酒精消毒10 s后,用0.1 %的升汞溶液消毒8 min可取得較好的消毒效果,污染率可控制在10 %以下。處理時間延長會損傷枝條,處理時間不足8 min,污染率會大幅增加。

      對葉片的處理效果表明:75 %的酒精消毒10 s后,用0.1 %的升汞溶液消毒6 min可取得較好的消毒效果,污染率可控制在20 %以下。處理時間延長葉片會褐化死亡,處理時間不足,污染率會大幅增加。

      2.2 初代培養(yǎng)基的篩選

      采用表1的4種培養(yǎng)基對臺灣榿木莖段進(jìn)行初代芽誘導(dǎo)培養(yǎng),結(jié)果表明僅1、3,2種培養(yǎng)基能誘導(dǎo)初代芽的產(chǎn)生,但芽誘導(dǎo)率很低,誘導(dǎo)后的新芽在培養(yǎng)基內(nèi)長勢良好(見圖1)。編號2、4的2種培養(yǎng)基不能誘導(dǎo)初代芽的萌動,原接種芽在2、4,2種培養(yǎng)基中只有新葉的產(chǎn)生,不會萌發(fā)新芽,原接種芽在2,4 2種培養(yǎng)基中可存活半年,后逐漸死亡,提示較高濃度的BA可能更有利于新芽的誘導(dǎo)萌發(fā)。

      2.3 愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)的篩選

      用無菌的剪刀將葉片剪成0.5~1.0 cm左右方塊,然后將外植體水平放在培養(yǎng)基上,用鑷子按實,使外植體與培養(yǎng)基充分接觸。各處理生長情況見表2。可見,4種培養(yǎng)基均可誘導(dǎo)臺灣榿木葉片產(chǎn)生愈傷組織,誘導(dǎo)率均在80 %以上,表明葉片愈傷的誘導(dǎo)相對容易(見圖2)。高濃度的2,4-D和BA能快速誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生。較低濃度的BA或者單獨(dú)使用NAA也能誘導(dǎo)愈傷組織的產(chǎn)生,但所需時間稍長。

      3 結(jié)論與討論

      3.1 外植體采集容易

      臺灣榿木枝條光滑,無絨毛,無針刺。一年四季均有葉片更新,均可采集到幼嫩葉片,因此外植體消毒相對容易。

      3.2 初代芽誘導(dǎo)率低

      初代培養(yǎng)是繼代增殖培養(yǎng)的前提,只有誘導(dǎo)出初代芽才能進(jìn)入繼代增殖培養(yǎng)階段。從研究的結(jié)果看,誘導(dǎo)初代芽有相當(dāng)?shù)碾y度,但在高濃度的BA刺激下,仍可得到少量初代誘導(dǎo)芽。如何調(diào)整修改培養(yǎng)基成分,提高新芽誘導(dǎo)率,有待進(jìn)一步研究。

      3.3 誘導(dǎo)愈傷組織成芽將后續(xù)研究

      臺灣榿木的葉片很容易誘導(dǎo)出愈傷組織,如何誘導(dǎo)愈傷組織分化成芽及生根、移栽等后續(xù)研究工作需要繼續(xù)進(jìn)行攻關(guān)。

      參考文獻(xiàn)

      [1] 饒紅欣,蔣利媛,彭信海,等. 臺灣榿木的組織培養(yǎng)[J]. 湖南林業(yè)科技,2008,35(3):1-3.

      [2] ZWOLINSKI J B,DONALD D G,GERISCHER G F. Characteristics and wood properties of Alnus formosana successfully introduced into South Africa[J]. South Africa Forestry,1992,163: 31-35.

      [3] 鄒高順. 臺灣榿木引種造林及其培肥能力的研究[J]. 福建林學(xué)院學(xué)報,1995,16(2): 112-117.

      [4] 王金錫,朱萬澤. 臺灣榿木生態(tài)生物學(xué)特性及引種推廣前景[J]. 四川林業(yè)科技,2000,21(4): 16- 19.

      [5] 劉海龍,張日清,汪靈丹. 櫸樹葉器官再生植株技術(shù)研究[J]. 廣西林業(yè)科學(xué),2013,42(3): 231- 233.

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