老年人呼吸道嗜血桿菌的分離培養(yǎng)與耐藥性分析

肖 輝

（山東大學(xué)第二醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250033）

嗜血桿菌經(jīng)常存在于正常人的呼吸道中，當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時，它常會導(dǎo)致呼吸道感染。同時由于產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，使其耐藥性有了顯著增加，這給臨床治療帶來了很大困難[1]。由于老年人的生理特點(diǎn)，機(jī)體免疫力差，常成為引起死亡的直接原因。因此，有必要對老年呼吸道嗜血桿菌的感染及耐藥情況進(jìn)行分析，以期對臨床治療提供依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2007年2月至2011年2月在我院門診和住院的60歲以上老年呼吸道感染患者520例，其中男性318例，女性202例，年齡60～86歲，平均（66.5±8.9）歲。選取合格標(biāo)本后，用改良的哥倫比亞巧克力培養(yǎng)基和血平板及時進(jìn)行接種，在37℃下孵育18～24h。然后選取血平板上不生長和巧克力培養(yǎng)基上生長的半透明、灰白色、光滑扁平、露滴狀的可疑菌落。

1.2 方法

在MH平板和血瓊脂平板上做衛(wèi)星試驗(yàn)以及 X1Y因子需要試驗(yàn)，用以鑒別嗜血桿菌的種類。對于MH上衛(wèi)星試驗(yàn)陰性，血瓊脂上衛(wèi)星試驗(yàn)陽性者判定為流感嗜血桿菌；對于血瓊脂和MH上衛(wèi)星試驗(yàn)均陽性者判定為副流感嗜血桿菌。然后采用 K-B紙片擴(kuò)散法分別進(jìn)行抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)，包括氨芐西林、頭孢哌酮、頭孢呋辛、頭孢唑啉、阿莫西林/克拉維酸、氧氟沙星、阿奇霉素、亞胺培南、慶大霉素、復(fù)方磺胺甲噁唑等。β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)采用頭孢硝噻酚法，將菌落涂布于浸濕后的頭孢硝噻酚紙片上，10min內(nèi)變紅則表示是β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株[2]。

2 結(jié) 果

520份標(biāo)本中共分離檢出嗜血桿菌115株，分離率為22.1%（115/520）。其中，流感嗜血桿菌41株，占35.6%（41/115）；副流感嗜血桿菌74株，占64.3%（74/115），未檢到其他嗜血桿菌。通過β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)共檢出38株β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株，產(chǎn)酶率為33.1%（38/115），其中流感嗜血桿菌12株，產(chǎn)酶率31.7%（13/41）；副流感嗜血桿菌23株，產(chǎn)酶率 33.7%（25/74）。嗜血桿菌對抗生素耐藥情況。見表1。

表1 嗜血桿菌對10種抗生素的耐藥情況

3 討 論

研究發(fā)現(xiàn)嗜血桿菌主要寄居在人類上呼吸道黏膜，是引起上呼吸道感染的常見致病菌之一，同時嗜血桿菌還常引起下呼吸道感染以及肺部感染等嚴(yán)重疾病，特別是流感嗜血桿菌致病性非常強(qiáng)[3]。目前普遍認(rèn)為嗜血桿菌導(dǎo)致的疾病大致分為原發(fā)和繼發(fā)感染兩大類，原發(fā)感染主要是外源性感染，多見于兒童，通過呼吸道傳播；而繼發(fā)感染主要由寄居于上呼吸道的無莢膜菌株所致，多見于老年人[4]。有資料[5]顯示老年人的呼吸道嗜血桿菌感染普遍較為嚴(yán)重，一般多發(fā)生在免疫功能低下、抵抗力差或伴有嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病的老年人。因?yàn)槔夏昊颊呱頇C(jī)能和免疫功能明顯衰退，加之侵入性操作容易損害機(jī)體的屏障功能，有的是因?yàn)槭褂妹庖咭种苿┗蛱瞧べ|(zhì)激素抑制機(jī)體的炎癥反應(yīng)，吞噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞功能減弱，機(jī)體的免疫反應(yīng)降低而誘發(fā)感染。

我們在520份標(biāo)本中共分離檢出嗜血桿菌115株，分離率為22.1%。其中流感嗜血桿菌41株，占35.6%；副流感嗜血桿菌74株，占64.3%。本組檢出的嗜血桿菌以副流感嗜血桿菌為主，與其他文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致[6]。說明副流感嗜血桿菌已逐漸成為引發(fā)呼吸道感染性疾病的主要嗜血桿菌。我們發(fā)現(xiàn)在普通培養(yǎng)基中嗜血桿菌根本無法檢出，其主要原因是該菌為苛養(yǎng)菌，生長時需要X和V因子，其檢出率受到多種因素的影響，同時標(biāo)本和培養(yǎng)基的質(zhì)量以及實(shí)驗(yàn)方法也是非常重要的因素，在消除以上不利因素的情況下才能提高嗜血桿菌的檢出率[7]。

研究[8]認(rèn)為嗜血桿菌的耐藥機(jī)制主要是因其容易產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，該酶能水解氨芐西林，因此隨著β-內(nèi)酰胺酶陽性率的增高，嗜血桿菌對氨芐西林的耐藥性也隨之增長。我們的研究顯示，嗜血桿菌的產(chǎn)酶率為33.1%，其中流感嗜血桿菌產(chǎn)酶率31.7%，副流感嗜血桿菌的產(chǎn)酶率 33.7%，二者無顯著性差異（P＞0.05）?？梢?，嗜血桿菌的產(chǎn)酶率非常高，并且β-內(nèi)酰胺酶的測定能預(yù)測嗜血桿菌對青霉素、氨芐西林和阿莫西林的耐藥情況。我們藥敏結(jié)果顯示，嗜血桿菌對 10 種抗生素的耐藥率有差異，其中嗜血桿菌對阿莫西林/克拉維酸、阿奇霉素、亞胺培南、頭孢哌酮、頭孢呋辛以及頭孢唑啉的耐藥性較低，均＜10%，所以目前仍然是治療嗜血桿菌的首選藥物。而對氨芐西林、復(fù)方磺胺甲噁唑、慶大霉素、氧氟沙星等耐藥卻非常明顯。研究[9]發(fā)現(xiàn)嗜血桿菌耐藥性的主要機(jī)理是嗜血桿菌產(chǎn)生以質(zhì)粒介導(dǎo)的β-內(nèi)酰胺酶，其次是由于細(xì)菌細(xì)胞膜通透性降低和青霉素結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)位點(diǎn)發(fā)生改變，使β-內(nèi)酰胺類抗菌素活性明顯下降。另外一個重要因素臨床上廣譜抗生素的濫用，使的耐藥菌株選擇性生長，增加了耐藥菌的擴(kuò)散機(jī)會。

綜上所述，本地區(qū)老年呼吸道嗜血桿菌感染患者中以感染副流感嗜血桿菌為主，對β-內(nèi)酰胺酶陽性檢出率較高，所以應(yīng)加強(qiáng)對呼吸道患者標(biāo)本的常規(guī)分離培養(yǎng)和藥物敏感試驗(yàn)，嚴(yán)格掌握抗菌藥物使用指征，防止濫用抗菌藥物，指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理使用抗菌素，以減少和防止耐藥嗜血桿菌的產(chǎn)生，降低其耐藥率。

[1]潘虹,劉春江,黃慶,等.2008年下呼吸道感染病原菌分布與耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2009,19 (14):1878-1881.

[2]李影林.臨床微生物學(xué)及檢驗(yàn)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:282.

[3]陳東科,胡云建,張秀珍.嗜血桿菌分離培養(yǎng)的評價與應(yīng)用[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2001,24 (1): 28-30.

[4]方曉霞,陳維媚,王文天,等.我院嗜血桿菌分離率和耐藥監(jiān)測[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2002,12(12):892- 894.

[5]張淑芳,楊廣民,吳多榮,等.老年患者呼吸道嗜血桿菌的分離及耐藥性分析[J].中國老年學(xué)雜志,2007,27 (15):1474 -1476.

[6]朱澤航,蔡逸婷.人群呼吸道中嗜血桿菌的分布及其耐藥性[J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2007,25(1):13-16.

[7]陳東科,張秀珍.用于嗜血桿菌鑒定的衛(wèi)星試驗(yàn)影響因素研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2004,19(1):121.

[8]王崢嶸,朱昀,劉振英.老年下呼吸道感染患者病原菌種類與藥敏分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2010,20(8):1168-1169.

[9]劉華,馬珍.嗜血桿菌的耐藥性[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志,2005,4(21):471-473.