高效液相色譜法測(cè)定維吾爾藥制劑西帕依固齦液中沒食子酸含量

司馬義江·阿布都熱西提，阿依努爾·阿木提

(新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，新疆 喀什 844000)

西帕依固齦液是由新疆維吾爾族習(xí)用單味藥材沒食子經(jīng)提取精制而成的漱口液，具有健齒固齦、清血止痛之功效，臨床上用于牙周疾病的治療。部頒標(biāo)準(zhǔn)僅采用定性鑒別試驗(yàn)來控制該制劑的質(zhì)量。沒食子酸是西帕依固齦液的主要有效成分之一，研究測(cè)定該成分含量的方法可以更好地反映和控制西帕依固齦液的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜系統(tǒng)，包括LC 20AT型雙泵，SIL 20AC型自動(dòng)進(jìn)樣器，SPD-M 20A型PDA檢測(cè)器;島津uv-2450型紫外可見分光光度計(jì);BP211D型分析天平(德國(guó)Sartorius公司)。沒食子酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0831-9501);西帕依固齦液(新疆奇康哈博維藥有限公司，批號(hào)分別為090401，100136，101018);甲醇為色譜純(美國(guó)TEDIA試劑公司)，磷酸為分析純(天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心)，所有色譜用試劑均用0.45 gm微孔濾膜過濾;水為重蒸餾水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:VP-ODS柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇-0.025%磷酸溶液(4∶96);流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):270 nm;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:10μL;分析方法:外標(biāo)法[1]。取對(duì)照品溶液及供試品溶液，按上述色譜條件各進(jìn)樣10μL，同時(shí)采集270 nm光譜數(shù)據(jù)。結(jié)果供試品溶液色譜峰與對(duì)照品沒食子酸一致，沒食子酸對(duì)照品保留時(shí)間為16.2 min，理論板數(shù)大于5 000。高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液配制

精密稱取沒食子酸對(duì)照品，加流動(dòng)相溶解制成0.106 0 g/L的溶液，作為對(duì)照品貯備液，精密量取該溶液5 mL，置50 mL量瓶中加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密吸取樣品1 mL，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度搖勻即得供試品溶液。微孔濾膜濾過，備用。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品貯備液(0.106 0 g/L)1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別取10μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件操作，以6次測(cè)定的峰面積平均值考察線性范圍。線性回歸方程為 Y=2.4×104X-1.4 ×103，r=0.999 6(n=6)。結(jié)果表明，沒食子酸質(zhì)量濃度在10.6～106.0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密量取對(duì)照品貯備液(0.106 0 g/L)5 mL，置50 mL量瓶中加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.42%(n=5)，表明方法有較高的精密度。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一溶液，分別于 0，1，2，4，6 h 時(shí)進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μL，測(cè)定沒食子酸的峰面積。結(jié)果的 RSD為1.24%。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)樣品(批號(hào)為100136)，平行制備5份供試品溶液并依法測(cè)定。結(jié)果沒食子酸含量的 RSD為0.89%。

加樣回收試驗(yàn):精密量取已知含量的樣品(批號(hào)為090401，含量為34.94μg/mL)6份，各1.0 mL，分別置100 mL量瓶中，再分別加入對(duì)照品溶液 1.0，1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，加流動(dòng)相稀釋至刻度，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 沒食子酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算沒食子酸含量。結(jié)果批號(hào)分別為090401，100136，101018的樣品中沒食子酸含量分別為0.03494，0.03718，0.032 56 g/L。

3 討論

取沒食子酸對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋成0.1 g/L溶液，用紫外可見分光光度計(jì)于200～400 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行掃描，可見其在220，270 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，但在220 nm檢測(cè)波長(zhǎng)下，流動(dòng)相中甲醇及樣品中其他物質(zhì)的紫外吸收干擾較大，基線不穩(wěn)，故選擇270 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

采用文獻(xiàn)[2]的方法試驗(yàn)，流動(dòng)相用甲醇-水(5∶95)、水-乙酸(98∶2)、甲醇-0.5%冰醋酸(15∶85)，在該制劑中沒食子酸的分離效果均不佳?？紤]到?jīng)]食子酸顯酸性，故流動(dòng)相的pH對(duì)沒食子酸的分離影響較大，通過不斷改變甲醇與磷酸水溶液的比例及流速，選定甲醇-0.025%磷酸水溶液(4∶96)及流速1mL/min比較合適，分離度好且保留時(shí)間適宜。

本試驗(yàn)測(cè)定了不同批號(hào)的西帕依固齦液，結(jié)果均能檢出沒食子酸，但含量有所差異。筆者通過試驗(yàn)研究，建立了測(cè)定西帕依固齦液中沒食子酸含量的高效液相色譜法，取樣量少，方法簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為質(zhì)量控制分析方法，為沒食子酸的含量測(cè)定提供有效方法。

[1]WS3-BW-0123-98，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·維吾爾藥分冊(cè)[S].

[2]徐小平，王 曙.HPLC測(cè)定4種藏藥中沒食子酸的含量[J].華西藥學(xué)雜志，2003，18(6):448.