紫外－可見(jiàn)分光光度法測(cè)定楓葉中的單寧

蔣紅芝 蔣蓉芝 義崇寬

摘要：采用紫外－可見(jiàn)分光光度法在２７５ ｎｍ處對(duì)楓葉中單寧的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，紫外分光光度法測(cè)單寧的線性關(guān)系良好，回歸方程為Ａ＝３７．２４９c－０．００１ ８，Ｒ２＝０．９９９ ６，平均回收率為９９．９４％，ＲＳＤ＝０．７０％，該法測(cè)定楓葉中單寧的含量簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：楓葉；單寧；紫外－可見(jiàn)分光光度法

中圖分類(lèi)號(hào)：Ｏ６５７．３２文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）16－3590-02

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｎｎｉｎ ｉｎ Ｍａｐｌｅ Ｌｅａｆ ｂｙ ＵＶ-Vis Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

ＪＩＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｚｈｉ１，ＪＩＡＮＧ Ｒｏｎｇ－ｚｈｉ２，ＹＩ Ｃhｏｎｇ－ｋｕａｎ１

（１． Ｇｕａｎｇｘｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｖｏｃａｔｉｏｎ－Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００７， Ｃｈｉｎａ；

２． Ｗｕｚｈｏｕ Ｍａｔｅｒｎａｌ ＆ Ｃｈｉｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｗｕｚｈｏｕ ５４３００２， Ｇｕａｎｇｘｉ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔａｎｎｉｎ ｉｎ ｍａｐｌｅ ｌｅａｆ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｔ ２７５ ｎｍ ｂｙ ＵＶ－Ｖｉｓ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔs ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ， ｔｈｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｗａｓ Ａ＝３７．２４９c－０．００１ ８， Ｒ２＝０．９９９ ６， ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９９．９４％ ｗｉｔｈ ＲＳＤ ｏｆ ０．７０％． Ｉｎ ａ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ， ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ， ｒａｐｉｄ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔａｎｎｉｎ ｉｎ ｍａｐｌｅ ｌｅａｆ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｍａｐｌｅ ｌｅａｆ； ｔａｎｎｉｎ； ＵＶ－Ｖｉｓ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ

單寧又稱(chēng)單寧酸、鞣酸，通常指相對(duì)分子量在５００～３ ０００ Da，能沉淀蛋白質(zhì)、生物堿的水溶性多酚化合物。這類(lèi)化合物廣泛存在于植物的葉、果、根及皮等部位，常用于醫(yī)藥、食品、制革、日用化學(xué)品、水處理等領(lǐng)域［１］。特定分子結(jié)構(gòu)的單寧具有生理活性，能與生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)、多糖、核酸等發(fā)生作用。食物中過(guò)量的單寧會(huì)產(chǎn)生抗?fàn)I養(yǎng)作用，如降低蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、影響機(jī)體對(duì)維生素Ａ和維生素Ｂ１２的攝?。郏玻?，單寧還具有收斂和抗菌作用［３］。單寧作為功能性組分，可用于生產(chǎn)食品添加劑、風(fēng)味劑等；在化妝品中主要起收斂、防曬、美白、抗皺、保濕和防腐等作用［２］。

楓樹(shù)，別名楓香樹(shù)、大葉楓、雞爪楓，落葉喬木，葉為掌狀３裂或５淺裂，春天葉片呈綠色，秋季為紅色，常以根、葉、果及樹(shù)脂入藥，夏季采葉，全年采根。根性味苦、溫，可祛風(fēng)止痛，用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、牙痛。葉性味苦、平，可祛風(fēng)除濕、行氣止痛，用于腸炎、痢疾和胃痛等癥，外用治毒蜂螫傷，皮膚濕疹［４］。

目前，單寧測(cè)定方法包括皮粉法、干酪素法、膠體滴定法、絡(luò)合滴定法、氧化滴定法、分光光度法及高效液相色譜法等。皮粉法步驟繁瑣，誤差較大。高錳酸鉀滴定法終點(diǎn)誤差大，絡(luò)合滴定法在堿性條件下操作，鞣酸不穩(wěn)定，而干酪素法操作復(fù)雜［２，３］。紫外－可見(jiàn)分光光度法操作簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確度高。本文采用紫外－可見(jiàn)分光光度法測(cè)定楓葉中單寧的含量，為快速分析單寧提供參考。

１材料與方法

１．１材料

單寧對(duì)照品，購(gòu)于ｓｉｇｍａ公司，分析純；去離子水。

１．２儀器

Ｔ６新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；ＡＬ２０４電子天平（梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司）；ＨＨ－Ｓ數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠）。

１．３方法

１．３．１貯備液配制準(zhǔn)確稱(chēng)取單寧０．０１０ ０ ｇ，用去離子水定容至１００ ｍＬ，配制成０．１０ ｍｇ／ｍＬ單寧貯備液。

１．３．２波長(zhǎng)選擇吸取上述貯備液５．０ ｍＬ，以去離子水定容于２５ ｍＬ，配制０．０５ ｍｇ／ｍＬ的單寧溶液，于２００～４００ ｎｍ測(cè)定其紫外－可見(jiàn)光譜圖。

１．３．３繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線精確吸取不同體積的貯備液（０～５．０ ｍＬ）于２５ ｍＬ比色管中，加去離子水至刻度，搖勻，在２７５ ｎｍ測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

１．３．４溫度對(duì)單寧提取效果的影響分別稱(chēng)?。保埃埃?ｇ經(jīng)粉碎的葉、莖、皮，放入不同的燒杯中，各加去離子水１００ ｍＬ，水浴加熱，在不同溫度下提取３０ ｍｉｎ，冷卻，過(guò)濾，定容至１００ ｍＬ，稀釋后在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定樣品吸光度，公式：?jiǎn)螌幒?/ｍｇ/１００ ｇ ＝ ｃ×稀釋倍數(shù)×１ ０００，計(jì)算單寧含量。其中，ｃ為回歸方程中吸光度對(duì)應(yīng)的單寧濃度，單位ｍｇ／ｍＬ。

１．３．５時(shí)間對(duì)單寧提取效果的影響稱(chēng)?。保埃埃?ｇ葉末樣品，加去離子水１００ ｍＬ，１００ ℃水浴加熱，提取不同時(shí)間，冷卻，過(guò)濾，定容至１００ ｍＬ，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定提取液的吸光度，計(jì)算單寧含量。

１．３．６料液比對(duì)單寧提取效果的影響稱(chēng)?。保埃埃?ｇ葉末樣品，按不同的料液比加去離子水，１００ ℃水浴加熱，提?。常?ｍｉｎ，冷卻，過(guò)濾，定容至１００ ｍＬ，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定提取液的吸光度，計(jì)算單寧含量。

２結(jié)果與分析

１）單寧的紫外－可見(jiàn)光譜圖。由圖１可知，單寧的測(cè)定波長(zhǎng)為２７５ ｎｍ。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得其回歸方程為Ａ＝３７．２４９ｃ－０．００１ ８，Ｒ２＝０．９９９ ６，在０～０．０２ ｍｇ／ｍＬ濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

２）溫度對(duì)單寧提取效果的影響。由圖２可知，楓葉不同部位單寧含量大小為：皮＞葉＞莖，１００ ℃提取的單寧含量最高。由于前處理簡(jiǎn)單，樣品粉碎后均一，故后續(xù)試驗(yàn)選用葉做原料，１００ ℃水浴提取。

３）時(shí)間對(duì)單寧提取效果的影響。由圖３可知，提取時(shí)間為３０ ｍｉｎ時(shí)效果最好。

４）料液比對(duì)單寧提取效果的影響。由圖４可知，隨著料液比增大，單寧提取效果下降，料液比為１∶３．３時(shí)提取效果較好。

５）精密度試驗(yàn)。取同一批樣品分別制備５份樣品溶液，測(cè)定吸光度并計(jì)算單寧的含量，結(jié)果見(jiàn)表１。由表１可知，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（ＲＳＤ）為２．３６７％。

６）回收率試驗(yàn)。取已測(cè)得單寧含量的楓葉提取液０．５ ｍＬ，再加０．１０ ｍｇ／ｍＬ單寧對(duì)照品溶液１．５ ｍＬ，按上述方法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表２。由表２可知平均回收率為９９．９４％。

３結(jié)論

用水作為提取劑，提取楓葉中單寧，在料液比為１∶３．３，１００ ℃水浴加熱３０ ｍｉｎ，采用紫外－可見(jiàn)分光法測(cè)定楓葉中的單寧達(dá)到３ ０６７ ｍｇ／１００ ｇ，不同楓葉部位的單寧含量依次為：皮＞葉＞莖。該方法的平均回收率為９９．９４％±０．７０％，ＲＳＤ為０．７０％，回收率高且重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)單快速，結(jié)果可靠。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 但衛(wèi)華，程鳳俠．制革化學(xué)及工藝學(xué)［Ｍ］． 北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，２００６．

［２］ 王全杰，任方萍，高龍．植物單寧的含量測(cè)定方法［Ｊ］．西部皮革，２０１０，３２（２３）：２６－３１．

［３］ 李春華，沈國(guó)榮，府子琪．鞣酸軟膏中鞣酸的含量測(cè)定［Ｊ］．兒科藥學(xué)雜志，２００８，１４（５）：３８－３９．

［４］ 《全國(guó)中草藥匯編》編寫(xiě)組．全國(guó)中草藥匯編［Ｍ］．北京：人民衛(wèi)生出版社，１９７６．