腹腔鏡下根治性腎切除術(shù)對(duì)機(jī)體細(xì)胞免疫的影響

[摘要] 目的 探討兩種手術(shù)方式對(duì)患者圍手術(shù)期機(jī)體免疫功能的影響。方法 68例接受手術(shù)的腎腫瘤患者，按手術(shù)方式分為腹腔鏡組與開(kāi)腹組，對(duì)其血液樣本中的淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)，并統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 腹腔鏡組的CD3亞群在術(shù)前1 d、術(shù)后第1、3、5 天比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；腹腔鏡組的CD4亞群各時(shí)間點(diǎn)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；腹腔鏡組與開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)CD8水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。腹腔鏡組與開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)CD25水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；腹腔鏡組CD69在不同時(shí)間點(diǎn)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），腹腔鏡組與開(kāi)腹組的CD95、CD95L不同時(shí)點(diǎn)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 腹腔鏡手術(shù)對(duì)患者機(jī)體免疫功能的影響小于開(kāi)腹手術(shù)，對(duì)患者的應(yīng)激刺激小，且安全有效，因此應(yīng)用前景廣泛，更易被患者接受，值得臨床推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 腹腔鏡；開(kāi)腹手術(shù)；腎腫瘤；免疫功能

[中圖分類號(hào)] R735.37 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2013）29-0028-03

腎腫瘤在泌尿系統(tǒng)疾病中較為常見(jiàn)，多為惡性。常見(jiàn)的腎腫瘤包括源自腎實(shí)質(zhì)的腎細(xì)胞癌、腎母細(xì)胞瘤以及發(fā)生于腎盂腎盞的移行細(xì)胞乳頭狀腫瘤等[1]。其常見(jiàn)癥狀包括腰背部疼痛、血尿、腹部腫塊等。目前，腎腫瘤的手術(shù)治療主要有腹腔鏡下手術(shù)及開(kāi)放性根治術(shù)，為探討兩種手術(shù)方式對(duì)患者圍手術(shù)期機(jī)體免疫功能的影響，我們選擇了68例接受手術(shù)的腎腫瘤患者，對(duì)其血液樣本中的淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行了檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2006年6月～2012年月12月在我科接受腎腫瘤手術(shù)的患者68例，按照手術(shù)方式不同將患者分為腹腔鏡組與開(kāi)腹組。腹腔鏡組患者34例，均行腹腔鏡手術(shù)，其中男20例， 女14例， 年齡25～64歲， 平均 （46.7±5.1）歲。左腎腫瘤19例，右腎腫瘤15例；開(kāi)腹組患者34例，均行開(kāi)放性根治手術(shù)，其中男18例， 女16例， 年齡24～61 歲， 平均（47.3±3.2）歲，左腎腫瘤17例，右腎腫瘤17例。按照TNM分期，入選患者的腫瘤均在T1期，均無(wú)其他慢性疾病或內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。兩組患者平均年齡、性別比例、病灶位置比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性（P>0.05）。

1.2 儀器與方法

1.2.1儀器與試劑 儀器包括EPICS-XL型流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckman-Coulter公司生產(chǎn)），2100型離心機(jī)（美國(guó)KUBOTA公司生產(chǎn)），Q-PREP儀（由美國(guó)Beckman-Coulter公司生產(chǎn)）。試劑包括單克隆抗體（小鼠抗人IgG型）、異硫氰酸熒光素、藻紅蛋白。

1.2.2檢測(cè)方法 于術(shù)前1 d、術(shù)后第1、3、5天清晨抽取血液樣本，用肝素抗凝保存。用單克隆抗體直接標(biāo)記血液樣本，根據(jù)IgG亞類設(shè)相應(yīng)的陰性對(duì)照組。在25℃室溫、避光條件下孵育15 min，再用Q-PREP儀直接處理。將抗體間接標(biāo)記于小試管內(nèi)，加入100 μL全血標(biāo)本，再加入一抗，在4℃條件下冰浴30 min，用PBS溶液洗滌后再加入二抗，在4℃條件下再冰浴30 min，后用Q-PREP儀處理，所有標(biāo)本必須在6 h之內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)過(guò)程如下，用488 nm氬離子激光激發(fā)血液樣本，可收集到流動(dòng)細(xì)胞的前向散射光和側(cè)向散射光，即形成Dot Plot直方圖，圈定其中的淋巴細(xì)胞群，適當(dāng)調(diào)節(jié)光電倍增管電壓，對(duì)血液樣本進(jìn)行逐管檢測(cè)[2]。

1.3 觀察指標(biāo)

檢測(cè)患者術(shù)前1 d、術(shù)后第1、3、5天的血淋巴細(xì)胞亞群的表達(dá)。主要檢測(cè)的淋巴細(xì)胞亞群有CD3、CD4、CD8、CD25、CD69、CD95、CD95L。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)以SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，計(jì)量資料以（x±s）表示。本研究中的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)，為兩因素多水平設(shè)計(jì)，故采用兩因素多水平方差分析對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，腹腔鏡組的CD3亞群在術(shù)前1 d、術(shù)后第1、3、5 天水平組內(nèi)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.034，P>0.05）。開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行組內(nèi)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.251，P<0.05）；術(shù)后第1、3天CD3水平明顯下降，術(shù)后第5天恢復(fù)正常。腹腔鏡組的CD4亞群各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行組內(nèi)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.633，P>0.05）；開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行組內(nèi)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.452，P<0.05），術(shù)后第l、3 天CD4水平明顯下降，術(shù)后第5天恢復(fù)正常。腹腔鏡組與開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)的CD8水平進(jìn)行組內(nèi)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.434、3.051，P>0.05），組間比較，術(shù)后第1、5 天，腹腔鏡組CD8水平低于開(kāi)腹組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=5.773，4.336，P<0.05）。腹腔鏡組與開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)的CD25水平各自進(jìn)行組內(nèi)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.249、4.312，P<0.05）。組間比較，腹腔鏡組術(shù)后3天CD25 的水平明顯高于開(kāi)腹組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=12.389，P<0.05）。腹腔鏡組的CD69在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行組內(nèi)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.055，P>0.05），開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行組內(nèi)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.246，P<0.05），術(shù)后第3天起水平明顯升高。腹腔鏡組與開(kāi)腹組的CD95、CD95L不同時(shí)點(diǎn)各自進(jìn)行組內(nèi)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.745、2.298，P>0.05）。見(jiàn)表1。

3 討論

20世紀(jì)90年代，Clayman等開(kāi)展了第一例腹腔鏡腎腫瘤切除術(shù)即獲得了成功，腹腔鏡下根治性腎切除術(shù)開(kāi)始逐漸應(yīng)用于泌尿外科。與傳統(tǒng)的開(kāi)腹手術(shù)相比，應(yīng)用腹腔鏡進(jìn)行手術(shù)具有對(duì)患者創(chuàng)傷小、患者術(shù)后恢復(fù)快、住院時(shí)間短、切口小而美觀等優(yōu)點(diǎn)，有報(bào)道還對(duì)比了兩種手術(shù)方式的臨床效果，結(jié)果顯示，腹腔鏡手術(shù)的臨床療效優(yōu)于開(kāi)腹手術(shù)，甚至有學(xué)者認(rèn)為腹腔鏡下腎腫瘤切除術(shù)有望成為治療腎腫瘤的標(biāo)準(zhǔn)術(shù)式[3]。腹腔鏡手術(shù)的療效雖然得到了許多報(bào)道的肯定，但關(guān)于此種術(shù)式對(duì)于患者機(jī)體免疫功能影響的報(bào)道卻較少，本實(shí)驗(yàn)的目的即是探討不同術(shù)式對(duì)圍手術(shù)期患者機(jī)體免疫情況的影響。

一般來(lái)說(shuō)，患者在手術(shù)后機(jī)體免疫功能的改變主要與手術(shù)對(duì)患者的刺激程度大小有關(guān)，患者所受刺激與創(chuàng)傷越大，則細(xì)胞的免疫功能受抑制越重，其變化機(jī)制目前尚不明確。有研究報(bào)道[4]稱，手術(shù)對(duì)患者體內(nèi)T細(xì)胞的免疫功能影響最大，主要表現(xiàn)為血T細(xì)胞總數(shù)減少及亞群比例失調(diào)， T細(xì)胞的增殖反應(yīng)能力下降。因此，T細(xì)胞亞群的變化可以反應(yīng)機(jī)體免疫情況的變化，T細(xì)胞亞群的水平作為衡量免疫狀態(tài)的重要參數(shù)[5]。其中CD3代表了外周血中的成熟T細(xì)胞[6]，本文結(jié)果顯示，腹腔鏡組CD3亞群在術(shù)前1天、術(shù)后第1、3、5 天比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說(shuō)明腹腔鏡手術(shù)前后患者的免疫狀況變化不大，而開(kāi)放手術(shù)前后，患者的免疫狀況變化較大。CD4又名輔助細(xì)胞，其功能是促進(jìn)B細(xì)胞、T細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞的增殖和分化，協(xié)調(diào)細(xì)胞間的相互作用。CD8主要有抑制細(xì)胞和殺傷細(xì)胞的作用，其功能是抑制免疫應(yīng)答的活化。結(jié)果顯示腹腔鏡組CD4亞群各時(shí)間點(diǎn)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），術(shù)后第l、3 天CD4水平明顯下降，術(shù)后第5天恢復(fù)正常。腹腔鏡組與開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)的CD8水平進(jìn)行組內(nèi)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），組間比較，術(shù)后第1、5 天，腹腔鏡組CD8水平低于開(kāi)腹組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示腹腔鏡組患者在圍術(shù)期免疫力變化不大，而開(kāi)腹組患者在術(shù)后免疫力明顯下降，到術(shù)后第5天細(xì)胞亞群才逐漸上升，恢復(fù)正常水平。

C25是T、B細(xì)胞的低親和力受體，代表了T細(xì)胞的活化程度[7]，本文結(jié)果顯示，腹腔鏡組與開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)CD25水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），兩組均于術(shù)后第3天升高，且腹腔鏡組的升高程度高于開(kāi)腹組，說(shuō)明腹腔鏡組患者的T細(xì)胞活化程度更高，免疫功能高于開(kāi)腹組。CD69[8，9]代表了T細(xì)胞、B細(xì)胞與NK細(xì)胞的活化程度，在許多病變中具有早期臨床指導(dǎo)意義。本研究結(jié)果顯示，腹腔鏡組CD69在不同時(shí)間點(diǎn)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），開(kāi)腹組各時(shí)間點(diǎn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），術(shù)后第3天起水平明顯升高。開(kāi)腹組的活化程度高于腹腔鏡組，表明開(kāi)腹組患者圍手術(shù)期機(jī)體處于免疫細(xì)胞高活化狀態(tài)。

CD95、CD95L可以維持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定性，保持免疫細(xì)胞增殖與凋亡的平衡性，本研究結(jié)果顯示，CD95、CD95L不同時(shí)點(diǎn)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但開(kāi)腹組CD95、CD95L在術(shù)后高于術(shù)前，說(shuō)明開(kāi)腹組細(xì)胞凋亡程度較高，手術(shù)中受抑制程度較深。

綜上所述，腹腔鏡手術(shù)對(duì)患者機(jī)體免疫功能的影響小于開(kāi)腹手術(shù)，對(duì)患者的應(yīng)激刺激小，且安全有效，因此應(yīng)用前景廣泛，更易被患者接受，值得臨床推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2013-07-24）