林穎怡 張 雪
(廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司,廣東 廣州 510450)
HPLC法測(cè)定紫地寧血散中沒(méi)食子酸的含量
林穎怡 張 雪
(廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司,廣東 廣州 510450)
目的 建立測(cè)定紫地寧血散中沒(méi)食子酸含量的方法。方法 采用HPLC法,色譜柱為Diamond diamonsil C18柱,乙腈-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液(1∶99)為流動(dòng)相,流速1.0mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為273nm,柱溫為30℃。結(jié)果 沒(méi)食子酸在20.475~2047.5ng范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好,平均回收率為100.5%,分析方法精密度(RSD)為0.4%(n=6)。結(jié)論 所用方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,能有效的控制該制劑的質(zhì)量。
紫地寧血散;沒(méi)食子酸;HPLC
紫地寧血散來(lái)源于(90)衛(wèi)藥準(zhǔn)字Z-43號(hào)。主要由大葉紫珠、地菍2味藥材組成。具有清熱涼血,收斂止血的作用,主治胃及十二指腸潰瘍或胃炎引起的吐血、便血,屬胃中積熱型者。本品種原執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng),為確保質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能夠更好地控制質(zhì)量,本文建立了測(cè)定地菍中沒(méi)食子酸含量的方法[1],結(jié)果表明,本方法可操作性強(qiáng),穩(wěn)定性好,可以用于控制紫地寧血散含量的質(zhì)量。
島津LC-20AT VP高效液相色譜儀;SPD-M10A VP檢測(cè)器;LC-Solution色譜工作站;色譜柱:Diamonsil C18(200×4.6mm,5μm),柱編號(hào):8022889;沒(méi)食子酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):110831-200302);紫地寧血散(由廣州某藥店提供,批號(hào):J00001;G00001;G00003);乙腈為色譜純,其他均為分析純。
2.1 對(duì)照品溶液的制備
取沒(méi)食子酸對(duì)照品適量,精密稱定,加50%甲醇制成每1mL含20μg的溶液,即得。
2.2 供試品溶液的制備
取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物,混勻,取約1.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入80%甲醇50mL,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率50Hz)30min,放冷,再稱定重量,用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得[2]。
2.2 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)
色譜柱為C18柱(Diamond Diamonsil C18柱(200×4.6mm,5μm),流動(dòng)相為乙腈-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液(1∶99);流速為1mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為273nm;柱溫為30℃。分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL注入色譜儀,見(jiàn)圖1。
2.3 線性關(guān)系考察
精密稱取沒(méi)食子酸對(duì)照品4.095mg,用80%甲醇定容到20mL量瓶中,濃度為204.75μg/mL(對(duì)照品溶液母液),再精密吸取上述對(duì)照品溶液母液,移入20mL量瓶中,用80%甲醇定容到刻度,即得對(duì)照品溶液,濃度為20.475μg/mL。按上述色譜條件,分別精密吸取沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液1μL、2μL、5μL、10μL及對(duì)照品溶液母液(204.75μg/mL)2μL、5μL、10μL,注入液相色譜儀,測(cè)定其峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)(y),對(duì)照品的進(jìn)樣量(ng)為橫坐標(biāo)(x),進(jìn)行回歸分析,得回歸方程:沒(méi)食子酸 y=2929.9x-14896,r=0.9999。結(jié)果表明沒(méi)食子酸在20.475~2047.5ng范圍線性關(guān)系良好。
2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)
精密稱取同一批紫地寧血散(批號(hào):J00004)樣品約1.5g,共6份,按“2.2”項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液并測(cè)定,6份樣品沒(méi)食子酸含量平均值為0.692mg/g(RSD=0.9% n=6)。
2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
圖1 HPLC色譜圖(依次為對(duì)照品、樣品、陰性)
表1 沒(méi)食子酸回收率試驗(yàn)結(jié)果
取同一供試品溶液(批號(hào):J00004),分別于0、2、4、8、12、 24、48h依法測(cè)定樣品,結(jié)果沒(méi)食子酸含量的RSD為1.0%,表明供試品溶液在48h以內(nèi)穩(wěn)定。
2.6 加樣回收率試驗(yàn)
精密稱取已知含量的紫地寧血散(批號(hào):J00004,平均含量為0.692mg/g)樣品0.75g,共6份,置具塞錐形瓶中,分別精密加入已知濃度的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液(21.035μg/g)25mL,按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試液,依上述色譜條件測(cè)定,計(jì)算,結(jié)果見(jiàn)表1,平均回收率為100.5%,RSD為0.4%(n=6)。結(jié)果說(shuō)明本方法準(zhǔn)確度好。
2.7 三批樣品測(cè)定結(jié)果
按照“2.2”項(xiàng)下的制備方法制備供試品溶液,分別吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL,按上述色譜條件測(cè)定,計(jì)算,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 樣品測(cè)定結(jié)果
3.1 本研究結(jié)果顯示,該法具有較好的線性關(guān)系、重復(fù)性與回收率,操作方便、迅速,結(jié)果準(zhǔn)確。說(shuō)明反相高效液相色譜法測(cè)定紫地寧血散中沒(méi)食子酸含量的可行性良好。
3.2 曾分別采用熱回流和超聲浴處理法和加酸水解法進(jìn)行比較,結(jié)果顯示:超聲浴提取方法與其他提取方法并無(wú)顯著性差異,從操作簡(jiǎn)便性考慮,選擇超聲浴提取方法。
3.3 曾對(duì)提取溶劑進(jìn)行考察,取同一批號(hào)的紫地寧血散(批號(hào):J00004)約1.5g,分別用甲醇、80%甲醇、50%甲醇、30%甲醇和水作為提取溶劑,制成供試品溶液,分別測(cè)定沒(méi)食子酸的含量。結(jié)果表明80%與50%甲醇作為提取溶劑所得結(jié)果最高,考慮到80%甲醇所得供試品溶液雜質(zhì)較少,選擇80%甲醇作為提取溶劑。
[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).《中國(guó)藥典》2005年版一部[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:214-215.
[2] 史偉國(guó),王麗敏,劉翠娟,等.地榆不同部位沒(méi)食子酸的含量測(cè)定[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2011,34(1):14-15.
Determination of Gallic Acid in Zidiningxuesan
LIN Ying-yi, ZHANG Xue
(Guangzhou Wanglaoji Pharmaceutical Company Limited, Guangzhou 510450, China)
Objective To establish an HPLC method for the determination of gallic acid in Zidiningxuesan. Methods A Diamond diamonsil C18column was used, with the mobile phase of a mixture of acetonitrile and 0.1% solution of phosphoric acid containing 0.1% triethylamine (1∶99). The flow rate was 1.0mL/min and the detective wavelength was 265nm. The column oven was 30℃. Results The standard curves were linear from 20.475 to 2047.5ng for gallic acid. The average recoveries was100.5%, RSD of the analysis method was 0.4% (n=6). Conclusion This method was simple, accurate and reliable for quality control of Zidiningxuesan.
Zidiningxuesan; Gallic acid; HPLC
R917
B
1671-8194(2013)23-0048-02