應(yīng)用PCR方法檢測DYS287位點多態(tài)性

廖啟洪 李麗敏 劉怡仱 余洪立 孟 曉 呂 程 潘柳吟 梁志東

廣西壯族自治區(qū)柳州市人民醫(yī)院，廣西 柳州 545006

應(yīng)用PCR方法檢測DYS287位點多態(tài)性

廖啟洪 李麗敏 劉怡仱 余洪立 孟 曉 呂 程 潘柳吟 梁志東

廣西壯族自治區(qū)柳州市人民醫(yī)院，廣西 柳州 545006

目的：調(diào)查廣西瑤族、壯族、漢族群體中DYS287基因位點的遺傳多態(tài)性分布。方法：采用聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳檢測方法對132例白褲瑤族、149例壯族、172例漢族樣本DYS287位點多態(tài)性進行檢測分析。結(jié)果：三個民族人群均未發(fā)現(xiàn)插入YAP＋個體。結(jié)論：獲得廣西白褲瑤族、壯族、漢族群體DYS287基因座的遺傳學(xué)數(shù)據(jù)，為這三種民族遺傳關(guān)系的分析、法醫(yī)學(xué)鑒定及該民族的起源提供了一定的遺傳背景資料。

PCR；DYS287；多態(tài)性

Y染色體Alu多態(tài)性（即YAP）是一個應(yīng)用廣泛，而且具有較高價值的位點。檢測不同群體中YAP＋率可以研究不同群體間的遺傳關(guān)系和遷徙歷史［1－2］。2010年以來，我們應(yīng)用PCR方法對廣西瑤族、壯族和漢族人群進行Y染色體DYS287位點多態(tài)性檢測分析，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 根據(jù) “知情同意原則”，隨機分別抽取廣西瑤族男性132例、壯族男性149例3代內(nèi)無族外通婚彼此間無親緣關(guān)系的靜脈血2ml，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，同樣取漢族彼此間無親緣關(guān)系男性172例血樣。

1.2 DNA提取 采用傳統(tǒng)的酚－氯仿法抽提基因組DNA，溶于TE中，標化為10～20mg／L，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 PCR擴增及瓊脂糖凝膠電泳檢測 YAP－1 5′－CAG GGG AAG ATA AAG AAA TA－3′YAP－2 5′－ACTGCTAAA AGG GGA TGG AT－3′，25μl反應(yīng)體系中包含基因組DNA 25－40ng，0.12μmol／L引物，2.0 mmol／L dNTP，2.5 mmol／LMgCl，0.5U Taq DNA聚合酶。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性2min，然后在94℃變性1min，59℃退火1min，72℃延伸1min條件下循環(huán)30次，最后于72℃延伸10min，產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

2 結(jié)果

Y染色體DYS287位點瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果見圖1。YAP＋個體的PCR擴增片段為455bp，YAP－個體的PCR擴增片段為150bp。本組456例廣西瑤族、壯族和漢族研究男性個體均未發(fā)現(xiàn)YAP＋擴增產(chǎn)物。

3 討論

DYS287位點是位于人類Y染色體長臂（Yq11）的一個Alu序列插入多態(tài)，屬于Y—SNP位點。不同人群中的YAP多態(tài)性是由于人類在不斷的遷移過程中，人類祖先中攜帶Alu元件的群體與不攜帶Alu的群體發(fā)生基因交流造成的［3］。Y染色體為父系遺傳，除開長臂和短臂末端的擬常染色體區(qū)在減數(shù)分裂中與X染色體發(fā)生重組外，其余的大部分Y特異區(qū)不發(fā)生重組，而是以單倍體形式由父傳給子，能夠忠實記錄了父系進化的歷史。

國內(nèi)外研究表明DYS287位點是研究不同群體間遺傳結(jié)構(gòu)的較理想的遺傳標記，各民族各地區(qū)YAP陽性率存在著明顯的差異。例如日本人群YAP＋平均率達42%［4］；非洲黑人中YAP＋頻率高達79%，歐洲人群中YAP＋只有4%－11%［5－6］；國內(nèi)藏族、土族、彝族和普米族人群表現(xiàn)出很高的YAP陽性率，塔吉克族、白族、基諾族、仫佬族、毛南族和山東漢族也有YAP陽性，鄂溫克族、鄂倫春族、達斡爾族、黎族、傣族、拉祜族、佤族、等少數(shù)民族均沒有發(fā)現(xiàn)YAP陽性個體，表現(xiàn)出西北和南部較高，東北和中部地區(qū)則偏低的趨勢。

我們應(yīng)用PCR方法對廣西壯族男性DYS287位點多態(tài)性進行了檢測，沒有發(fā)現(xiàn)YAP＋個體，與陳陽等研究報道相一致［7］。我們以同樣的方法對廣西漢族、瑤族男性DYS287位點多態(tài)性進行了檢測，結(jié)果漢族、瑤族YAP＋頻率均為0，這與云南漢族［7］結(jié)果一致。

中國少數(shù)民族眾多，壯族和瑤族只是其中的一元，僅用DYS287位點對這兩個民族的篩查頻率不足以分析其遺傳關(guān)系和起源提供足夠證據(jù)，但能夠提供有價值的線索，為壯、瑤兩個民族群體遺傳關(guān)系的分析、法醫(yī)學(xué)鑒定及群體的起源提供了一定的遺傳背景資料。

［1］周瑞霞，安黎哲，伊琳，等.甘肅3個特有少數(shù)民族回族和漢族DYS287DYS19的遺傳多態(tài)性研究［J］.蘭州大學(xué)學(xué)報，2006，42（2）：38－42.

［2］石宏，董永利，李衛(wèi)翔，等.中國云南25個少數(shù)民族Y染色體DYS287位點的地理多態(tài)性［J］.中國科學(xué)：C輯，2002，32（4）：373.

［3］文普帥，溫有鋒，席煥久，等.西藏藏族DYS287位點多態(tài)性研究.Medical Journal of the Chinese people’s Armed Police.2007，18（2）：89－90.

［4］Hammer MF，Spurdle AB，Karafet T，et al.The geographic distribution of human Y chromosome variation.Genetics，1997，145（3）：787－805.

［5］Spurdle AB，Hammer MF，Jenkins T.The Y－Alu polymer.－phism in southern African populations and its relationship to other Y－specific polymouphisms［J］.Am JHum Genet，1994，54（2）：319－330.

［6］Hammer MF，Horai S.Y chromosomal DNA variation and the peopling of Japan［J］.Am JHum Genet，1995，56（4）：951－962.

［7］陳陽，褚嘉祐，俞建昆，等.中國28個民族群體Y染色體DYS287位點的遺傳多態(tài)性［J］.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報，2006，28（2）；196－201.

Polymorphism s of DYS287 locus in Yao and Zhuang and Han in Guangxi

LIAO Qihong，LILimeng，LIU Yiling，YU Hongli，MENG Xiao，LV Cheng，PAN Liuyin LIANG ZHidong The people’s hospital of Liuzhou，GuangXi，Liuzhou 545006，China

Objective：To study the polymorphisms of DYS287 locus ofmale Han and Zhuang and Yao nationality in Guangxi.Methods：The polymorphisms of DYS287 locus inmale 172 Han and 149 Zhuang and 135 Yao were analyzed by PCR and agarose gel electrophoresis.Results：With YAP＋were not found in three population.Conclusion：The genetic data of DYS287 locus ofmale Han and Zhuang and Yao nationality in have been obtained，and theymight be useful in studies of population origin，relationship between populations，and forensic applications.

PCR；DYS287；polymorphisms

R739

A

1007－8517（2013）11－0030－02

2013.03.08）

廣西衛(wèi)生廳基金項目（Z2007303）。

廖啟洪 （1964～），主任技師，研究方向優(yōu)生遺傳。