敦煌固本方對(duì)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷小鼠股四頭肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量和相關(guān)酶活性的影響*

李希斌，彭雪晶

(甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州730000)

運(yùn)動(dòng)性疲勞的有效恢復(fù)是運(yùn)動(dòng)員、教練員及運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)工作者普遍關(guān)心的問題。在尋找安全、有效的抗運(yùn)動(dòng)性疲勞方法和途徑中，中醫(yī)藥以其副作用少、絕大多數(shù)不含興奮劑成分而日益成為國(guó)內(nèi)學(xué)者研究的熱點(diǎn)之一，也成為體育競(jìng)賽事業(yè)中的科技研究焦點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者已通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)，中藥補(bǔ)劑對(duì)提高運(yùn)動(dòng)能力，消除疲勞有一定的效果［1-3］。在本課題前期臨床研究中，選用敦煌醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)經(jīng)方“敦煌固本方(人參、黃芪、岷當(dāng)歸、馬鹿茸、橘皮、女貞子)”進(jìn)行了初步實(shí)驗(yàn)觀察。結(jié)果顯示:敦煌固本方具有顯著的抗氧化作用和機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能，初步驗(yàn)證了敦煌固本方具有防治運(yùn)動(dòng)性疲勞綜合征的顯著作用［4-5］。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定運(yùn)動(dòng)負(fù)荷小鼠股四頭肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量、線粒體Ca2+-Mg2+-ATP 酶和己糖激酶活性，用以綜合分析此方是否具有抗疲勞作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

昆明種SPF 級(jí)小鼠50 只，雌雄各半，由甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供?；A(chǔ)飼料飼養(yǎng)，食水自由，觀察小鼠進(jìn)食、活動(dòng)、睡眠情況，均確認(rèn)為健康后以備實(shí)驗(yàn)使用。SPF 級(jí)動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(甘)2011 -0001 -0002722，SPF 級(jí)實(shí)驗(yàn)設(shè)施合格證為SYXK(甘)2011 -0001 -0001167。動(dòng)物顆粒飼料由北京科奧協(xié)力飼料責(zé)任有限公司提供。

1.2 藥品與試劑

敦煌固本方處方組成:人參10 g，黃芪15 g，岷當(dāng)歸10 g，馬鹿茸1.5 g，女貞子10 g，橘皮10 g 等。上述藥材由甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中藥房提供。將藥材置于7 倍藥量的蒸餾水中浸泡1 ～2 h，煮沸30 min，過濾，為1 煎;藥渣加5 倍量蒸餾水，繼續(xù)煮沸20 min，過濾，為2 煎;將1 煎、2 煎合并，濃縮至35 mL，即配制成2 000 g 生藥/L 溶液。鈣測(cè)定試劑盒(批 號(hào) 20120422)、ATP 酶 試 劑 盒(批 號(hào)20120618)、己糖激酶測(cè)定試劑盒(批號(hào)20120604)，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 分組與給藥

小鼠購(gòu)進(jìn)后適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，然后隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和敦煌固本方高、中、低劑量組5 組，每組10 只。正常對(duì)照組、模型對(duì)照組每日灌胃生理鹽水0.4 mL，敦煌固本方低、中、高劑量組每日依次灌胃敦煌固本方藥液0.1，0.4，0.8 mL，連續(xù)30 d。除正常對(duì)照組外，其余4 組每天進(jìn)行遞增負(fù)荷游泳負(fù)荷實(shí)驗(yàn)［6］。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

每周周一、周四稱量體質(zhì)量，取平均值，觀察敦煌固本方對(duì)小鼠體質(zhì)量有無(wú)影響。30 d 給藥結(jié)束后，脫臼處死小鼠，摘取小鼠股四頭肌，用預(yù)冷的生理鹽水洗凈血污，濾紙吸干，用勻漿介質(zhì)低溫勻漿制備100 g/L 的肌勻漿液，0 ～4 ℃下以5 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心25 min，取上清液，-20 ℃保存，待測(cè)。檢測(cè)鈣離子含量、ATP 酶和己糖激酶活性［7］，操作嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)(ˉx)± 標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)。以P ＜0.05 為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠體質(zhì)量對(duì)比

各組小鼠體質(zhì)量組間對(duì)比，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1。表明:敦煌固本方對(duì)小鼠體質(zhì)量無(wú)影響。

表1 各組小鼠體質(zhì)量對(duì)比 n=10

表1 各組小鼠體質(zhì)量對(duì)比 n=10

組 別 第1 周/g 第2 周/g 第3 周/g 第4 周/g正常對(duì)照組 22.15 ±2.90 25.21 ±3.74 28.73 ±4.27 29.67 ±4.26模型對(duì)照組 22.25 ±2.73 25.06 ±1.94 27.85 ±2.74 27.91 ±3.47敦煌固本方低劑量組 22.24 ±2.47 25.10 ±1.54 29.40 ±2.72 31.55 ±2.64敦煌固本方中劑量組 22.26 ±2.37 26.05 ±2.12 28.70 ±2.47 30.45 ±2.08敦煌固本方高劑量組 22.30 ±2.35 26.18 ±2.19 29.95 ±3.46 32.17 ±2.58

2.2 各組小鼠鈣離子含量、ATP 酶活性、己糖激酶活性對(duì)比

鈣離子含量方面，模型對(duì)照組與其他各組對(duì)比，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05 或P ＜0.01)。ATP酶活性方面，模型對(duì)照組低于其他各組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05 或P ＜0.01);正常對(duì)照組與敦煌中、高劑量組對(duì)比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)。己糖激酶方面，敦煌高劑量組與其他各組對(duì)比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05 或P ＜0.01)。見表2。

表2 各組小鼠鈣離子含量、ATP 酶活性、己糖激酶活性對(duì)比 n=10 ±s

表2 各組小鼠鈣離子含量、ATP 酶活性、己糖激酶活性對(duì)比 n=10 ±s

注:與正常對(duì)照組對(duì)比，* P ＜0.05，＊＊ P ＜0.01;與模型對(duì)照組對(duì)比，# P ＜0.05，## P ＜0.01;與敦煌高劑量組對(duì)比，△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

組 別 鈣離子/(nmol·mgpro -1) Ca2+ -Mg2+ -ATP 酶/(U·mgprot -1) 己糖激酶/(U·mgprot -1)正常對(duì)照組 16.74 ±2.27## 2.141 ± 0.568#△△ 0.042 ±0.005△模型對(duì)照組 32.84 ±0.16＊＊ 1.682 ±0.612△△ 0.039 ±0.007△△敦煌低劑量組 26.16 ±1.62* # 3.542 ±1.012## 0.046 ±0.003△敦煌中劑量組 24.09 ±2.05# 4.044 ±1.522＊＊## 0.052 ±0.006△敦煌高劑量組 22.12 ±1.62# 5.572 ±0.814＊＊## 0.067 ±0.004＊＊

3 討 論

本項(xiàng)目工作假說立論于運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練耗氣傷津(表現(xiàn)為乏力、大汗、口渴、易感冒等癥狀)和“氣陰兩虛”的中醫(yī)理論，采用運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練小鼠優(yōu)化模型，以敦煌固本方進(jìn)行干預(yù)治療，從相關(guān)藥效學(xué)角度觀察該方對(duì)運(yùn)動(dòng)負(fù)荷小鼠股四頭肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量及糖代謝相關(guān)酶活性的影響，進(jìn)一步為其被開發(fā)為運(yùn)動(dòng)保健食品提供理論依據(jù)。本方組成中，人參可補(bǔ)元?dú)?黃芪營(yíng)衛(wèi)固表;鹿茸被稱為血肉有情之品，為補(bǔ)血圣藥;女貞子斂陰補(bǔ)腎。按照中醫(yī)基礎(chǔ)理論，以上各藥配伍有補(bǔ)血行氣的功效，對(duì)于從事體力活動(dòng)較多的人群有延緩或消除疲勞的作用［8］。本次研究從實(shí)驗(yàn)角度驗(yàn)證了這一假說。就鈣離子含量而言，隨著敦煌固本方給藥量的增加，由于運(yùn)動(dòng)多量導(dǎo)致胞漿內(nèi)鈣離子大量聚集得到逐漸減緩。ATP 酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上，是生物膜上的一種蛋白酶，在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換及信息傳遞方面具有重要的作用。就本研究測(cè)定的Ca2+-Mg2+-ATP 酶活力而言，服用敦煌固本方30 d 后，中、高劑量組負(fù)荷游泳運(yùn)動(dòng)小鼠股四頭肌Ca2+-Mg2+-ATP 酶活性高于正常對(duì)照、模型對(duì)照組(P ＜0.01)，說明該方可以增強(qiáng)股四頭肌中Ca2+-Mg2+-ATP 酶活性，保持組織細(xì)胞和線粒體中鈣的穩(wěn)態(tài)，從而減少負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后產(chǎn)生的過多自由基對(duì)組織細(xì)胞的損害，使組織在負(fù)荷運(yùn)動(dòng)中能夠保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能的完好狀態(tài)，避免了運(yùn)動(dòng)性損傷，延緩了運(yùn)動(dòng)性疲勞的產(chǎn)生或有助于促進(jìn)機(jī)體運(yùn)動(dòng)性疲勞消除作用［9］。就己糖激酶而言，敦煌高劑量組小鼠股四頭肌己糖激酶含量明顯高于模型對(duì)照組，說明敦煌固本方可以修復(fù)因?yàn)樨?fù)荷運(yùn)動(dòng)而造成糖酵解異常，但具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

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