自噬與肺部疾病

劉 丹，王 會(huì)，胡長平

(中南大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)系，湖南 長沙 410078)

自噬(autophagy)是存在于真核細(xì)胞中的一種進(jìn)化保守性、溶酶體依賴性的亞細(xì)胞降解途徑[1]。在正常生理?xiàng)l件下，自噬發(fā)生在基礎(chǔ)水平，可以在細(xì)胞處于饑餓等應(yīng)激條件下被激活，通過降解長壽蛋白或細(xì)胞器為細(xì)胞提供物質(zhì)能量，促進(jìn)細(xì)胞存活。同時(shí)自噬的過度激活會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞功能受損和自噬性死亡[2]。自噬的激活包括三個(gè)過程，即雙層膜結(jié)構(gòu)自噬小體的形成，自噬小體與溶酶體融合及對內(nèi)容物的呈遞，以及內(nèi)容物的降解。由此產(chǎn)生的脂肪酸、氨基酸等前體分子可再次被細(xì)胞利用合成，維持細(xì)胞正常的新陳代謝[3]。

人類疾病存在復(fù)雜性，在不同的疾病模型中，自噬可能發(fā)揮著保護(hù)或有害作用，目前自噬多被認(rèn)為是細(xì)胞內(nèi)一種非特異性的維持內(nèi)穩(wěn)態(tài)的過程[4]。自噬與慢性阻塞性肺病、肺動(dòng)脈高壓、急性肺損傷、呼吸道感染和膿毒癥、肺癌等多種肺部疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[5]。

1 自噬的分子調(diào)控機(jī)制

自噬是一個(gè)進(jìn)化保守性、溶酶體依賴性的亞細(xì)胞降解途徑，根據(jù)底物進(jìn)入溶酶體途徑的不同可將自噬分為三類：大自噬(macroautophagy)、微自噬(microautophagy)和分子伴侶介導(dǎo)的自噬(chaperon-mediated autophagy，CMA)[6]。通常所說的自噬一般是指大自噬，大自噬是目前為止研究得最多最深入的一類自噬，其激活時(shí)形成的自噬小體(autophagosome)可用熒光或電子顯微鏡觀測。二十世紀(jì)90年代對酵母的遺傳研究確認(rèn)了一系列自噬相關(guān)基因(autophagy associated gene，ATG)[7]。Beclin1(即Atg6)與Class Ⅲ PI3K等大分子結(jié)合形成復(fù)合物，調(diào)控自噬小體的成核作用。微管相關(guān)蛋白輕鏈3(microtubule-associated protein 1 light chain 3B，LC3B)即Atg8是常被當(dāng)做監(jiān)測大自噬發(fā)生的特異性標(biāo)志蛋白[8]。LC3B被合成后羧基端的片段會(huì)馬上被剪切形成胞漿可溶性的LC3B Ⅰ，當(dāng)自噬被激活時(shí)LC3B Ⅰ被修飾形成膜結(jié)合形式的LC3B Ⅱ，LC3B Ⅱ被募集定位到自噬體的雙層膜上，所以LC3B Ⅱ的含量與自噬小體的數(shù)量成正比。當(dāng)自噬體和溶酶體融合后，LC3B Ⅱ即被溶酶體的水解酶降解。用Western blot檢測LC3B Ⅰ向LC3B Ⅱ轉(zhuǎn)化是目前比較公認(rèn)的確定自噬被激活的可信方法，然而，這一方法的局限性在于雖然LC3B Ⅱ的表達(dá)量可以反映自噬體的數(shù)量，但在特定時(shí)間點(diǎn)檢測到的LC3B Ⅱ并不一定是自噬激活的真實(shí)反映。LC3B Ⅱ表達(dá)的增加可能是由于自噬激活，也可能是自噬小體降解受阻所致，為了分辨上述兩種可能，在研究中需要引入自噬流(autophagy flux)的概念用以檢測自噬的動(dòng)態(tài)通量[9]。在微自噬中，溶酶體膜向內(nèi)凹陷，主動(dòng)攝取胞質(zhì)內(nèi)容物，而在分子伴侶介導(dǎo)的自噬中，一些分子伴侶如Hsc70、LAMP-2A等可幫助一些未折疊的蛋白進(jìn)入溶酶體。

目前關(guān)于自噬信號傳遞的通路比較公認(rèn)的主要有：(1)哺乳動(dòng)物類雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)信號途徑，雷帕霉素通過抑制mTOR的活性，誘導(dǎo)自噬發(fā)生[10]。mTOR是PI3K相關(guān)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，主要調(diào)控能量代謝、轉(zhuǎn)錄起始、細(xì)胞骨架組裝等與細(xì)胞生長、增殖有關(guān)的功能。新近研究發(fā)現(xiàn)mTOR信號通路參與調(diào)控自噬，生長因子、胰島素等激活mTOR信號通路可抑制自噬。mTOR以結(jié)構(gòu)和功能截然不同的兩種蛋白復(fù)合物形式存在，即mTORC1和mTORC2。mTORC1 位于PI3K/Akt信號通路下游，在營養(yǎng)充足或促有絲分裂刺激下被激活。目前，mTORC1調(diào)控自噬的具體機(jī)制和作用靶點(diǎn)尚不清楚，一般認(rèn)為mTORC1通過兩條途徑發(fā)揮作用。其一，mTORC1通過抑制Atg1和Atg13的相互作用調(diào)控自噬。Atg1/Atg13復(fù)合體的形成可激活A(yù)tg1，誘導(dǎo)自噬的形成。當(dāng)細(xì)胞處于營養(yǎng)不足狀態(tài)或用雷帕霉素處理時(shí)，mTORC1活性受到抑制，此時(shí)Atg13迅速去磷酸化，并顯現(xiàn)出對Atg1高度的親和性。其二，mTORC1通過磷酸化ULK1蛋白抑制其活性。在細(xì)胞饑餓或雷帕霉素處理?xiàng)l件下，mTORC1活性受到抑制，導(dǎo)致ULK1的去磷酸化和活化，進(jìn)而誘導(dǎo)自噬的發(fā)生[11]。(2)腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)信號途徑。AMPK主要通過兩條途徑對mTOR起抑制作用。能量缺乏時(shí)激活的AMPK直接在T1227和S1345位點(diǎn)活化TSC2，增強(qiáng)其功能，導(dǎo)致TSC1/TSC2下游靶點(diǎn)mTOR1被抑制?；蛘逜MPK通過直接磷酸化mTOR的結(jié)合伴侶Raptor抑制后者和mTORC1的活性[12]。此外，AMPK還可以直接與ULK1結(jié)合并使其磷酸化調(diào)控自噬。ULK1在饑餓狀態(tài)下調(diào)控ATG9定位，提高自噬效率[13]。(3)Bcl-2家族蛋白信號途徑。Bcl-2家族蛋白最初被定義為細(xì)胞存亡的重要調(diào)控因子，最近有報(bào)道指出Bcl-2家族也參與自噬的調(diào)節(jié)[14-15]。其中抗凋亡的Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-wl和Mcl-1抑制自噬；相反，促凋亡的Bad、Bik、Noxa等則誘導(dǎo)自噬。Bcl-2家族蛋白主要通過Beclin 1發(fā)揮對自噬的調(diào)控作用?？沟蛲龅鞍兹鏐cl-2可以通過BH3受體域作用從而抑制Beclin1依賴的自噬。營養(yǎng)不足時(shí)，Bcl-2與Beclin1的相互作用受到抑制，導(dǎo)致游離Beclin1增多，自噬激活[16]。(4)腫瘤抑制蛋白p53信號途徑。p53是一種可以使癌細(xì)胞滅活或突變的的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。離體和在體實(shí)驗(yàn)證明，p53主要來自胞質(zhì)，其失活可以誘導(dǎo)自噬[17]；另外，很多自噬誘導(dǎo)劑可以速進(jìn)蛋白酶降解p53，而p53的降解又可以抑制自噬的激活。相反，核內(nèi)p53以轉(zhuǎn)錄調(diào)控的形式，通過促進(jìn)自噬誘導(dǎo)基因如DRAM的表達(dá)誘導(dǎo)自噬[18]。此外，p53還可以通過抑制mTOR激活自噬，p53的靶基因sestrin1和sestrin2已經(jīng)被證實(shí)是p53活化和mTOR抑制的中間橋梁。因此p53對自噬的調(diào)控是雙向的，其具體方向取決于p53在細(xì)胞內(nèi)的定位。

2 自噬與肺部疾病

2.1 自噬與慢性阻塞性肺病

慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)以不完全氣流受限為特征，伴有氣管、肺實(shí)質(zhì)和肺血管病變，其組織破壞包括肺氣腫、支氣管炎和肺纖維化[19]。COPD患者肺部可觀察到自噬小體數(shù)量增加和LC3B Ⅱ表達(dá)升高，同時(shí)其他自噬相關(guān)蛋白Atg4、Atg5-Atg12復(fù)合物和Atg7也相應(yīng)表達(dá)上調(diào)[20]。COPD患者肺部自噬小體的聚集可能是自噬流受損的結(jié)果[20]。在LC3B基因敲除小鼠，肺氣腫導(dǎo)致的氣道擴(kuò)張程度與野生型小鼠相比明顯降低[21]。在COPD中，自噬究竟是直接促進(jìn)了肺泡上皮細(xì)胞的死亡還是有其他通路參與，尚不清楚。吸煙是導(dǎo)致COPD最公認(rèn)的危險(xiǎn)因素。研究表明，自噬蛋白在吸煙誘導(dǎo)的肺氣腫中具有重要作用[20]；LC3B和Beclin 1是調(diào)控自噬過程的兩個(gè)重要蛋白，將兩者基因沉默后可抑制香煙煙霧提取物誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞死亡[22]；香煙煙霧處理的巨噬細(xì)胞中自噬過程受損，這種損傷也存在于吸煙者的肺泡巨噬細(xì)胞中，并被認(rèn)為導(dǎo)致了吸煙者的復(fù)發(fā)性感染，香煙煙霧處理會(huì)阻礙細(xì)菌向溶酶體的遞送[22]。

研究證明，mTOR信號通路也與香煙煙霧誘導(dǎo)的COPD和肺氣腫有關(guān)。RTP 801是一種DNA損傷應(yīng)答基因，在香煙煙霧處理后表達(dá)上調(diào)，并被證實(shí)會(huì)穩(wěn)定mTOR通路抑制復(fù)合物TSC1-TSC2，導(dǎo)致氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞死亡加劇。RTP801可以解離TSC2抑制蛋白14-3-3，使得TSC1-TSC-2復(fù)合物阻斷mTOR活性，進(jìn)而影響自噬活力[23]。mTOR抑制劑雷帕霉素可以降低肺泡炎癥反應(yīng)，對暴露于香煙煙霧中的野生型小鼠有保護(hù)作用[23]。相反地，雷帕霉素可以增加對照組小鼠肺泡上皮細(xì)胞凋亡和炎性細(xì)胞數(shù)目，并且減弱RTP801敲除對香煙煙霧暴露組小鼠的保護(hù)作用[23]。這些研究說明時(shí)間點(diǎn)和靶細(xì)胞的不同可能會(huì)決定抑制mTOR在疾病進(jìn)程中是有利還是有害因素。

到目前為止，關(guān)于自噬在COPD中作用的研究主要集中在經(jīng)典的非選擇性自噬。有研究表明，選擇性自噬如線粒體自噬，也可能在COPD中發(fā)揮著重要的作用[24]。治療COPD的藥物應(yīng)當(dāng)可以平衡自噬的清除和流通，避免自噬小體的過度累積，或者是能夠影響mTOR信號通路。此外，近期研制出的化學(xué)伴侶也可被用作治療藥物，在COPD導(dǎo)致的氧化應(yīng)激條件下，仍然保持蛋白的正常功能[25]。而進(jìn)一步了解自噬蛋白的細(xì)胞保護(hù)和促凋亡作用的關(guān)系，還需要在COPD病程中對自噬過程進(jìn)行干擾。

2.2 自噬與肺動(dòng)脈高壓

肺動(dòng)脈高壓是指靜息狀態(tài)下肺動(dòng)脈壓持續(xù)高于25 mmHg或者運(yùn)動(dòng)狀態(tài)下高于30 mmHg，平均肺毛細(xì)血管楔壓和左心室舒張末壓低于15 mmHg。低氧可以導(dǎo)致繼發(fā)性肺動(dòng)脈高壓，低氧誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓通常是慢性肺部疾病進(jìn)展型的致死性并發(fā)癥[26]。研究表明，在肺動(dòng)脈高壓患者肺部自噬水平升高。小鼠低氧肺動(dòng)脈高壓時(shí)肺組織中自噬體數(shù)量增多，LC3B表達(dá)上調(diào)；與野生型小鼠相比，LC3B-/-小鼠的肺動(dòng)脈高壓易感性增加；在LC3B基因沉默的人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，低氧誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖被增強(qiáng)[27]。這些結(jié)果都說明自噬蛋白LC3B在肺動(dòng)脈高壓病程中可能起著保護(hù)性作用。

另一方面，已有研究報(bào)道在肺發(fā)育過程中，自噬與血管新生受損有關(guān)[28]。肺動(dòng)脈高壓胎羊的肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞血管新生功能受損，但是抑制自噬或者敲除自噬蛋白Beclin 1可以改善血管新生。這說明在肺部發(fā)育過程中，自噬可能導(dǎo)致了肺動(dòng)脈高壓病程的惡化。從臨床角度來說，選擇合適的時(shí)間點(diǎn)介導(dǎo)自噬對于肺動(dòng)脈高壓的治療具有重要意義。更進(jìn)一步的研究還需要闡明自噬的功能意義以及自噬是如何在肺動(dòng)脈高壓發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用的。

2.3 自噬與急性肺損傷

急性肺損傷是一種突發(fā)性的，以雙側(cè)肺浸潤和非心臟器官血氧不足為表現(xiàn)的臨床綜合征[29]。急性肺損傷發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，與膿毒癥、高氧、外傷、藥物或異生污染物暴露、機(jī)械通氣等有關(guān)。臨床上對重癥呼吸衰竭病人進(jìn)行監(jiān)護(hù)時(shí)，需要機(jī)械通氣給予高濃度氧氣。然而，長期暴露于高氧環(huán)境中可導(dǎo)致肺損傷。LC3B在肺泡上皮細(xì)胞中調(diào)控高氧誘導(dǎo)的凋亡路徑[30]。高氧誘導(dǎo)自噬小體的形成以及LC3B Ⅰ向LC3B Ⅱ的轉(zhuǎn)化[30]。siRNA干擾LC3B，高氧暴露后干擾組細(xì)胞活力下降[30]。此外，高氧條件下，LC3B還被證實(shí)可與Fas死亡誘導(dǎo)信號復(fù)合物相關(guān)的凋亡途徑相互作用[30]。這些研究都說明LC3B可能潛在地通過干擾或抑制凋亡路徑對高氧條件下的細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用。除了LC3B，其他自噬蛋白也可能與Fas依賴的信號通路發(fā)生動(dòng)態(tài)相互作用，特別是p62、LC3B與Atg3相互作用，使LC3B調(diào)控Fas的機(jī)制更為復(fù)雜[31]。

研究表明，在高氧模型中，低濃度的一氧化碳(CO)可作為一種新型治療干預(yù)手段[32]。CO可以上調(diào)小鼠肺部以及原代人肺泡細(xì)胞和人支氣管上皮細(xì)胞中LC3B的表達(dá)，運(yùn)用電鏡手段和綠色熒光蛋白分析顯示上皮細(xì)胞中自噬小體形成增多[32]。以上自噬活性的增加可以被抗氧化劑NAC和Mito-TEMPO抑制，說明CO通過活性氧促進(jìn)自噬；此外，siRNA干擾LC3B后可部分抵消CO對高氧條件下細(xì)胞的保護(hù)作用，可見LC3B在CO發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)性作用的過程中扮演著重要的角色[32]。這些研究進(jìn)一步支持了一個(gè)概念，即自噬蛋白，如LC3B，可能參與構(gòu)成維持細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡的信號網(wǎng)絡(luò)，決定細(xì)胞在應(yīng)激狀態(tài)下的命運(yùn)。因此，自噬蛋白可能被視作一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)，調(diào)控高氧誘導(dǎo)的急性肺損傷，在此之前還需要對急性肺損傷的病理機(jī)制和自噬調(diào)控的具體過程有更深刻的認(rèn)識(shí)[33]。

2.4 自噬與呼吸道感染及膿毒癥

前面已經(jīng)提到，在香煙煙霧處理的肺泡巨噬細(xì)胞和COPD患者肺部，微生物和異生污染物的清除功能受損[34]。自噬與肺部在對細(xì)菌、病毒和原蟲感染應(yīng)答過程有密切聯(lián)系[7]。自噬在呼吸系統(tǒng)結(jié)核分枝桿菌感染中的作用研究得已比較明確。免疫相關(guān)GTP 酶(immunity-related GTPase M，IRGM)基因的多態(tài)性與結(jié)核分枝桿菌易感性升高有關(guān)，而IRGM被證實(shí)可以誘導(dǎo)自噬清除細(xì)胞內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌[35]。可以調(diào)控結(jié)核分枝桿菌存活的宿主基因全基因組分析顯示一系列的基因參與調(diào)控了自噬，Atg7基因突變的果蠅感染海洋結(jié)核分枝桿菌后，使用抗結(jié)核分枝桿菌治療無效，存活率明顯下降。而使用抗結(jié)核藥異煙肼激活自噬后可以抑制結(jié)核分枝桿菌在巨噬細(xì)胞中誘導(dǎo)的促炎癥反應(yīng)[36]。大量涉及到增強(qiáng)自噬活性的療法被證實(shí)可有效抗結(jié)核分枝桿菌感染?？乖鷦?dòng)物藥硝唑尼特及其活性代謝產(chǎn)物替唑尼特可以有效促進(jìn)自噬、抑制mTORC1信號通路和細(xì)胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌的增殖[37]，另外，維生素D被證實(shí)可以激活自噬，對HIV和結(jié)核分枝桿菌感染患者有治療效果[38]。有意思的是，HIV也可以通過操控自噬來提高自身的侵染性，通常被操作的靶點(diǎn)即IRGM基因[39]。

綜上所述，這些研究都強(qiáng)調(diào)了宿主自噬功能在抗結(jié)核分枝桿菌中的重要性。已經(jīng)有研究報(bào)道印度出現(xiàn)完全抗藥性結(jié)核病的原因，并引起完全抗藥性結(jié)核菌將在全世界流行的擔(dān)憂[40]。為了對抗耐藥性發(fā)展，需要與傳統(tǒng)抗結(jié)核藥作用機(jī)制不同的新型治療藥物。盡管一些促進(jìn)自噬的藥物可以作為一種輔助治療手段來增強(qiáng)傳統(tǒng)抗結(jié)核藥的療效，但是這些藥物中有些具有免疫抑制等不良反應(yīng)，如雷帕霉素。其他副作用較小的藥物，如二甲雙胍或卡馬西平可能有更好的療效[40-41]。

最后，自噬被認(rèn)為與炎癥的調(diào)控有關(guān)，尤其是與炎性體通路有關(guān)。最近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)[42]，在核苷酸寡聚化域樣受體3(NALP-3)依賴的炎癥反應(yīng)中，自噬能保持線粒體的完整性，并將產(chǎn)生活性氧的有害線粒體與炎性體復(fù)合物隔離開，抑制炎癥反應(yīng)[43]。內(nèi)毒素血癥和盲腸結(jié)扎穿刺小鼠是常用的兩種研究膿毒癥的模型。LC3B敲除的小鼠與對照組相比，對脂多糖或盲腸結(jié)扎穿刺所致膿毒癥更具易感性；LC3B-/-膿毒癥小鼠與野生型膿毒癥小鼠相比，血清中IL-1β和IL-18明顯升高[43]。這些結(jié)果說明自噬可在膿毒癥中調(diào)控與該病相關(guān)的細(xì)胞因子釋放，提示宿主自噬在細(xì)胞因子對感染的應(yīng)答過程中起著重要作用。在體增強(qiáng)自噬的藥物可能對膿毒癥有治療效果，在阻塞性黃疸小鼠模型中，海帕西啶可通過自噬對抗脂多糖誘導(dǎo)的肝損傷[44]。低濃度的CO因其能激活自噬可有效阻止脂多糖對各器官造成的損傷，ES-62是一種由線蟲分泌的免疫調(diào)制劑，對內(nèi)毒素休克和多種微生物感染性休克小鼠有保護(hù)作用，其機(jī)制為激活Toll樣受體4介導(dǎo)的自噬[45-46]?？紤]到目前感染性休克治療的局限性，與自噬機(jī)制相關(guān)的治療方法可能為攻克這一威脅生命的頑疾奠定基礎(chǔ)。

2.5 自噬與肺癌

在多種人類腫瘤中存在有自噬活性的改變，腫瘤的增殖、凋亡信號途徑與自噬信號途徑相互交錯(cuò)影響，自噬與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Beclin1 是與Bcl-2 相互影響的蛋白質(zhì)，且在許多人類癌癥中(包括乳腺、卵巢和前列腺癌)等位基因頻繁缺失[47]。Beclin1 為一種抑癌基因，Beclin1+/-小鼠呈現(xiàn)出原發(fā)性惡性腫瘤高發(fā)狀態(tài)，包括淋巴瘤、肝癌及肺癌[48]。對術(shù)后的115 名非小細(xì)胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)患者研究發(fā)現(xiàn)，存在著大量核樣結(jié)構(gòu)(stone-like structures，SLS)，表明自噬過度，這與NSCLC 較低存活率可能密切相關(guān)[49]。Atg5 和Beclin-1 的敲除，使輻射狀態(tài)下H460 肺癌細(xì)胞的存活率增加[50]。自噬可在肺癌細(xì)胞中被表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine-kinase inhibitor，TKIs)激活，抑制自噬增強(qiáng)了EGFR-TKIs 的生長抑制作用[51]。另有報(bào)道，腫瘤抑制蛋白101F6 和抗壞血酸鹽經(jīng)過不依賴caspase 的凋亡和自噬途徑，能協(xié)同抑制非小細(xì)胞肺癌的生長[52]。綜上提示，自噬與肺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，調(diào)節(jié)自噬可能是肺癌治療的新靶點(diǎn)。

3 結(jié)論與展望

綜上所述，自噬在肺部疾病發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著復(fù)雜的作用，當(dāng)被適時(shí)激活時(shí)，自噬可以促進(jìn)細(xì)胞的存活，清除有害的蛋白聚合體、細(xì)菌和病毒，轉(zhuǎn)移受損的細(xì)胞器，如線粒體。反之，如果自噬小體的流通或者自噬流受損，自噬就會(huì)對細(xì)胞有害，裝載有蛋白質(zhì)或感染物的自噬小體在細(xì)胞內(nèi)聚集，會(huì)促進(jìn)細(xì)胞死亡途徑，但是自噬直接促進(jìn)細(xì)胞凋亡性死亡的具體機(jī)制目前還不十分明確。闡明自噬小體形成及自噬促進(jìn)細(xì)胞碎片或有害蛋白質(zhì)、細(xì)胞器清除的機(jī)制不僅對多種不同的肺部疾病的治療具有重要意義，還可能對一系列人類其他疾病的治療產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。未來對肺部的其他自噬通路的進(jìn)一步研究，如選擇性自噬、分子伴侶介導(dǎo)的自噬、微自噬等將為新的治療手段的開發(fā)提供新的靶點(diǎn)和思路。

[1]Mizushima N,Komatsu M.Autophagy:renovation of cells and tissues [J].Cell,2011,147(4):728-741.

[2]Smith TG,Robbins PA,Ratcliffe PJ.The human side of hypoxia-inducible factor [J].Br J Haematol,2008,141(3):325-334.

[3]Araya J,Hara H,Kuwano K.Autophagy in the pathogenesis of pulmonary disease [J].Intern Med,2013,52(20):2295-2303.

[4]Mizumura K,Cloonan SM,Haspel JA，et al.The emerging importance of autophagy in pulmonary diseases [J].Chest,2012,142(5):1289-1299.

[5]Pak O,Aldashev A,Welsh D,et al.The effects of hypoxia on the cells of the pulmonary vasculature [J].Eur Respir J,2007,30(2):364-372.

[6]Klionsky DJ,Cregg JM,Dunn WA Jr,et al.A unified nomenclature for yeast autophagy-related genes [J].Dev Cell,2003,5(4):539-545.

[7]Levine B,Mizushima N,Virgin HW.Autophagy in immunity and inflammation [J].Nature,2011,469(7330):3233-3235.

[8]Kabeya Y,Mizushima N,Yamamoto A,et al.LC3,GABARAP and GATE16 localize to autophagosomal membrane depending on form-Ⅱ formation [J].J Cell Sci,2004,117(13):280528-280612.

[9]Mizushima N,Yoshimori T,Levine B.Methods in mammalian autophagy research [J].Cell,2010,140(3):313-326.

[10]Jung CH,Ro SH,Cao J,et al.mTOR regulation of autophagy [J].FEBS Lett,2010,584(7):1287-1295.

[11]Kamada Y,Funakoshi T,Shintani T,et al.Tor-mediated induction of autophagy via an apg1 protein kinase complex [J].J Cell Biol,2000,150(6):1507-1513.

[12]Carling D,Sanders MJ,and Woods A.The regulation of AMP-activated protein kinase by upstream kinases [J].Int J Obes,2008,32 (4):S55-S59.

[13]Mack HI,Zheng B,Asara JM,et al.AMPK-dependent phosphorylation of ULK1 regulates ATG9 localization [J].Autophagy,2012,8(8):1197-1214.

[14]Shimizu S,Kanaseki T,Mizushima N,et al.Role of bcl-2 family proteins in a non-apoptotic programmed cell death dependent on autophagy genes [J].Nat Cell Biol,2004,6(12):1221-1228.

[15]Djavaheri-Mergny M,Maiuri MC,Kroemer G.Cross talk between apoptosis and autophagy by caspase-mediated cleavage of beclin 1 [J].Oncogene,2010,29(12):1717-1729.

[16]Pattingre S,Tassa A,Qu X,et al.Bcl-2 antiapoptotic proteins inhibit beclin 1-dependent autophagy [J].Cell,2005,122(6):927-939.

[17]Tasdemir E,Maiuri MC,Galluzzi L,et al.Regulation of autophagy by cytoplasmic p53 [J].Nat Cell Biol,2008,10(6):676-687.

[18]Crighton D,Wilkinson S,O'Prey J,et al.DRAM,a p53-induced modulator of autophagy,is critical for apoptosis [J].Cell,2006,126(1):121-134.

[19]Dal-Ré R.Worldwide clinical interventional studies on leading causes of death:a descriptive analysis [J].Ann Epidemiol,2011,21(10):727-731.

[20]Chen ZH,Kim HP,Sciurba FC,et al.Egr-1 regulates autophagy in cigarette smoke-induced chronic obstructive pulmonary disease [J].PLoS ONE,2008,3 (10):e3316.

[21]Chen ZH,Lam HC,Jin Y,et al.Autophagy protein microtubuleassociated protein 1 light chain-3B(LC3B) activates extrinsic apoptosis during cigarette smoke-induced emphysema [J].Proc Natl Acad Sci USA,2010,107(44):18880-18885.

[22]Monick MM,Powers LS,Walters K,et al.Identification of an autophagy defect in smokers’ alveolar macrophages [J].J Immunol,2010,185(9):5425-5435.

[23]Yoshida T,Mett I,Bhunia AK,et al.Rtp801,a suppressor of mTOR signaling,is an essential mediator of cigarette smoke-induced pulmonary injury and emphysema[J].Nat Med,2010,16(7):767-773.

[24]Stanojkovic I,Kotur-Stevuljevic J,Milenkovic B,et al.Pulmonary function,oxidative stress and inflammatory markers in severe COPD exacerbation [J].Respir Med,2011,105(1):S31-S37.

[25]Semenza GL.Oxygen sensing,homeostasis,and disease [J].N Engl J Med,2011,365(6):537-547.

[26]Lee SJ,Smith A,Guo L,et al.Autophagic protein LC3B confers resistance against hypoxia-induced pulmonary hypertension [J].Am J Respir Crit Care Med,2011,183(5):649-658.

[27]Teng RJ,Du J,Welak S,et al.Cross talk between NADPH oxidase and autophagy in pulmonary artery endothelial cells with intrauterine persistent pulmonary hypertension [J].Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol,2012,302(7):L651-663.

[28]Herridge MS,Angus DC.Acute lung injury--affecting many lives [J].N Engl J Med,2005,353(16):1736-1738.

[29]Tanaka A,Jin Y,Lee SJ,et al.Hyperoxia induced LC3B interacts with the Fas apoptotic pathway in epithelial cell death[J].Am J Respir Cell Mol Biol,2011,46(4):507-514.

[30]Oral O,Oz-Arslan D,Itah Z,et al.Cleavage of Atg3 protein by caspase-8 regulates autophagy during receptor-activated cell death [J].Apoptosis,2012,17(8):810-820.

[31]Lee SJ,Ryter SW,Xu JF,et al.Carbon monoxide activates autophagy via mitochondrial reactive oxygen species formation [J].Am J Respir Cell Mol Biol,2011,45(4):867-873.

[32]Jin Y,Tanaka A,Choi AM,et al.Autophagic proteins:new facets of the oxygen paradox [J].Autophagy,2012,8(3):426-828.

[33]Monick MM,Powers LS,Walters K,et al.Identification of an autophagy defect in smokers' alveolar macrophages [J].J Immunol,2010,185(9):5425-5435.

[34]Intemann CD,Thye T,Niemann S,et al.Autophagy gene variant IRGM -261T contributes to protection from tuberculosis caused by Mycobacterium tuberculosis but not by M.africanum strains [J].PLoS Pathog,2009,5(9):e1000577.

[35]Kumar D,Nath L,Kamal MA,et al.Genome-wide analysis of the host intracellular network that regulates survival of mycobacterium tuberculosis [J].Cell,2010,140(5):731-743.

[36]Kim JJ,Lee HM,Shin DM,et al.Host cell autophagy activated by antibiotics is required for their effective antimycobacterial drug action [J].Cell Host Microbe,2012,11(5):457-468.

[37]Campbell GR,Spector SA.Vitamin D inhibits human immunodeficiency virus type 1 and Mycobacterium tuberculosis infection in macrophages through the induction of autophagy [J].PLoS Pathog,2012,8(5):e1002689.

[38]Grégoire IP,Richetta C,Meyniel-Schicklin L,et al.IRGM is a common target of RNA viruses that subvert the autophagy network [J].PLoS Pathog,2011,7(12):e1002422.

[39]Parida SK,Axelsson-Robertson R,Rao MV,et al.Totally drug-resistant tuberculosis in India [J].Clin Infect Dis,2012,54(4):579-581.

[40]Buzzai M,Jones RG,Amaravadi RK,et al.Systemic treatment with the antidiabetic drug metformin selectively impairs p53-deficient tumor cell growth [J].Cancer Res,2007,67(14):6745-6752.

[41]Hidvegi T,Ewing M,Hale P,et al.An autophagy-enhancing drug promotes degradation of mutant alpha1-antitrypsin Z and reduces hepatic fibrosis [J].Science,2010,329(5988):229-232.

[42]Zhou R,Yazdi AS,Menu P,et al.A role for mitochondria in NLRP3 inflammasome activation [J].Nature,2011,469(7329):221-225.

[43]Nakahira K,Haspel JA,Rathinam VA,et al.Autophagy proteins regulate innate immune responses by inhibiting the release of mitochondrial DNA mediated by the NALP3 inflammasome [J].Nat Immunol,2011,12(3):222-230.

[44]Huang YH,Yang YL,Tiao M,et al.Hepcidin protects against lipopolysaccharide induced liver injury in a mouse model of obstructive jaundice [J].Peptides，2012，35(2):212-217.

[45]Constantin M,Choi AJ,Cloonan SM,et al.Therapeutic potential of heme oxygenase-1/carbon monoxide in lung disease [J].Int J Hypertens,2012,2012:859235.

[46]Puneet P,McGrath MA,Tay HK,et al.The helminth product ES-62 protects against septic shock via Toll-like receptor 4-dependent autophagosomal degradation of the adaptor MyD8 [J].Nat Immunol,2012,12(4):344-351.

[47]Kondo Y,Kanzawa T,Sawaya R,et al.The role of autophagy in cancer development and response to therapy [J].Nat Rev Cancer,2005,5(9):726-734.

[48]Qu X,Yu J,Bhagat G,et al.Promotion of tumorigenesis by heterozygous disruption of the beclin 1 autophagy gene [J].J Clin Invest,2003,112(12):1809-1820.

[49]Karpathiou G,Sivridis E,Koukourakis MI,et al.Light-chain 3A autophagic acivity and prognostic significance in non-small cell lung carcinomas [J].Chest,2010,140(1):127-134.

[50]Yue Z,Jin S,Yang C,et al.Beclin 1,an autophagy gene essential for early embryonic development,is a haploinsufficient tumor suppressor [J].Proc Natl Acad Sci USA,2003,100(25):15077-15082.

[51]Han W,Pan H,Chen Y,et al.EGFR tyrosine kinase inhibitors activate autophagy as a cytoprotective response in human lung cancer cells [J].PLoS One,2011,6(6):e18691.

[52]Ohtani S,Iwamaru A,Deng W,et al.Tumor suppressor 101F6 and ascorbate synergistically and selectively inhibit non-small cell lung cancer growth by caspase-independent apoptosis and autophagy [J].Cancer Res,2007,67(13):6293-6303.