參參康心膠囊對冠心病氣虛血瘀證模型小鼠TXB2、6-keto-PGF1α 的影響

劉 潔，白 鶴，劉喜平，李沛清

(1．甘肅中醫(yī)學(xué)院2011 級碩士研究生，甘肅 蘭州730000;2．甘肅中醫(yī)學(xué)院方劑教研室，甘肅 蘭州730000;3．甘肅中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)課部，甘肅 蘭州730000)

冠心病是嚴(yán)重危害人類健康的常見病，始于冠狀動脈粥樣硬化，繼而產(chǎn)生管腔狹窄或閉塞，導(dǎo)致心肌缺血缺氧。血栓素B2(TXB2)和6 酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)是一對反映血小板聚集功能與血管收縮舒張的常用指標(biāo)。文獻(xiàn)研究表明:TXB2/6-keto-PGF1α失衡導(dǎo)致冠狀動脈痙攣、血栓形成和動脈粥樣硬化，是誘發(fā)冠心病心絞痛的主要因素［1］。參參康心膠囊源于名老中醫(yī)驗方，由水蛭等3 味藥物組成，經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝加工而成，臨床應(yīng)用多年，對冠心病、心肌梗死等心肌損傷性疾病有顯著療效［2］。本研究通過觀察參參康心膠囊對冠心病氣虛血瘀證模型小鼠TXB2、6-keto-PGF1α水平的干預(yù)作用，探究其防治冠心病的作用機制，為臨床應(yīng)用提供實驗佐證。

1 材料與方法

1．1 動 物

SPF 級昆明小鼠90 只，雌雄各半，體質(zhì)量(28±2)g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，動物質(zhì)量合格證號:SCXK(甘)2011-1163。

1．2 藥品、試劑與儀器

參參康心膠囊由人參等3 味藥物按一定比例組成，蘭州中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)中心及甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實驗中心監(jiān)制，規(guī)格為每粒0．5 g，相當(dāng)于生藥1 g，用時以生理鹽水溶解為質(zhì)量分?jǐn)?shù)120 g 生藥/L的混懸液;地奧心血康膠囊，成都地奧制藥集團有限公司產(chǎn)品，批號1207010，用時以蒸餾水配制成0．003 5 g/mL的混懸液。TXB2、6-keto-PGF1αes試劑盒，南京建成生物工程研究所提供，批號20111005。UV－9100 紫外分光光度計，北京瑞利分析儀器公司產(chǎn)品;KDC－2044 低速冷凍離心機，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司產(chǎn)品。

1．3 動物分組

90 只小鼠依據(jù)雌雄、體質(zhì)量隨機分為以下6 組:空白對照組、氣虛血瘀證模型對照組(模型對照組)、氣虛血瘀證模型+地奧心血康組(地奧心血康組)、氣虛血瘀證模型+參參康心膠囊高劑量組(參參康心高劑量組)、氣虛血瘀證模型+參參康心膠囊中劑量組(參參康心中劑量組)、氣虛血瘀證模型+參參康心膠囊低劑量組(參參康心低劑量組)。

1．4 氣虛血瘀證模型的建立與給藥

參照文獻(xiàn)［3-4］，采用高脂飲食、饑餓等多因素復(fù)合方法復(fù)制氣虛血瘀證模型。空白對照組給予正常飲食，模型對照組和4 個治療組給予饑餓喂養(yǎng)，食量為正常小鼠每日攝食量的60%，飼料為高脂飼料，造模周期為4 周。給藥量按成人常規(guī)劑量折算后的劑量。地奧心血康組灌胃地奧心血康0．076 g/kg，參參康心低、中、高劑量組依次灌胃1．5，3，6 g/kg 參參康心膠囊，空白對照組和模型對照組給予等量生理鹽水，均1 d 1 次，連續(xù)給藥4 周。

1．5 心肌缺血模型的建立

氣虛血瘀證造模周期結(jié)束后，進(jìn)行心肌缺血模型的復(fù)制。6 組按30 單位/kg 劑量注射垂體后葉素，記錄注射時間，15 min 后，烏拉坦1 μg/g 麻醉小鼠，心電圖機記錄小鼠注射垂體后葉素后一定時間的Ⅱ?qū)?lián)心電圖，通過軟件記錄數(shù)據(jù)，觀察心率和T 波高度變化來判斷心肌缺血造模是否成功。

1．6 檢測指標(biāo)

心電圖檢測完成后，立即摘小鼠眼球取血，血液不經(jīng)任何處理，于室溫放置。低溫下3 500 r/min 離心15 min，取上層血清檢測TXB2、6-keto-PGF1α含量，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。酶標(biāo)儀測定吸光度值，進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。

1．7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPASS 19．0 統(tǒng)計分析軟件處理。數(shù)據(jù)以均數(shù)()±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，對符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)兩獨立樣本均數(shù)間比較用獨立樣本t檢驗;方差齊的樣本間兩兩比較采用S-N-K 檢驗，方差不齊的樣本兩兩比較采用Dunnet-t 檢驗，多個樣本間的比較采用單因素方差分析。以P＜0．05 為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2．1 各組小鼠心電圖T 波高度和心率對比

與空白對照組對比，模型對照組和各治療組心電圖的心率、T 波高度均增加，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05 或P＜0．01 )，表明心肌缺血模型復(fù)制成功。見表1。

表1 各組小鼠心電圖T 波高度和心率對比n=10，±s

表1 各組小鼠心電圖T 波高度和心率對比n=10，±s

注:與空白對照組對比，* P ＜0．05，＊＊P ＜0．01。

組 別 劑量/(g·kg－1) 心率/(次·min－1) T 波幅度/mV空白對照組 —364．27±26．63 0．267±0．078模型對照組 — 396．80±25．27* 0．207±0．031*地奧心血康組 0．076 397．58±26．76* 0．125±0．094＊＊參參康心高劑量組 6 391．78±27．21* 0．127±0．107＊＊參參康心中劑量組 3 394．62±23．48* 0．123±0．089＊＊參參康心低劑量組 1．5 388．50±22．76* 0．128±0．082＊＊

2．2 各組小鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α對比

與模型對照組對比，各治療組的TXB2含量均降低，6-keto-PGF1α含量(參參康心中劑量組除外)均升高，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05 或P＜0．01)。各治療組之間兩指標(biāo)的對比，差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05)。見表2。

表2 各組小鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α對比ng·L －1，n=10，±s

表2 各組小鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α對比ng·L －1，n=10，±s

注:與模型對照組對比，# P ＜0．05，## P ＜0．01。

組 別 劑量/(g·kg－1) TXB2 6-keto-PGF1α空白對照組 — 93．69±16．78## 247．67±12．23##模型對照組 — 122．97±23．10 227．65±17．23地奧心血康組 0．076 100．64±20．07# 243．56±12．45#參參康心高劑量組 6 96．25±23．94# 245．94±10．25##參參康心中劑量組 3 100．17±21．42# 241．37±13．43參參康心低劑量組 1．5 101．57±22．06# 240．96± 9．76#

3 討 論

臨床研究證實:氣虛血瘀是冠心病中醫(yī)證型中較為常見的類型，氣虛是本虛中最常見的證候要素，血瘀是標(biāo)實中最常見的證候要素［5］。氣虛血瘀型冠心病存在血管內(nèi)皮功能異常，并貫穿其發(fā)生發(fā)展過程的始終［6］。改善冠心病血管內(nèi)皮功能目前已成為冠心病治療研究中的一個重要靶點。

TXA2、PGI2是反應(yīng)內(nèi)皮功能的常用指標(biāo)。TXA2和PGI2是花生四烯酸在血栓素合成酶及前列環(huán)素合成酶的作用下生成的代謝產(chǎn)物。PGI2是強烈的血管舒張劑和血小板聚集抑制劑，具有抑制凝血和血栓形成等防治冠心病作用，而TXA2是強烈的血管收縮劑和血小板聚集促進(jìn)劑，其作用與PGI2相拮抗［7］。正常狀態(tài)下，TXA2、PGI2的含量正常，可保障管壁的收縮、血小板的聚集正常，同時保持血液循環(huán)通暢。病理狀態(tài)下，TXA2、PGI2的含量異常，可導(dǎo)致血管痙攣和血栓形成，也是導(dǎo)致心肌缺血、冠心病的重要原因。心肌缺血患者內(nèi)皮功能異常，TXA2/PGI2濃度異常，會出現(xiàn)血小板聚集性增強，使冠脈血流量減少，心肌耗氧量增加，促使心肌梗死或心絞痛的發(fā)生和發(fā)展［8］。由于TXA2與PGI2的性質(zhì)均不穩(wěn)定，故常測其代謝產(chǎn)物TXB2和6-keto-PGF1α水平來反映TXA2和PGI2在體內(nèi)的水平與活性。相關(guān)的冠心病中醫(yī)學(xué)研究［9－10］表明，TXB2水平與中醫(yī)證候之間存在一定的關(guān)系，氣虛血瘀狀態(tài)下，相對于其他指標(biāo)，TXB2水平明顯升高。

本研究結(jié)果顯示:模型對照組與空白對照組對比，各項指標(biāo)都存在一定的差別，提示了氣虛血瘀證可能存在血管活性物質(zhì)的改變。結(jié)果表明:參參康心膠囊可以改善氣虛血瘀型心肌缺血小鼠血清TXB2和6-keto-PGF1α的失衡，從而起到治療調(diào)節(jié)作用，并且較地奧心血康組在改善6-keto-PGF1α方面存在一定的優(yōu)勢，顯示了中醫(yī)藥辨證論治的優(yōu)勢。從實驗結(jié)果可看出:中藥的藥物濃度與藥物療效不一定成線性關(guān)系，當(dāng)超過一定量的最佳藥物濃度后，再增加藥物濃度時，藥物療效未必隨之增加。實驗結(jié)果顯示中藥組調(diào)節(jié)氣虛血瘀證可能存在不同劑量對照的靶點不同，說明了中藥和方劑起效作用可能是多靶點的，通過多方面調(diào)節(jié)起到作用。

本研究根據(jù)中醫(yī)學(xué)“方證相應(yīng)”理論，采用較為符合中醫(yī)藥辨證論治的中醫(yī)證候動物模型，以益氣活血的參參康心膠囊驗證了TXB2和6-keto-PGF1α作為氣虛血瘀證冠心病的客觀變化存在，為冠心病證的本質(zhì)研究及參參康心膠囊的開發(fā)應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

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