Smad2蛋白在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸浸潤(rùn)癌中的表達(dá)及意義

[摘要] 目的 研究Smad2蛋白在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸浸潤(rùn)癌中的表達(dá)，及與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。 方法 選擇宮頸上皮瘤變組織樣本67例（CIN組），宮頸浸潤(rùn)癌組織樣本53例（ICC組），正常宮頸組織樣本30例（NCE組），采用免疫組化SP法檢測(cè)各組織中Smad2蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸浸潤(rùn)癌組織中Smad2陽(yáng)性率、染色程度得分、陽(yáng)性細(xì)胞占比得分及表達(dá)強(qiáng)度比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。CIN1級(jí)、CIN2級(jí)、CIN3級(jí)Smad2陽(yáng)性率和表達(dá)強(qiáng)度得分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表達(dá)強(qiáng)度得分與宮頸上皮內(nèi)瘤變分級(jí)呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。Smad2在宮頸浸潤(rùn)癌組陽(yáng)性表達(dá)與病理分級(jí)有關(guān)（P<0.05）。 結(jié)論 Smad2蛋白在宮頸浸潤(rùn)癌組織中的表達(dá)低于正常宮頸組織和宮頸上皮內(nèi)瘤變組織，Smad2蛋白與宮頸上皮內(nèi)瘤變病變程度有關(guān)，且與宮頸浸潤(rùn)癌惡性程度有關(guān)。Smad2蛋白低表達(dá)可能在宮頸癌前病變進(jìn)展及宮頸癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用。

[關(guān)鍵詞] 宮頸癌；浸潤(rùn)癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變；Smad2

[中圖分類(lèi)號(hào)] R713.44 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）29-0069-03

宮頸癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，我國(guó)發(fā)病率呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，并向年輕化發(fā)展，病死率高。宮頸上皮內(nèi)瘤變屬宮頸良性病變，被認(rèn)為是宮頸原位癌前病變，隨著病變程度進(jìn)展將可能發(fā)展為宮頸原位癌，是早期宮頸癌篩查的高危人群。Smads蛋白家族是TGF-β唯一作用底物，其中Smad2蛋白是一種潛在的抑癌基因[1]。本研究通過(guò)對(duì)正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸浸潤(rùn)癌組織中Smads2蛋白的表達(dá)，探討Smads2蛋白在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

選擇2010年2月～2012年12月在嘉興市婦幼保健院行手術(shù)或病理活檢的150例患者宮頸組織樣本，其中宮頸上皮瘤變組織樣本67例（CIN組），宮頸浸潤(rùn)癌組織樣本53例（ICC組），正常宮頸組織樣本30例（NCE組），均經(jīng)病理學(xué)診斷證實(shí)。年齡28～69歲，平均（49.38±10.84）歲。CIN1級(jí)23例，CIN2級(jí)28例，CIN3級(jí)16例。宮頸浸潤(rùn)癌組織學(xué)類(lèi)型：鱗癌22例，腺癌31例；按國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)（UICC）TNM標(biāo)準(zhǔn)臨床分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期20例，Ⅲ期19例；病理分級(jí)：Ⅰ級(jí)15例，Ⅱ級(jí)19例，Ⅲ級(jí)19例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例。

1.2試劑與儀器

兔抗人Smad2單克隆抗體購(gòu)自通派（上海）生物科技有限公司，DAB顯色劑、即用型快捷免疫組化檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.3免疫組化檢測(cè)

所有樣本石蠟包埋以4 μm厚度連續(xù)切片，常規(guī)進(jìn)行二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水、H2O2滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，高溫水浴修復(fù)抗原，采用即用型快捷免疫組化檢測(cè)試劑盒以免疫組化SP法檢測(cè)樣本Smad2水平，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照，DAB顯色、蘇木精復(fù)染、脫水、透明、封片。

1.4 結(jié)果判定[2]

細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核染色呈黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性，根據(jù)染色程度和陽(yáng)性細(xì)胞占比評(píng)價(jià)染色結(jié)果：無(wú)染色為0分、淡黃色為1分、棕色2分、深棕色為3分；在高倍光鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞占比，<10%計(jì)0分、10%～25%計(jì)1分、26%～50%計(jì)2分，>50%計(jì)3分。表達(dá)強(qiáng)度以兩項(xiàng)得分之和表示： 0～1分為陰性（﹣），2～4分為陽(yáng)性（+），5～7分為中度陽(yáng)性（++），>7分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用Chi-Square檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，采用ANOVA，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，等級(jí)相關(guān)性采用Spearman相關(guān)系數(shù)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Smad2在宮頸組織中的染色

Smad2染色定主要位于細(xì)胞質(zhì)，少量位于細(xì)胞核，宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸浸潤(rùn)癌組織中染色程度較正常宮頸組織淺，呈黃色，宮頸浸潤(rùn)癌組織中染色程度較CIN組織淺，呈淡黃色或無(wú)染色。正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸浸潤(rùn)癌組織中Smad2陽(yáng)性率、染色程度得分、陽(yáng)性細(xì)胞占比得分及表達(dá)強(qiáng)度比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見(jiàn)表1。

2.2 Smad2在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達(dá)

CIN1級(jí)、CIN2級(jí)、CIN3級(jí)Smad2陽(yáng)性率和表達(dá)強(qiáng)度得分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表達(dá)強(qiáng)度得分與宮頸上皮內(nèi)瘤變分級(jí)呈負(fù)相關(guān)（r=0.392，P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3 Smad2在宮頸浸潤(rùn)癌組織中表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

Smad2在宮頸浸潤(rùn)癌組陽(yáng)性表達(dá)與病理分級(jí)有關(guān)（P<0.05），與年齡、組織學(xué)類(lèi)型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理學(xué)特征無(wú)關(guān)（P>0.05），見(jiàn)表3。

3 討論

Smads蛋白家族是最早被發(fā)現(xiàn)的TGF-β受體激酶底物，在細(xì)胞質(zhì)中介導(dǎo)TGF-β信號(hào)通路傳導(dǎo)，主要分為途徑抑制型、共同中介型和抑制型[3]。TGF-β在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中具有抑制和促進(jìn)的雙重作用，正常組織中TGF-β延續(xù)抑制細(xì)胞增殖作用抑制腫瘤生長(zhǎng)，在腫瘤組織中則由于信號(hào)通路蛋白基因突變所介導(dǎo)的TGF-β失去對(duì)腫瘤的抑制作用，轉(zhuǎn)變?yōu)榇龠M(jìn)腫瘤細(xì)胞活性[4-6]。Smad2蛋白屬Smads蛋白家族中途徑抑制型蛋白，是脊椎動(dòng)物TGF-β和活化素受體底物的，可被TGF-β激活后與共同中介型Smad蛋白結(jié)合形成符合物入核參與靶基因轉(zhuǎn)錄[7，8]。實(shí)驗(yàn)研究顯示，Smad2蛋白在宮頸癌組織中表達(dá)異常，可能在TGF-β促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)生物學(xué)途徑中起抑制作用，是潛在的抑癌基因[9，10]。

本研究對(duì)比正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和宮頸浸潤(rùn)癌組織中Smad2蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示，Smad2蛋白染色顆粒主要位于細(xì)胞質(zhì)，正常宮頸組織染色程度均較良性病變和惡性病變組織更深，標(biāo)本陽(yáng)性率和陽(yáng)性細(xì)胞占比均更多，表達(dá)強(qiáng)度更強(qiáng)，表明Smad2蛋白在正常組織中的表達(dá)水平高，而病變組織中，尤其是惡性病變組織中卻呈現(xiàn)顯著降低的現(xiàn)象，提示其在細(xì)胞惡變過(guò)程中可能發(fā)生了生物學(xué)改變。由于宮頸上皮內(nèi)瘤高分級(jí)病變進(jìn)展為宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)高，且病變程度與宮頸癌發(fā)生密切相關(guān)[11，12]，本研究對(duì)宮頸上皮內(nèi)瘤變不同病變程度組織中Smad2蛋白表達(dá)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，不同分級(jí)的宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中Smad2蛋白陽(yáng)性率和表達(dá)強(qiáng)度得分均存在顯著性差異，CIN1級(jí)組織中陽(yáng)性率和表達(dá)強(qiáng)度得分最高，而CIN3級(jí)組織中陽(yáng)性率和表達(dá)強(qiáng)度得分最低，說(shuō)明Smad2蛋白的表達(dá)在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織呈現(xiàn)隨著病變程度加重而降低的趨勢(shì)，等級(jí)相關(guān)分析檢驗(yàn)顯示，Smad2蛋白表達(dá)強(qiáng)度得分與宮頸上皮內(nèi)瘤變病變程度呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Smad2蛋白在正常宮頸組織中的高表達(dá)而在宮頸癌前病變組織中隨病變程度進(jìn)展降低，提示Smad2蛋白在正常組織中表達(dá)與TGF-β的抑制腫瘤生長(zhǎng)作用有關(guān)，其低表達(dá)在宮頸癌的發(fā)展中發(fā)揮重要作用，可能與TGF-β促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用的轉(zhuǎn)變過(guò)程相關(guān)，在此過(guò)程中發(fā)生突變等生物學(xué)改變，導(dǎo)致表達(dá)下調(diào)[13]。

本研究結(jié)果顯示，宮頸浸潤(rùn)癌組織中Smad2蛋白表達(dá)與病理分級(jí)有關(guān)，病理分級(jí)反應(yīng)腫瘤細(xì)胞惡性程度，Smad2蛋白表達(dá)對(duì)宮頸癌的作用可能表現(xiàn)為低分化細(xì)胞的惡性程度高，生長(zhǎng)趨勢(shì)旺盛，侵襲性更強(qiáng)，Smad2蛋白低表達(dá)則使其抑制腫瘤生長(zhǎng)作用嚴(yán)重削弱，從而更利于腫瘤細(xì)胞的增殖[14]。而與年齡、組織學(xué)類(lèi)型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理學(xué)特征無(wú)關(guān)，提示Smad2蛋白在宮頸癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中主要在病理學(xué)基礎(chǔ)中發(fā)揮作用，與腫瘤體積大小、侵襲范圍、轉(zhuǎn)移、遷徙可能無(wú)顯著相關(guān)，也可能與本研究樣本量較小有關(guān)。筆者推測(cè)Smad2蛋白表達(dá)下調(diào)可能反應(yīng)了宮頸組織細(xì)胞中抑制信號(hào)削弱，隨著宮頸上皮內(nèi)瘤變等癌前病變的發(fā)生，Smad2蛋白的作用受抑制愈加顯著，而細(xì)胞則進(jìn)一步發(fā)生癌變，可能與TGF-β/Smad信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)和TGF-β生物學(xué)效應(yīng)的變異有關(guān)。

綜上所述，Smad2蛋白是一種潛在抑癌基因，在癌前病變及宮頸癌組織中表達(dá)下調(diào)，與細(xì)胞惡性程度有關(guān)，可能作為判斷宮頸組織癌變程度的指標(biāo)，對(duì)宮頸癌預(yù)防和治療提供參考。

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（收稿日期：2013-06-18）