內(nèi)生菌根菌對(duì)藍(lán)莓抗氧化成分含量的影響

摘要：分析內(nèi)生菌根菌對(duì)藍(lán)莓（Semen trigonellae）鮮果中抗氧化成分的影響。以北陸藍(lán)莓為材料，對(duì)接種和未接種菌根菌藍(lán)莓鮮果中具有抗氧化作用的花青素、鞣花酸含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性變化進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，藍(lán)莓接種菌根菌后鞣花酸、花青素、SOD活性總體呈上升趨勢(shì)，比未接種分別高31.3%，125.0%和22.8%。

關(guān)鍵詞：藍(lán)莓（Semen trigonellae）；內(nèi)生菌根菌；鞣花酸；花青素；超氧化物歧化酶（SOD）

中圖分類號(hào)：S182 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）10-2408-03

藍(lán)莓（Semen trigonellae）又稱藍(lán)漿果，屬杜鵑花科（Ericaceae）越桔屬（Vaccinium）叢生灌木，其果實(shí)深藍(lán)色，果肉細(xì)膩，鮮食與加工皆宜。藍(lán)莓富含花青素和鞣花酸，抗氧化能力強(qiáng)，被聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織列為人類5大健康食品之一[1]。藍(lán)莓鮮果中的花青素屬于多酚類物質(zhì)，其含量位列所有蔬菜和水果之首[2]。研究表明，花青素是天然水溶性抗氧化劑，具有清除自由基、延緩衰老、降低心血管疾病發(fā)病率、改善老年癡呆、抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)等作用。鞣花酸也是廣泛存在于各種植物中天然多酚組分，屬天然抗氧化劑，具有抗衰老、增強(qiáng)肌體免疫力，抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)等作用[3]。超氧化物歧化酶（SOD）是生物機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)重要的抗氧化酶之一，是生物體內(nèi)重要的超氧陰離子自由基清除劑，能專一地清除生物氧化中產(chǎn)生的超氧陰離子自由基，防止脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)，延緩機(jī)體衰老等作用。藍(lán)莓菌根菌（晶粒鬼傘，Coprinus micaceus）是遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院從長(zhǎng)白山野生越橘中篩選的內(nèi)生菌根菌，可促進(jìn)藍(lán)莓根部生長(zhǎng)，并能增強(qiáng)藍(lán)莓的抗逆性。本研究通過在藍(lán)莓植株根部接種菌根菌后，分析藍(lán)莓鮮果中的花青素和鞣花酸含量變化以及SOD活性變化，旨在揭示菌根菌對(duì)藍(lán)莓鮮果抗氧化能力的影響，為藍(lán)莓菌根菌的應(yīng)用提供借鑒和參考。

1 材料和方法

1.1 材料

藍(lán)莓菌根菌由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物工程中心提供。

北陸藍(lán)莓經(jīng)接種菌根菌，收集成熟果實(shí)作為處理樣品；以未接種植株的鮮果為對(duì)照樣品。

1.2 方法

1.2.1 鞣花酸含量的測(cè)定 參照郭金彩[4]報(bào)道方法：色譜柱Agilent TC-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），流動(dòng)相為乙腈∶水∶磷酸=15∶84.5∶0.5（體積比），檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，流速1 mL/min，柱溫設(shè)為室溫。取3批藍(lán)莓樣品，按上述色譜條件以外標(biāo)法定量分析。

1.2.2 花青素含量的測(cè)定 稱取1 g藍(lán)莓鮮果，搗碎，加入80%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇-水（pH=3）溶液8 mL，避光浸提30 min后，以8 000 r/min離心10 min，收集上清液并稀釋10倍，平行測(cè)定OD520 nm 3次，取平均值。

1.2.3 SOD活性的測(cè)定 以氮藍(lán)四唑（NBT）法測(cè)定，以抑制NBT光化還原反應(yīng)的50%為一個(gè)酶活性單位，以（U）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 接種菌根菌對(duì)藍(lán)莓鮮果鞣花酸含量的影響

2.1.1 鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以鞣花酸峰面積（μV·s）為縱坐標(biāo)，以鞣花酸進(jìn)樣質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，作圖（圖1），得鞣花酸回歸方程為y=10 395x+40.69，R2=0.999 5（n=6），鞣花酸在0.136 0～2.175 4 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.1.2 藍(lán)莓中鞣花酸的含量測(cè)定 鞣花酸標(biāo)準(zhǔn)品、未接菌根菌和接種菌根菌的藍(lán)莓鮮果鞣花酸色譜圖見圖2。由圖2可知，鞣花酸保留時(shí)間為13.85 min，未見干擾峰。通過外標(biāo)法測(cè)定藍(lán)莓鮮果中鞣花酸含量見表1，其中未接種菌根菌的藍(lán)莓鮮果鞣花酸含量為2.389 2 mg/g，接種藍(lán)莓菌根菌的藍(lán)莓鮮果鞣花酸含量為3.136 8 mg/g，其含量高于對(duì)照樣品31.3%。

2.2 接種菌根菌對(duì)藍(lán)莓鮮果花青素含量的影響

采用分光光度計(jì)法測(cè)定藍(lán)莓鮮果中花青素含量，結(jié)果見圖3。未接種菌根菌的藍(lán)莓鮮果花青素OD520 nm為0.56，接種菌根菌后藍(lán)莓鮮果中花青素OD520 nm為1.26，含量比未接種菌根菌的高125.0%。花青素為植物次級(jí)代謝產(chǎn)物，基本結(jié)構(gòu)單元是2-苯基苯并吡喃型陽離子，即花色基元。現(xiàn)已知的花青素有20多種，又稱花色素，影響花青素形成的因素有pH值[5，6]、溫度[7，8]、光誘導(dǎo)[9，10]等。藍(lán)莓接種菌根菌對(duì)花青素形成的影響還未見報(bào)道。

2.3 接種菌根菌對(duì)藍(lán)莓SOD活性的影響

SOD普遍存在于動(dòng)植物與微生物體內(nèi)，作為生物機(jī)體重要的抗氧化酶，是生物體內(nèi)重要的超氧陰離子自由基清除劑，能專一地清除生物氧化中產(chǎn)生的超氧陰離子自由基，有助于減少和阻止脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)，延緩機(jī)體衰老及防止生物大分子損傷。未接種菌根菌藍(lán)莓鮮果SOD活性為42.48 U/g，接種菌根菌藍(lán)莓鮮果SOD活性為52.18 U/g，接種菌根菌藍(lán)莓鮮果SOD活性比未接種的高22.8%（圖4）。

3 結(jié)論

綜上所述，藍(lán)莓接種遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院篩選的菌根菌（晶粒鬼傘）后，藍(lán)莓鮮果中具有抗氧化作用的鞣花酸和花青素含量上升，SOD活性提高。處理樣品中的鞣花酸含量比對(duì)照高31.3%，花青素含量比對(duì)照高125.0%，SOD活性比對(duì)照高22.8%。接種菌根菌（晶粒鬼傘）能提高藍(lán)莓的抗氧化活性。

參考文獻(xiàn)：

[1] CHEN C M， ZHANG N， WANG M. Ethnobotany of wu fan shu（Vaccinium bracteaturn Thunb.）[J]. Journal of Plant Re-sources and Environment，1998，7（1）：45-48.

[2] 劉 艷， 宋立秋， 范俊娟， 等. HPLC法測(cè)定藍(lán)莓中鞣花酸含量[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（3）：217-219.

[3] KALT W，F(xiàn)OMEY C F，ARTIN A，et al. Antioxidant capacity， vitamine C， phenolics and anthocyanins after strorage of small fruits[J]. Journal of Agricultural and Food chemistry，1999， 47（11）：4638-4644.

[4] 郭金彩.高效液相色譜法測(cè)定鞣花酸含量[J].河北化工，2006， 29（9）：55-56.

[5] 王振宇，楊 謙. 大花葵紅色素理化特性研究[J]. 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2003，23（3）：102-104.

[6] 劉曉芳，李 萍，黃閩敏， 等. 紅寶石海棠葉片花青素及葉綠素含量的影響因子[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究，2007，25（1）： 38-41.

[7] SAURE MC，鄧西民. 蘋果花青索形成的外部調(diào)控[J]. 國(guó)外農(nóng)學(xué)（果樹），1990（l）：1-8.

[8] 趙宗方，趙 勇，吳桂法. 果實(shí)花青素含量與PAL活性關(guān)系的研究[J]. 園藝學(xué)報(bào)，1994，21（2）：199-200.

[9] 耿玉韜.果實(shí)著色的理論與實(shí)踐[J].山西果樹，1989（1）：36-39.

[10] CHALKER-SCOTT L. Environmental significance of anthocyanins in plant stress responses[J]. Photochemistry and Photobiology，1999，70（1）：1-9.