枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚生產(chǎn)性能及消化酶活性的影響

摘要：為研究枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）對黃河鯉魚（Cyprinus carpio）的生產(chǎn)性能、腸道及肝胰臟消化酶活性的影響，將黃河鯉魚隨機分為5組，分別飼喂含0（對照組）、0.1‰、0.2‰、0.3‰、0.4‰枯草芽孢桿菌的日糧，試驗期為60 d。結(jié)果表明，魚體攝食枯草芽孢桿菌后消化道的消化酶活性關(guān)系為：食糜>中腸組織>肝胰臟。黃河鯉魚飼料中枯草芽孢桿菌（有效活菌數(shù)為2×109 CFU/g）的適宜添加量為0.2‰～0.3‰。

關(guān)鍵詞：黃河鯉魚（Cyprinus carpio）；枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）；生長性能；消化酶；活性

中圖分類號：S948；S965.116 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）10-2380-03

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖集約化程度不斷提高，水體富營養(yǎng)化、農(nóng)藥殘留、病原微生物抗藥性等問題相繼出現(xiàn)將嚴(yán)重影響食品安全。微生態(tài)制劑因具有無殘毒、無抗藥性、不污染環(huán)境等優(yōu)點，并具有改善養(yǎng)殖動物消化道有益菌群、抑制或殺死有害菌[1]、提高動物免疫力[2]、促進動物生長及消化[3]、提高動物的健康水平等功能，在水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注。枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）是常用的微生態(tài)制劑，既可以改善水質(zhì)[4]，又可以產(chǎn)生多種酶類[5]，并且能夠產(chǎn)生芽孢而耐高溫高壓，在飼料加工過程很少失活，被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)飼料添加劑中。近年來，有關(guān)枯草芽孢桿菌應(yīng)用于水產(chǎn)動物生產(chǎn)性能及消化酶活性的研究較多[6-9]，但目前尚未見到關(guān)于枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚（Cyprinus carpio）生長性能及消化酶活性影響的研究報道。本研究通過在黃河鯉魚飼料中添加枯草芽孢桿菌，研究其對黃河鯉魚的生長及消化酶活性的影響，以期為黃河鯉魚健康養(yǎng)殖和枯草芽孢桿菌在黃河鯉魚飼料中的合理利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與飼料

黃河鯉魚購自河南省引種育種中心，初始體重為（25.27±0.27） g，分置于鄭州牧業(yè)工程高等?？茖W(xué)校水產(chǎn)實驗室容積為90 cm×45 cm×50 cm的15個玻璃水族箱中，水深30 cm。養(yǎng)殖系統(tǒng)為室內(nèi)循環(huán)水系統(tǒng)，包括絲棉、砂濾、活性炭過濾等，流速為2～3 L/min，溶氧量、氨氮量和溫度分別為（8.20±0.90） mg/L、（0.03±0.02） mg/L和22～24 ℃。飼料選用鄭州啟元飼料科技有限公司生產(chǎn)的鯉魚全價配合顆粒飼料001#，不含枯草芽孢桿菌，其主要營養(yǎng)水平見表1。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設(shè)計及飼養(yǎng)管理 黃河鯉魚用基礎(chǔ)飼料投喂馴化，以魚體重的2.0%～2.5%投喂。每天投喂3次，8∶30、13∶30和18∶30各投喂一次，使其飽食而無飼料剩余。7 d馴化結(jié)束后，每個水族箱內(nèi)選擇健康、重量基本一致的試驗魚25尾，隨機分為5組，其中Ⅰ組為對照組，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組為試驗組，每組設(shè)3個重復(fù)，分別投喂在基礎(chǔ)日糧中添加0.1‰、0.2‰、0.3‰、0.4‰枯草芽孢桿菌（無錫中順生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，有效活菌數(shù)為2×109 CFU/g）的試驗日糧，共計60 d。

1.2.2 生長性能指標(biāo)的測定 試驗結(jié)束后將黃河鯉魚在玻璃水族箱中饑餓1 d，以減少腸道中食物殘留對腸道消化酶活性的影響，對每尾魚空腹稱重。

增重率=[（末均重-初均重）/初均重]×100%；

飼料系數(shù)=飼料攝食量/（末均重-初均重）。

1.2.3 消化酶活性的測定 從每組每個水族箱中取3尾黃河鯉魚，于冰盤上解剖，取出腸道和肝胰臟，剔除脂肪組織，用4 ℃預(yù)冷的去離子水沖洗，然后用濾紙輕輕吸干水分，放入-20 ℃冰箱中冷卻保存，待檢測消化酶活性。酶活性測定樣品的制備參照文獻[10]。酶粗提液蛋白質(zhì)含量以牛血清白蛋白做標(biāo)準(zhǔn)，使用考馬斯亮藍(lán)法測定[11]；蛋白酶活性測定使用福林-酚試劑法[12]；淀粉酶使用淀粉-碘比色法[13]；植酸酶酶活性測定采用FeSO4-鋁藍(lán)法[14]。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 試驗數(shù)據(jù)用Excel 2007作處理，所有數(shù)值用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，對數(shù)據(jù)作單因素方差分析，做LSD多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚生產(chǎn)性能的影響

添加枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚生產(chǎn)性能的影響見表2。由表2可知，添加枯草芽孢桿菌0.2‰、0.3‰、0.4‰試驗組的增重率與對照組相比，均有顯著性差異（P<0.05），其中，添加0.3‰組增重率最高，達（168.65±0.25）%，而添加0.1‰組增重率與對照組差異不顯著（P>0.05）。與對照組相比，添加枯草芽孢桿菌0.2‰、0.3‰、0.4‰試驗組的飼料系數(shù)顯著性降低（P<0.05），添加0.1‰試驗組的飼料系數(shù)無顯著降低（P>0.05），其中，添加0.2‰、0.3‰試驗組的飼料系數(shù)也顯著性低于0.4‰試驗組（P<0.05），0.3‰試驗組最低，為2.60±0.02，較對照組降低17.46%。結(jié)果表明，枯草芽孢桿菌在黃河鯉魚日糧中的最適添加量在0.2‰～0.3‰。

2.2 枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚腸道食糜消化酶活性的影響

枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚腸道食糜消化酶活性的影響見表3。由表3可知，添加枯草芽孢桿菌0.2‰、0.3‰、0.4‰試驗組魚食糜蛋白酶活性顯著提高（P<0.05），分別提高了92.51%、96.31%、46.76%。添加枯草芽孢桿菌0.2‰、0.3‰試驗組黃河鯉魚食糜淀粉酶活性也顯著提高（P<0.05），比對照組分別提高了46.20%、50.24%；0.1‰試驗組對魚食糜蛋白酶和淀粉酶活性都沒有顯著影響（P>0.05）。

2.3 枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚中腸組織消化酶活性的影響

枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚中腸組織消化酶活性的影響見表4。由表4可知，與對照組相比，添加枯草芽孢桿菌0.2‰、0.3‰、0.4‰試驗組的魚中腸組織蛋白酶活性顯著提高（P<0.05），分別提高了113.34%、156.45%、161.05%，并且0.2‰試驗組顯著低于0.3‰和0.4‰試驗組；添加枯草芽孢桿菌0.1‰試驗組對魚中腸組織蛋白酶活性與對照組差異不顯著（P>0.05）；添加枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚中腸組織淀粉酶活性無顯著影響（P>0.05）。

2.4 枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚肝胰臟消化酶活性的影響

添加枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚肝胰臟消化酶的影響見表5。由表5可知，與對照組相比，添加枯草芽孢桿菌0.1‰、0.2‰、0.3‰、0.4‰試驗組對黃河鯉魚肝胰臟蛋白酶活性無顯著影響（P>0.05），但顯著地降低了肝胰臟淀粉酶活性（P<0.05），分別降低了42.45%、40.78%、43.48%、41.73%。

3 小結(jié)與討論

3.1 枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚魚種生長性能的影響

試驗結(jié)果顯示，飼料中添加枯草芽孢桿菌0.2‰、0.3‰、0.4‰都能顯著促進黃河鯉魚增重率和降低飼料系數(shù)，但添加0.4‰對黃河鯉魚的增重率和飼料系數(shù)的效果又不如添加0.2‰、0.3‰，本研究結(jié)果與潘康成等[14]、華雪銘等[15]、管越強等[6]研究芽孢桿菌影響鯉魚、暗紋東方鲀幼魚和中華鱉稚鱉的增重率和飼料系數(shù)的結(jié)果一致。芽孢桿菌菌體含有大量營養(yǎng)物質(zhì)，另外在芽孢桿菌發(fā)酵或代謝過程中產(chǎn)生多種酶類或者其他促生長的化合物，有助于動物對食物的消化和吸收，促進其生長。但是添加過量枯草芽孢桿菌造成機體腸道菌群結(jié)構(gòu)失調(diào)，降低了內(nèi)源酶對營養(yǎng)物質(zhì)的降解作用，從而降低了動物的生產(chǎn)性能[16]。

3.2 枯草芽孢桿菌對黃河鯉魚消化酶活性的影響

本研究中添加枯草芽孢桿菌后黃河鯉魚食糜淀粉酶和蛋白酶都有提高，且添加0.3‰試驗組提高最為顯著；而各添加組對腸道淀粉酶無顯著影響，添加0.4‰試驗組對蛋白酶影響最顯著；同時各添加組顯著抑制了肝胰臟淀粉酶活性，而對肝胰臟蛋白酶活性無顯著影響。綜合來看，魚體攝食枯草芽孢桿菌后消化道的酶活性關(guān)系為：食糜>腸道>肝胰臟。這與王紅權(quán)等[17]研究異育銀鯽攝食幾種不同動物蛋白源飼料后消化酶活性變動結(jié)果是一致的。腸道中酶活性主要來源芽孢桿菌萌發(fā)期分泌的蛋白酶、淀粉酶等及食物刺激機體腸道分泌消化酶，故食糜中的酶活性是最高的。

本研究結(jié)果表明，在黃河鯉魚飼料中添加0.2‰～0.3‰枯草芽孢桿菌（有效活菌數(shù)為2×109 CFU/g）有益于黃河鯉魚的消化及生長。

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