蒙藥嘎日迪對大鼠腸黏膜屏障功能修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究△

崔 箭 裴凌鵬 龐宗然 劉同祥 李樹春

（中央民族大學(xué) 中國少數(shù)民族傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)研究院，北京 100081）

潰瘍性結(jié)腸炎屬蒙醫(yī)結(jié)腸“寶日病”范疇，蒙醫(yī)認(rèn)為該病的發(fā)生與多種因素有關(guān)，其內(nèi)因是致病“三要素”和琪素、希日烏素。外因是飲食不當(dāng)、精神刺激、感染等均可傷及腸胃，腸胃傷則運(yùn)化失常，導(dǎo)致肝內(nèi)惡血（壞血或病血）增多，此惡血經(jīng)由胃時(shí)與巴達(dá)干結(jié)合，在小腸與希日合并最后到達(dá)結(jié)腸與赫依聚合，使腸功能失調(diào)，損傷結(jié)腸脈絡(luò)，使腸粘膜損傷，形成粘膜潰瘍而引發(fā)此病。寶日病熱邪久積結(jié)腸，使熱毒成“粘”，雍而為膿，至血敗肉腐產(chǎn)生潰瘍、出血等病理變化。因此，疏肝除濁，行氣消滯，消熱涼血，消“粘”解毒，活血化瘀，祛腐生肌是治療關(guān)鍵。內(nèi)服嘎日迪膠囊（主要由阿給、野罌粟等組成的蒙藥制劑），具有疏肝除濁，清除腑熱、消“粘”解毒、止痢、止痛等功效[1-2]。本文擬觀察嘎日迪膠囊對大鼠腸粘膜屏障功能損傷的修復(fù)作用，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑：嘎日迪膠囊（中央民族大學(xué)民族藥開發(fā)中試基地提供，批號010312，符合GPP標(biāo)準(zhǔn)，臨用時(shí)充分研磨后用蒸餾水配成所需濃度的混懸液，主要成分為野罌粟堿、阿給黃酮）；柳氮磺吡啶片（北京雙鶴制藥廠）；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、還原型谷胱甘肽（GSH）試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒（購自南京建成生物工程研究所）。

1.1.2 主要儀器：732-B型分光光度計(jì)（北京光學(xué)儀器廠）；離心機(jī)（北京醫(yī)療儀器廠）；全自動血液流變儀（日本日立公司）；PS-2000全自動生化分析儀（美國Beckman公司）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動物：SD大鼠，體重200～250g，雌雄各半，合格證號：XKY-100215-10，購自中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖中心。

1.2 方法

1.2.1 動物分組、造模與給藥：SD大鼠48只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，每組12只。正常對照組與模型組：每日灌胃蒸餾水20mL·kg-1；嘎日迪組：每日灌胃 0.6g·kg-1；陽性藥物組：每日灌胃0.4g·d-1。

1.2.2 腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌培養(yǎng)及腸道細(xì)菌易位率計(jì)算：按無菌要求取回盲部腸系膜淋巴結(jié)，稱重后加1mL無菌等滲鹽水制成勻漿，取均漿液0.1mL接種于血平板，孵育48h后計(jì)算菌落數(shù)。按國際通用標(biāo)準(zhǔn)，以每克淋巴結(jié)組織菌落＞100菌落形成單位為細(xì)菌移位陽性，計(jì)算各組腸道細(xì)菌易位率（即移位陽性動物個數(shù)/該組動物總數(shù)×100%）。

1.2.3 血液流變學(xué)測定：于末次給藥后，腹主動脈取血，加抗凝劑全自動血液流儀檢測血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.4 血清內(nèi)毒素測定：分離血清后，按試劑盒說明書進(jìn)行血清內(nèi)毒素測定。

1.2.5 血清GSH、SOD活性和MDA含量測定：按試劑盒說明書進(jìn)行上述三項(xiàng)指標(biāo)測定。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：各組數(shù)據(jù)均用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以 表示，應(yīng)用t檢驗(yàn)判定其差異。

2 結(jié)果

2.1 一般情況：實(shí)驗(yàn)期間各組動物進(jìn)食、飲水及生長狀況良好，經(jīng)連續(xù)灌胃20天未有死亡。實(shí)驗(yàn)開始與結(jié)束各組大鼠體重差別均無顯著性。

2.2 腸道細(xì)菌易位率：為排除人為污染，實(shí)驗(yàn)將只有腹腔棉拭子培養(yǎng)陽性大鼠的腸系膜淋巴結(jié)培養(yǎng)結(jié)果才能作為細(xì)菌移位陽性率進(jìn)行計(jì)算。與對照組相比，模型組出現(xiàn)細(xì)菌移位率明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；而嘎日迪組與陽性藥物組均低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），具體試驗(yàn)數(shù)據(jù)見表1。菌種進(jìn)一步鑒定可知，腸系膜淋巴結(jié)培養(yǎng)陽性的細(xì)菌主要是以大腸桿菌為主的腸道寄生菌。

2.3 血液流變學(xué)指標(biāo)變化:由表2可見，與對照組相比，模型組大鼠全血粘度、全血還原粘度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而紅細(xì)胞電泳指數(shù)降低，差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，嘎日迪組和陽性藥物組均具有改善大鼠高切變率下的全血粘度、低切變率下的全血粘度、高切變率下的全血還原粘度和低切變率下的全血還原粘度及紅細(xì)胞聚集指數(shù)的作用，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），同時(shí)可升高紅細(xì)胞電泳指數(shù)，差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4 血清內(nèi)毒素水平變化：由表3可見，與對照組比較，模型組血清內(nèi)毒素水平明顯升高，差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，嘎日迪組和陽性藥物組均明顯降低，差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 各組大鼠腸道細(xì)菌移位率

表2 各組大鼠血液流變學(xué)變化（n=12， ±s）

表2 各組大鼠血液流變學(xué)變化（n=12， ±s）

注：與對照組比較：aP＜0.05，存在差異；與模型組比較：bP＜0.05，存在差異。

組別全血粘度（mPa/s）10.00 50.00 150.00紅細(xì)胞電泳指數(shù)對照組模型組噶日迪組陽性藥物組11.01±0.79 13.27±0.87a 12.08±0.81b 12.10±0.77b 6.25±0.48 8.81±0.60a 7.17±0.52b 7.20±0.49b 5.11±0.45 6.90±0.55a 6.05±0.45b 6.02±0.46b 6.72±0.50 6.40±0.48a 6.56±0.46b 6.59±0.46b

表2 （續(xù)）各組大鼠血液流變學(xué)變化（n=12，±s）

表2 （續(xù)）各組大鼠血液流變學(xué)變化（n=12，±s）

注：與對照組比較：aP＜0.05，存在差異；與模型組比較：bP＜0.05，存在差異。

組別全血還原粘度（mPa/s）10.00 50.00 150.00紅細(xì)胞聚集指數(shù)對照組模型組噶日迪組陽性藥物組33.21±1.25 37.09±1.32a 35.47±1.26b 35.20±1.24b 17.09±1.08 20.22±1.20a 18.60±1.17b 18.43±1.15b 14.80±1.01 17.05±1.11a 16.27±1.03b 16.08±1.05b 6.08±0.48 6.37±0.50a 6.20±0.48b 6.18±0.46b

表3 各組大鼠血清內(nèi)毒素水平變化（n=12，±s）

表3 各組大鼠血清內(nèi)毒素水平變化（n=12，±s）

注：與對照組比較：aP＜0.01，差異顯著；與模型組比較：bP＜0.01，差異顯著。

組別 內(nèi)毒素（EU/L）對照組模型組噶日迪組陽性藥物組271.15±28.12 315.07±32.62a 289.57±29.40b 285.09±28.71b

2.5 血清GSH、SOD活性與MDA含量變化：由表4可見，與對照組比較，模型組血清MDA含量明顯升高，GSH和SOD活性明顯降低，差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，嘎日迪組和陽性藥物組均明顯降低血清MDA含量，升高GSH和SOD活性，差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表4 各組大鼠血清GSH、SOD活性和MDA含量水平變化（n=12，±s）

表4 各組大鼠血清GSH、SOD活性和MDA含量水平變化（n=12，±s）

注：與對照組比較：aP＜0.01，差異顯著；與模型組比較：bP＜0.01，差異顯著。

組別 GSH（nmol/L） SOD（nmol/L） MDA（nmol/mL）對照組模型組噶日迪組陽性藥物組12.29±1.80 9.80±1.07a 11.07±1.07b 11.16±1.08b 189.50±6.11 156.21±4.73a 169.48±5.06b 171.09±5.09b 11.06±1.21 13.12±1.33a 12.26±1.30b 12.21±1.27b

3 結(jié)論

腸道不僅能消化、吸收營養(yǎng)物，而且對腸道細(xì)菌及其毒素具有重要的屏障作用。危重病人的腸道不是處于傳統(tǒng)所認(rèn)為的休眠狀態(tài)，而是活躍地參與應(yīng)激反應(yīng)。一般情況，當(dāng)機(jī)體在應(yīng)激狀態(tài)下，存在由神經(jīng)-內(nèi)分泌介導(dǎo)的適應(yīng)性反應(yīng)，即出現(xiàn)選擇性內(nèi)臟血管痙攣以保持心、肺及腦等重要臟器的血液供應(yīng)，結(jié)果導(dǎo)致腸粘膜缺血、缺氧，血管通透性增加，粘膜上皮水腫，上皮細(xì)胞膜及細(xì)胞間連接斷裂，細(xì)胞壞死或凋亡，上皮從絨毛頂端開始脫落甚至粘膜全層脫落而形成潰瘍，導(dǎo)致腸通透性增加、腸道細(xì)菌易位及腸源性膿毒癥的發(fā)生，使之成為全身炎癥反應(yīng)綜合征的細(xì)菌來源，觸發(fā)多器官功能衰竭，甚至危及生命[3-6]。

目前研究多以腸道細(xì)菌移位率及血清內(nèi)毒素水平等作為腸粘膜屏障功能的評價(jià)指標(biāo)[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蒙藥嘎日迪膠囊可有效降低大鼠腸道細(xì)菌移位的發(fā)生與血清內(nèi)毒素含量，腸系膜淋巴結(jié)培養(yǎng)陽性的細(xì)菌主要是以大腸桿菌為主的腸道寄生菌。

GSH和SOD均是機(jī)體重要的自由基對抗劑，而MDA為氧自由基攻擊生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，其值高低間接反映機(jī)體組織細(xì)胞受自由基損傷程度，因此上述三個指標(biāo)可作為評價(jià)機(jī)體抗氧化作用的主要依據(jù)[7-8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蒙藥嘎日迪膠囊具有良好的抗氧化作用，可明顯降低MDA含量，升高GSH和SOD活性，從而抵抗腸粘膜局部自由基損傷，降低粘膜上皮細(xì)胞的死亡率，減少潰瘍面，提高腸通透性。腸粘膜局部的血管通透程度以及血液流變性質(zhì)的改善對于粘膜屏障功能恢復(fù)具有重要的作用[9-10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蒙藥嘎日迪膠囊可降低高且變率下的全血粘度、低且變率下的全血粘度、高且變率下的全血還原粘度和低且變率下的全血還原粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)，同時(shí)升高紅細(xì)胞電泳指數(shù)，具有較好改善腸粘膜局部缺血狀態(tài)，提高血管的通透性。

綜上而言，蒙藥嘎日迪膠囊具有很好修復(fù)腸粘膜屏障損傷的功能，為臨床應(yīng)用提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，究其作用機(jī)理尚需深入地探討。

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