血府逐瘀湯顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

狄永良，徐海波

（1．江蘇省溧陽市中醫(yī)院，江蘇 常州 213300； 2．江陰天江藥業(yè)有限公司，江蘇 無錫 214434）

血府逐瘀湯顆粒由桃仁、紅花、當(dāng)歸、生地、川芎等12味藥組方，具有活血祛瘀、行氣止痛的功效。為保證制劑質(zhì)量，本研究中采用薄層色譜（TLC）法對(duì)方中赤芍進(jìn)行了定性鑒別，采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)制劑中桃仁的主要活性成分苦杏仁苷進(jìn)行了含量測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果表明，方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可作為本制劑的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200 series型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；超聲清洗機(jī)(無錫超聲電子設(shè)備廠)；電子天平(瑞士Mettler公司)；KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器公司)。血府逐瘀湯顆粒（江陰天江藥業(yè)有限公司，批號(hào)為 200902，200903，201001）；按處方，根據(jù)鑒別的藥味，去除該藥味，按制備工藝提取，制得陰性對(duì)照品；芍藥苷（批號(hào)為111700-200501）、苦杏仁苷（批號(hào)為 110820-200403）、赤芍（批號(hào)為 110713-200609）對(duì)照品，均由中國藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 赤芍鑒別

取本品粉末2 g，加乙醇10 mL，振搖5 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取赤藥對(duì)照藥材及芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，即為對(duì)照藥材和對(duì)照品溶液。再取不含赤芍的陰性對(duì)照提取物1 g，照供試品溶液制備方法制備，制得陰性對(duì)照品溶液。照TLC法[1]試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷 -乙酸乙酯 -甲醇 -甲酸(40∶5∶10∶0．2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液則無此斑點(diǎn)，本鑒別方法具有專屬性，見圖1。

圖1 薄層色譜圖

2．2 苦杏仁苷含量測(cè)定[1-4]

2．2．1 色譜條件

色譜柱：Lichrospher C18柱（200 mm ×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇 -0．1%磷酸溶液（20∶80）；檢測(cè)波長：283 nm；柱溫：35℃ ；流速：1．0 mL ／min；理 論板數(shù)：2 253；進(jìn)樣量：10 μL。

2．2．2 溶液制備

精密稱取苦杏仁苷對(duì)照品1．95 mg，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0．195 g／L的對(duì)照品溶液。取血府逐瘀湯顆粒(批號(hào)為 200902)約 0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷，精密稱定質(zhì)量，加甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，過微孔濾膜，即得供試品溶液。另按處方，祛除桃仁，制得不含桃仁的陰性對(duì)照品，同法制得不含桃仁的陰性對(duì)照品溶液。

2．2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，按擬訂色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖和峰面積，見圖2。可見，在供試品溶液色譜中，與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液無此色譜峰，表明在此試驗(yàn)條件下，其他成分對(duì)測(cè)定無干擾，方法具有專屬性。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取苦杏仁苷對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為 0．195 g／L)2，4，6，8 mL，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度分別為 0．039，0．078，0．117，0．156 g ／L的系列對(duì)照品溶液，分別精密吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)、苦杏仁苷質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝9 137．85 X ＋4．23，r＝0．999 89。結(jié)果表明，苦杏仁苷進(jìn)樣量在0．39～1．95 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

圖2 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密吸取 2．2．2項(xiàng)下對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0．13%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取供試品溶液10 μL，按擬訂色譜條件測(cè)定，分別于 0，1，2，4，8 h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定苦杏仁苷峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為0．49%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取血府逐瘀湯顆粒約0．5 g，精密稱定，平行6份，依法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積積分值并計(jì)算含量。結(jié)果含量為（10．21 ± 0．05）mg／g， RSD 為 0．46% ，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品0．25 g，精密稱定，分別加入苦杏仁苷對(duì)照品適量，依法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 苦杏仁苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2．2．4 樣品含量測(cè)定

取樣品約0．5 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為200902，200903，201001的3批血府逐瘀湯顆粒中苦杏仁苷的平均含量分別為 10．16，10．48，10．31 mg ／g?？紤]到不同批次含量的差異，在最低含量的基礎(chǔ)上下浮20%，暫訂本品每1 g含桃仁以苦杏仁苷(C20H27O11)計(jì)，不得少于8．0 mg。

3 討論

超聲提取時(shí)間考察：超聲提取 10，20，30，40 min，苦杏仁苷的含量分別為 9．99，10．18，10．18，10．17 mg ／g。結(jié)果表明，處理20 min，苦杏仁苷含量基本不再增加，為保證提取完全，故確定超聲處理時(shí)間為30 min。

流動(dòng)相選擇：通過查閱文獻(xiàn)和現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)，選擇了3種流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行了預(yù)試驗(yàn)，分別為1號(hào)[乙腈-冰醋酸-水（16∶1∶84）]、2 號(hào)[甲醇 -0．1% 磷酸溶液（20 ∶80）]、3 號(hào)[甲醇 - 水（20 ∶80）]。經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，2號(hào)流動(dòng)相出峰較快且峰型好，適合本試驗(yàn)要求，故選擇2號(hào)流動(dòng)相。

[1]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄34-35．

[2]錢 平，劉志輝，錢 芳，等．桃仁定性鑒別與含量測(cè)定研究[J]．中國藥事，2008，24（4）：351．

[3]顏永剛．桃仁質(zhì)量研究[D]．成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2008．

[4]顏永剛，裴 瑾，萬德光．HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地和品種桃仁中苦杏仁苷[J]．中草藥，2008，39（9）：1 415．