HPLC法測(cè)定朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的含量

王明新朱艷紅

（1.內(nèi)蒙古呼倫貝爾市人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 海拉爾 021000；2.通遼市藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 通遼 028000）

朱格倫烏日-6是由蓮子、石榴、肉桂、豆蔻、蓽茇、紅花六味藥組成的復(fù)方蒙藥制劑。功能主治為使反常之精華歸位，調(diào)經(jīng)。用于由赫依所致的白帶過多，月經(jīng)淋漓，腰腎部疼痛，不消化引起的胃痛等病。紅花為該方中主要成份之一，具有活血通經(jīng)，散瘀止痛功效。對(duì)本方的臨床療效有重要作用，以紅花中主要有效成分羥基紅花黃色素A為定量監(jiān)控指標(biāo)可有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。本文采用HPLC法測(cè)定其中羥基紅花黃色素A的含量，方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。可作為質(zhì)量控制的方法。

1 儀器、試劑和藥品

島津LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-10Avp檢測(cè)器、CTO-2A柱溫箱、SIL-HTA自動(dòng)進(jìn)樣器、CLASS-VP工作站組成。甲醇、乙腈為色譜純，水為高純水，磷酸為分析純。羥基紅花黃色素A（批號(hào)：111637-200503購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。朱格倫烏日-6批號(hào):20061208 20090606 20090612由呼倫貝爾市蒙醫(yī)院制劑室提供。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱：phenomenexC18柱(250mm×4。6mm,5μm),流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26：2：72）,檢測(cè)波長(zhǎng)為 403nm,流速為 1.0mL·min-1，進(jìn)樣量 10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備:精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1mL含羥基紅花黃色素A 0.04275mg·mL-1。

2.2.2 供試品溶液：取朱格倫烏日-6，研細(xì)，取粉末2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，超聲（功率90W，頻率59kHz）處理40min，放冷，過0.45μm微孔濾膜取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液：按照朱格倫烏日-6的制備工藝制備不含紅花的陰性樣品，并按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，理論塔板數(shù)按羥基紅花黃色素A峰計(jì)算不低于3000。樣品中其他成分對(duì)羥基紅花黃色素A的測(cè)定無(wú)干擾。結(jié)果見圖1。

圖1 羥基紅花黃色素A對(duì)照品（A）、樣品（B）、缺紅花陰性樣品（C）高效液相色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察：精密吸取配制好的對(duì)照品溶液2、6、8、10、15、20、30μL分別進(jìn)樣。以峰面積A為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。羥基紅花黃色素A進(jìn)樣量在0.0855～1.2825μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?；貧w方程為Y=3045787.8X-71952.8 r=0.999。

2.5 精密度試驗(yàn)：取取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，羥基紅花黃色素A色譜峰面積的RSD（n=6）為0.42%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品粉末6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，平行制備供試品溶液6份，在上述色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定。結(jié)果羥基紅花黃色素A含量的平均值（n=6）為1.09mg·g-1，RSD為0.9%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，24h 按上述色譜條件測(cè)定。測(cè)得羥基紅花黃色素A峰面積的RSD（n=6）1.6%。結(jié)果表明供試品溶液室溫旋轉(zhuǎn)24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn)：精密稱取已知含量的樣品約1g，共6份，分別精密加入羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。羥基紅花黃色素A平均回收率（n=9）為100.1%。

表1 朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的回收率

2.9 樣品測(cè)定：取朱格倫烏日-6，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，記錄色譜峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

表2 朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討 論

3.1 試驗(yàn)對(duì)提取方法、提取時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果采用50%甲醇超聲提取40min進(jìn)行供試品溶液的制備，該法提取效能高，干擾物質(zhì)少，操作簡(jiǎn)單、快捷。

3.2 配制一定濃度的羥基紅花黃色素A對(duì)照品溶液，分別在200～500nm波長(zhǎng)內(nèi)進(jìn)行全掃描，羥基紅花黃色素A在403nm處有較強(qiáng)的紫外吸收。實(shí)驗(yàn)選擇403nm進(jìn)行測(cè)定。

3.3 本文建立了一種準(zhǔn)確可靠、專屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)單快捷的定量方法，通過對(duì)黃芩苷的含量測(cè)定，達(dá)到控制該制劑質(zhì)量的目的。