高效液相色譜法測定酸棗仁樣品中的皂苷A和B的含量

摘要：采用索式提取法提取相同產(chǎn)地32種酸棗（Zizyphus jujube）仁中的皂苷A、B，并以高效液相色譜（HPLC）法測定其含量。結(jié)果表明，不同品種酸棗仁皂苷A及B含量有一定差異，以8號酸棗仁皂苷A含量最高，14號酸棗仁皂苷A含量最低，26號酸棗仁皂苷B含量最高，14號酸棗仁皂苷B含量最低，26號和1002號的酸棗仁皂苷A的含量差異不大，但酸棗仁皂苷B的含量有較大差異。以酸棗仁皂苷A和B能夠較為全面評價酸棗仁的皂甙水平。

關(guān)鍵詞：酸棗（Zizyphus jujube）；酸棗仁皂苷；高效液相色譜

中圖分類號：R284 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）10-2405-03

鼠李科植物酸棗（Ziziphus jujube Mill var.spinosa（Bunge）Hu ex H.F.chou）在中國主要分布于陜西、山東、湖北、河南、安徽、遼寧、華北等地。酸棗仁是其干燥成熟種子，其味酸性平，具有養(yǎng)肝寧心、安神斂汗功能，主治虛煩不眠、驚悸多夢、體虛多汗、津傷口渴等癥，常作為安神藥[1]。據(jù)報道酸棗仁中含有多種功能性化合物[2-4]，其中具有鎮(zhèn)靜催眠活性的化合物主要包括三萜皂苷和黃酮類化合物，其中酸棗仁皂苷A及B為其中主要有效成分[5，6]，但由于產(chǎn)地不同，其含量差異極大。本試驗采用高效液相色譜法分析河北邢臺產(chǎn)的32個品種酸棗仁樣品中的酸棗仁皂苷A和B含量，為邢臺酸棗仁的綜合開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

酸棗仁樣品由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院提供；酸棗仁對照品購于上海順勃生物工程有限公司。

色譜純乙腈，購于Fisher公司；甲醇、石油醚、正丁醇、氨水均為分析純，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器

1200型高效液相色譜儀（Agilent，美國），配備二元梯度泵，紫外檢測器，色譜工作站等；配用CO-3010型柱恒溫控制箱（天津美瑞泰克科技有限公司生產(chǎn)）；RE52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞容生化儀器廠）。

1.3 方法

1.3.1 樣品溶液的制備 酸棗仁樣品粉碎后混和均勻，準(zhǔn)確稱取3.00 g樣品，置于索氏提取器中，加入100 mL甲醇，100 ℃加熱回流14 h后，揮干甲醇，殘渣用30 mL水溶解，定量轉(zhuǎn)移至60 mL分液漏斗中，加入石油醚萃取3次，每次15 mL，靜置5 min，收集水層，加入水飽和正丁醇萃取4次，每次10 mL，靜置15 min，收集正丁醇層，加入正丁醇飽和氨水溶液，萃取3次，每次10 mL，靜置15 min，再收集正丁醇層，減壓蒸發(fā)正丁醇，殘渣用甲醇溶解，并定容至5 mL，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，備用。

1.3.2 對照品溶液的制備 分別稱取對照品酸棗仁皂苷A 2.18 mg及B 2.11 mg，用甲醇溶解并定容至5 mL，搖勻即得對照品母液A和B。分別吸取一定體積，用甲醇稀釋，配制成10，20，50，100，200， 500，1 000 μg/mL的對照品工作溶液。

1.3.3 色譜分析條件 色譜柱為Kromasil C18（5 μm，200 mm×4.6 mm），流動相為乙腈∶水=39∶61（V/V），檢測波長204 nm，流速0.8 mL/min，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制

吸取酸棗仁皂苷A和B的各對照品工作液20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積（mAU·s）為縱坐標(biāo)，以濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：酸棗仁皂苷A為y=1.649 1x+15.258 6，r=0.999 9；酸棗仁皂苷B為y=2.158 3x+11.728 0，r=0.999 9。酸棗仁皂苷A和B均在10 ～1 000 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度試驗

吸取對照品工作溶液A和B各10 μL，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，計算酸棗仁皂苷A及B的RSD分別為1.57%和1.72%。

2.3 重復(fù)性試驗

取同一批樣品，稱取3份，按上述方法處理并測定，酸棗仁皂苷A及B的RSD分別為1.8%和2.2%。

2.4 樣品測定

精確稱取酸棗仁各3 g，按“1.3.1”制備供試品溶液，在上述色譜條件下，進(jìn)行測定，色譜圖見圖1，酸棗仁皂苷A及B的含量見表1。

3 討論

由表1可知，不同品種的酸棗仁中的皂苷A及B含量差異較大，一般酸棗仁皂苷A的含量均大于酸棗仁皂苷B的含量，32個品種的酸棗仁皂苷的測定結(jié)果表明，8號的酸棗仁皂苷A含量最高，14號的酸棗仁皂苷A含量最低，26號酸棗仁皂苷B含量最高，14號的酸棗仁皂苷B含量最低，26號和1002號的酸棗仁皂苷A的含量差異不大，但酸棗仁皂苷B的含量有較大差異，因此僅從酸棗仁皂苷A來評價在酸棗仁皂苷的總量是不全面的。目前已知，酸棗仁皂甙的分析方法主要包括薄層掃描法和HPLC方法，杜麗峰等[1]測定的陜西延安的酸棗仁皂甙A含量最高，達(dá)到792 μg/g，江西的酸棗仁皂甙A含量最低，僅為338 μg/g；以貴州貴陽的酸棗仁皂甙B含量最高，為622 μg/g，以新疆的酸棗仁皂甙B的含量最低，僅為253 μg/g。但本次測定結(jié)果表明96.9%的品種中皂甙A含量小于文獻(xiàn)報道的測定值，且酸棗仁皂甙B均小于文獻(xiàn)報道的測定值，這可能是由地區(qū)、品種以及測定方法間的差異導(dǎo)致。本試驗分析的32個品種均為同一地區(qū)，以8號和26號品種含量最高，與文獻(xiàn)報道相比，其含量偏低是由品種導(dǎo)致，還是種植區(qū)域?qū)е律杏写M(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 杜麗峰， 梁宗鎖. 不同產(chǎn)地酸棗仁皂苷含量的測定[J]. 陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2006，29（5）：65-66.

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