天丹通絡(luò)膠囊中總黃酮的含量測定

江蘇省蘇北人民醫(yī)院（225001）盧善亮

天丹通絡(luò)膠囊是用于腦血管疾病的一種中成藥，具有活血通絡(luò)，熄風(fēng)化痰的功效。藥理學(xué)試驗結(jié)果顯示，天丹通絡(luò)膠囊具有抑制血液凝血系統(tǒng)、提高血液纖活性、抑制血栓形成、促進(jìn)血栓溶解、抗腦缺血作用，主要用于中風(fēng)中經(jīng)絡(luò)，風(fēng)痰淤血痹阻脈絡(luò)證，癥見半身不遂、偏身麻木、口眼歪斜、語言蹇塞；腦梗死急性期、恢復(fù)早期見上述證候者。天丹通絡(luò)膠囊主要含川芎、槐花、豨薟草、丹參、水蛭、天麻、石菖蒲、人工牛黃、黃芪、牛膝等10味中草藥。其中主味藥槐花的主要成分為黃酮，本文采用分光光度法測定天丹通絡(luò)膠囊中總黃酮的含量，方法操作簡便，快速可靠，完全可以用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Cary50型紫外可見分光光度計(美國瓦里安中國有限公司)；JA2003電子天平（上海精科天平廠）；KQ-400KDB型高功率數(shù)控超聲器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 蘆丁對照品（廠家提供，批號20090508），天丹通絡(luò)膠囊（山東鳳凰制藥，批號0912221，1003205，1005209）；其余試劑均為分析純。

附表1 提取方法考察（The test of extraction way）

附表2 提取時間的考察（The test of extraction time）

附表3 加樣回收率實驗（The determination of recovery rate）

附表4 樣品測定（The assay of the samples）

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備[1]精密稱取105℃干燥至恒重的蘆丁對照品100mg，置50mL量瓶中，加甲醇30mL，置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，得蘆丁對照品溶液。

2.2 線性關(guān)系的考察 精密量取蘆丁對照品溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL與6.0mL，分別置25mL量瓶中，各加水6mL，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，使混勻，放置6分鐘，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，在500nm的波長處測定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程為y=0.011x-0.0194 (r=0.9999)，表明在8～48μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3 提取方法的考察[2]

2.3.1 取膠囊內(nèi)容物1.5g，于60℃干燥1小時，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚120ml，加熱回流至提取液無色，放冷，棄去乙醚液。再加甲醇9 0 m L，加熱回流至提取液無色，移置100mL量瓶中，用甲醇少量洗滌容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻[1]。精密量取10mL，置2 5 m L 量瓶中，加水至刻度，搖勻即得。精密量取1mL置2 5 m L 量瓶中，按2.2項下方法，在500nm的波長處測定吸收度。

2.3.2 取膠囊內(nèi)容物1g，于60℃干燥1小時，精密稱定，置于50mL錐形瓶中，分別加入60%，70%，80%的乙醇溶液，超聲波振蕩1小時后，取續(xù)濾液10ml，置100mL量瓶中精密量取3mL置25mL量瓶中，按2.2項下方法，在500nm的波長處測定吸收度。結(jié)果見附表1。結(jié)果為70%的乙醇超聲波振蕩提取的方法提取率最高。

2.4 提取時間的考察 取膠囊內(nèi)容物1g，于60℃干燥1小時，精密稱定，置于50mL錐形瓶中，分別加入50mL70%的乙醇溶液，分別超聲波振蕩10min、20min、30min、45min、1h、2h、3h小時，用水補足，過濾，取續(xù)濾液10ml，置100ml量瓶中。精密量取3ml置25ml量瓶中，按2.2項下方法，在500nm的波長處測定吸收度。結(jié)果見附表2。由附表2可知，超聲波振蕩1h提取率最高。

2.5 重復(fù)性實驗 取本品粗粉5份，每份約1g，精密稱定，置于50ml錐形瓶中，分別加入50mL 70%的乙醇溶液，分別超聲波振蕩1h，用水補足，過濾，取續(xù)濾液10ml，置100ml量瓶中。精密量取3ml置25ml量瓶中，按2.1.2項下方法，在500nm的波長處測定吸收度。RSD=0.4%(n=5)，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性實驗 取樣品適量，精密稱定，置于50mL錐形瓶中，加入70%的乙醇溶液，超聲波振蕩1h，取續(xù)濾液10mL，置100mL量瓶中，精密量取3mL置25mL量瓶中，按2.2項下方法，在500nm的波長處測定吸收度。每隔1h測定一次，連續(xù)測定5h，RSD=0.8%，表明樣品溶液在5h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率實驗 精密稱取天丹通絡(luò)膠囊膠囊內(nèi)容物約0.8g（6份），分別加入對照品約0.10g，于50mL錐形瓶中，加入70%的乙醇溶液，超聲波振蕩1h，取續(xù)濾液10mL，置100mL量瓶中，精密量取3mL置25mL量瓶中，按2.2項下方法，在500nm的波長處測定吸收度。結(jié)果見附表3。

2.8 樣品測定 精密稱取天丹通絡(luò)膠囊內(nèi)容物約1.0g（3份，3個批號），置于50ml錐形瓶中，加入70%的乙醇溶液，超聲波振蕩1h，取續(xù)濾液10ml，置100ml量瓶中精密量取3ml，置25ml量瓶中，按2.2項下方法，在500nm的波長處測定吸收度。按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算總黃酮的含量，結(jié)果見附表4。

3 討論

3.1 天丹通絡(luò)膠囊是腦疾病患者常用藥物。目前尚未有對其進(jìn)行質(zhì)量控制的報道。本方法采用分光光度法，測其所含總黃酮的量，方法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，是對天丹通絡(luò)膠囊進(jìn)行質(zhì)控的良好的方法。

3.2 筆者對總黃酮提取條件進(jìn)行考察，索氏提取法是藥典中所記載對槐花中異黃酮進(jìn)行提取的方法。但實驗過程中發(fā)現(xiàn)，索氏提取法方法繁瑣，提取率不高，故采用超聲波提取法進(jìn)行提取，方法簡便高效。

3.3 本文采用的硝酸鋁顯色法是藥典中所記載的對總黃酮測定的方法。該方法用于各類中藥的總黃酮測定中，準(zhǔn)確可靠。