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    福林酚法測定茶樹中茶多酚的分布水平

    2013-12-31 00:00:00游見明曹新志
    湖北農(nóng)業(yè)科學 2013年10期

    摘要:采用福林酚法對茶樹不同部位多酚化合物總含量進行測定,比較不同部位中茶多酚含量的差異,探討茶多酚在茶樹體內(nèi)的分布情況。結(jié)果表明,茶樹中茶多酚含量隨生長部位的不同而存在差異,葉片中茶多酚含量最高,根部含量最低。了解茶樹不同部位茶多酚的分布將有助于為茶樹茶多酚代謝的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。

    關(guān)鍵詞:茶樹;茶多酚;福林酚法;分布

    中圖分類號:O657.3 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2013)10-2417-03

    茶葉富含茶多酚,一般是茶葉中兒茶素類、酚酸類和花色素類多酚化合物的總稱,是茶葉中具有生物活性的主要成分,其含量一般占干重的15%~35%,其含量及組成與制茶類別及品質(zhì)關(guān)系密切,直接影響茶湯色澤、滋味,歷來為茶葉科技工作者所重視[1-3];此外,人們還發(fā)現(xiàn)茶多酚具有抑菌、消炎等多種功效,其抗氧化特性還可應(yīng)用于肉類、蔬菜等產(chǎn)品保鮮及深加工保健等領(lǐng)域[4-6]。本研究針對同一茶樹的不同部位所含茶多酚含量進行比較,分析茶多酚在茶樹中分布差異,以期為茶樹茶多酚的代謝及體內(nèi)轉(zhuǎn)運途徑等研究奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    茶樹品種:早白尖5號無性系6~7年生健壯植株;采樣時間:2011年7月15日;采集地:四川省自貢市榮縣五通農(nóng)場茶園(海拔715 m左右)。

    在不同植株上隨機剪取樣品,按根、莖、當年生新葉、隔年生老葉片歸類,分別用塑料保鮮袋密封樣品,迅速帶回實驗室,80~85 ℃熱風烘干至恒重后粉碎備用。

    1.2 試劑與儀器

    10 mg/100 mL沒食子酸標準溶液;1%(m/V,下同)鐵氰化鉀,現(xiàn)配現(xiàn)用。

    福林酚試劑:稱取Na2CO3·2H2O 50 g和Na2HPO4·12H2O 12.5 g,加入350 mL去離子水、25 mL濃硫酸及50 mL濃HCl溶液,混勻,以小火回流10 h;再加入75 g LiSO4,25 mL去離子水及數(shù)滴溴,開口沸騰15 min,以除去過量溴,冷卻后定容至500 mL,過濾至棕色試劑瓶中;用1 mol/L的NaOH標準液滴定,酚酞為指示劑,后稀釋至終濃度為1 mol/L。

    T6型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司);LG10-2.4A型高速離心機(北京京立離心機有限公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 沒食子酸標準曲線的制作 采用福林酚法(Folin-Ciocalteaut)[7,8]。在20 mL具塞試管中,分別加入不同體積(0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL)的10 mg/100 mL沒食子酸標準溶液和3 mL福林酚試劑,7~8 min后加入3 mL 10%(m/V,下同)Na2CO3溶液,搖勻,于25 ℃靜置反應(yīng)l h,用去離子水定容至20 mL,測定OD760 nm。以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。

    1.3.2 樣品液中總酚的測定 取適量樣品溶液于20 mL具塞刻度試管中,按上述方法測定760 nm處吸光度,按照式(1)計算樣品中總酚的質(zhì)量分數(shù)。式中:G為標準曲線中查的總酚含量,單位μg;W為樣品重量,單位g。

    總酚含量=0.003 75G/W×100% (1)

    1.3.3 樣品中茶多酚提取 準確稱取5 g干粉樣品于索氏提取管中,加入一定體積的乙醇,用恒溫磁力加熱攪拌器加熱,于80~85 ℃回流1 h,待提取液冷卻至室溫,以去離子水定容至100 mL,澄清后測定OD760 nm,根據(jù)式(1)計算出樣品中的總酚含量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 福林酚法測定條件的優(yōu)化

    采用福林酚法測定茶多酚時,對測定結(jié)果產(chǎn)生影響的因素有:福林酚試劑用量、福林酚試劑與Na2CO3溶液的比例、溫度、時間等,針對上述因素分析,尋找各因素最佳的反應(yīng)條件。

    在福林酚試劑用量優(yōu)化試驗中,沒食子酸標準溶液0.5 mL,于20 ℃反應(yīng)1.5 h,研究不同體積福林酚試劑對吸光度的影響,其中Na2CO3溶液與福林酚試劑等體積使用,結(jié)果見圖1。由圖1可知,當福林酚試劑加入量為3.0 mL時,吸光度最大。

    在福林酚試劑和Na2CO3溶液體積比的優(yōu)化試驗中,沒食子酸標準溶液為0.5 mL,福林酚試劑3 mL,于20 ℃反應(yīng)1.5 h,研究2種試劑不同體積比例條件下對吸光度的影響,結(jié)果見圖2。由圖2可知,當體積比為1∶1時,吸光度最大,顯色反應(yīng)完全。

    在溫度優(yōu)化試驗中,沒食子酸標準溶液0.5 mL,福林酚試劑和Na2CO3溶液各3 mL,反應(yīng)時間1.5 h,研究不同溫度對吸光度的影響。由圖3可知,25 ℃吸光度最高,選擇25 ℃是最佳反應(yīng)溫度。

    在時間優(yōu)化試驗中,沒食子酸標準溶液0.5 mL,福林酚試劑和Na2CO3溶液各為3 mL,25 ℃反應(yīng),研究不同反應(yīng)時間對吸光度的影響,結(jié)果見圖4。由圖4可知,反應(yīng)1 h后其吸光度達到最大并保持穩(wěn)定,選擇1 h為最佳反應(yīng)時間。

    綜合上述結(jié)果,該反應(yīng)的最佳條件為,福林酚試劑用量為3.0 mL,福林酚試劑與Na2CO3溶液的比例為1∶1,于25 ℃反應(yīng)1 h。

    2.2 繪制沒食子酸標準曲線

    按以上的優(yōu)化條件,測定吸光度并繪制標準曲線(圖5)。線性回歸方程為y=0.142 0x-0.081 8,R2=0.999 4。

    2.3 茶樹不同部位的茶多酚含量

    茶樹不同部位的茶多酚含量見表1。由表1可知,在茶樹各不同部位中,茶多酚含量不同,其中茶葉中含量最多,當年生新葉中茶多酚含量高于老葉,茶樹莖與根部含量較低,以根部為最低。

    3 結(jié)論

    試驗發(fā)現(xiàn)福林酚法檢測總酚的最佳反應(yīng)條件為福林酚試劑3.0 mL,10% Na2CO3溶液3.0 mL,25 ℃反應(yīng)1 h,在此條件下線性回歸方程為y=0.142 0x-0.081 8,R2=0.999 4。茶樹植株不同部位茶多酚含量存在明顯差異,茶多酚主要分布于茶樹葉片中,其中又以幼嫩芽葉中茶多酚含量為高。茶樹植株內(nèi)茶多酚的分布情況可能與茶樹茶多酚代謝及轉(zhuǎn)移運輸有關(guān)[9,10],尚有待進一步研究。

    參考文獻:

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