顱咽管瘤患兒血清IL-6、IL-8、MIP-1α含量變化及其意義探討①

劉志忠 丁秀榮 袁寶軍 石 峻 康熙雄

(首都醫(yī)科大學附屬北京天壇醫(yī)院實驗診斷中心，北京100050)

兒童顱咽管瘤是常見的先天性顱內(nèi)腫瘤，占兒童腦腫瘤的10%，占兒童鞍區(qū)腫瘤的54%，幾乎全部是牙釉質(zhì)型，絕大多數(shù)病例有囊變和鈣化，及與視神經(jīng)、視交叉、垂體柄等結(jié)構(gòu)粘連，一些顱咽管瘤還具有侵襲性生長及易復發(fā)的特點，故張玉琪等［1］認為兒童顱咽管瘤應(yīng)屬惡性腫瘤。兒童顱咽管瘤的病因至今不詳。炎癥與腫瘤的關(guān)聯(lián)已得到廣泛的關(guān)注，在腫瘤微環(huán)境中，炎癥細胞和分子幾乎影響到腫瘤進展的每一方面［2］。本實驗采用高通量液體芯片技術(shù)檢測了顱咽管瘤患兒外周血清中IL-6、IL-8和MIP-1α三種炎癥因子的含量，旨在探討它們在兒童顱咽管瘤患者血清中的表達情況，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 39例顱咽管瘤患兒，均選自2010年2月至2011年2月期間在首都醫(yī)科大學附屬北京天壇醫(yī)院住院的患者，年齡5～15歲，平均年齡(10.65±4.38)歲，根據(jù)顱咽管瘤組有無術(shù)后復發(fā)分為初發(fā)組(21例)，復發(fā)組(18例)，術(shù)后復發(fā)時間20～35個月。所有病例均排除合并全身感染、心、肝、腎、肺疾病、糖尿病及其他腫瘤。健康對照組:為2010年間在河北聯(lián)合大學附屬醫(yī)院健康體檢兒童，共54例，其中男34例，女20例，年齡5～15歲，平均年齡(10.14 ±3.28)歲，與腫瘤組比較，年齡、性別比例均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。入選者均無高血壓、心臟病、糖尿病、肝病、腎病和其他全身系統(tǒng)性疾病。

1.2 方法

1.2.1 標本的收集和保存 收集入選患者入院次晨空腹靜脈血3 ml于黃帽真空采血管中，室溫下靜置半小時，3 000 r/min離心5分鐘，提取血清，置于-80℃冰箱保存，待檢。健康對照兒童在體檢當日空腹抽取靜脈血3 ml，處理保存方式同病例組。

1.2.2 血清IL-6、IL-8、MIP-1α 含量檢測 血清 IL-6、IL-8、MIP-1α含量檢測采用美國Luminex公司生產(chǎn)的Luminex 200多功能液相芯片分析儀檢測。試劑為高通量液體芯片檢測試劑盒(Milliplex Human Cytokine/Chemokine Immunoassay)，產(chǎn)自美國Millipore公司。操作過程嚴格按照試劑盒操作說明進行。

1.3 統(tǒng)計方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析。計量資料進行正態(tài)性檢驗，符合正態(tài)分布的計量資料采用±s表示，兩組均數(shù)之間差別的比較采用t檢驗;非正態(tài)分布的計量資料用中位數(shù)M和四分位數(shù)間距(Q25-Q75)表示，組間比較采用秩和檢驗。計數(shù)資料采用χ2檢驗。兩變量相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

表1 病例組和對照組人口學數(shù)據(jù)及血清IL-6和IL-8、MIP-1α濃度Tab.1 The levels of the serum IL-6，IL-8 and MIP-1α in patients and healthy controls

2 結(jié)果

2.1 顱咽管瘤患兒血清IL-6、IL-8、MIP-1α 濃度變化 顱咽管瘤組和健康對照組IL-6、IL-8、MIP-1α濃度變化如表1所示。腫瘤組三種炎癥因子濃度與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義，P值均＜0.01。其中MIP-1α濃度變化最為顯著，腫瘤組的濃度是健康對照組濃度的112.81倍，而IL-8、IL-6濃度分別是對照組的23.67倍和8.14倍。

2.2 顱咽管瘤血清IL-6、IL-8、MIP-1α 濃度與腫瘤復發(fā)的關(guān)系 研究發(fā)現(xiàn)，顱咽管瘤復發(fā)患兒MIP-1a血清濃度為 355.2(97.45 ～1 028.78)pg/ml，初發(fā)顱咽管瘤患兒MIP-1α血清濃度為105.5(21.58～278.0)pg/ml，二者比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。其他兩種炎癥因子兩組間比較則未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學差異(均P＞0.05)。如表2所示。

2.3 顱咽管瘤患兒血清IL-6、IL-8、MIP-1α 濃度相關(guān)性 Spearman等級相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，血清IL-6和IL-8 呈正相關(guān)關(guān)系，rs=0.668，P ＜0.01;血清 IL-6和 MIP-1α 呈正相關(guān)關(guān)系，rs=0.734，P ＜0.01;血清IL-8 和 MIP-1α 呈正相關(guān)關(guān)系，rs=0.926，P ＜0.01。其中，血清IL-8和MIP-1α濃度的相關(guān)性最好。

3 討論

顱咽管瘤好發(fā)于學齡前兒童，并且腫瘤組織生長緩慢，多數(shù)病例等到腫瘤直徑達到3 cm以上才出現(xiàn)明顯的癥狀，從癥狀開始出現(xiàn)到確診通常需1～2年的時間。大量的臨床研究證實，顱咽管瘤的炎癥反應(yīng)是導致其與周圍重要結(jié)構(gòu)緊密粘連的重要原因［3，4］。黃廣龍等［5］也研究證明了成釉細胞型顱咽管瘤存在嚴重的炎癥反應(yīng)，腫瘤組織及腫瘤間質(zhì)中炎癥細胞聚集，C-反應(yīng)蛋白及 NF-κB水平明顯升高，NF-κB信號通路被過度激活。

IL-6是一種具有廣泛免疫調(diào)節(jié)作用的細胞因子，有學者發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤細胞株、腦膠質(zhì)瘤組織及腫瘤浸潤巨噬細胞、淋巴細胞中都有IL-6的基因表達，并且基因的表達強弱與腦膠質(zhì)瘤的惡性程度有關(guān)［6］。在本實驗中，我們發(fā)現(xiàn)腫瘤組IL-6濃度顯著高于對照組，說明在兒童顱咽管瘤中也可能存在IL-6的自分泌合成，從而導致外周血中IL-6的升高。顱咽管瘤的腫瘤組織及腫瘤間質(zhì)中有炎癥細胞聚集［5］，如巨噬細胞、淋巴細胞等，我們推斷IL-6的旁分泌途徑也是兒童顱咽管瘤患兒血清IL-6濃度升高的原因之一。

表2 初發(fā)和復發(fā)顱咽管瘤患兒血清IL-6、IL-8和MIP-1α濃度Tab.2 The levels of the serum IL-6，IL-8，MIP-1α in original and recurrence brain tumor children

白細胞介素8(IL-8)屬于ELR+CXC亞家族趨化因子，在適當?shù)拇碳は聠魏思毎?、巨噬細胞、中性粒細胞、淋巴細胞及人類多種腫瘤細胞和細胞系均可合成和分泌IL-8。在本實驗中，顱咽管瘤患兒血清中IL-8含量明顯升高，這說明腫瘤組織可能以自分泌或旁分泌的方式大量生成了IL-8，從而導致外周血中IL-8含量的升高。IL-8作為一種促血管生長因子，通過自分泌或旁分泌方式刺激腫瘤血管形成的作用受到了廣泛關(guān)注。在腦部腫瘤組織中，IL-8的這種促血管增生作用也得到了證實［7］。由于兒童顱咽管瘤具有侵襲性生長及易復發(fā)等惡性腫瘤的特點［1］，故升高的IL-8可能促進了該腫瘤的血管新生，其確切作用還需組織學研究印證。

MIP-1α是趨化因子CC亞族的成員之一，單核細胞、中性粒細胞、活化T細胞等非腫瘤細胞及某些腫瘤細胞在適當?shù)拇碳は戮煞置诤铣蒑IP-1α。MIP-1α與受體結(jié)合后對靶細胞有趨化作用并促使其激活，產(chǎn)生TNF-α、IL-1和 IL-6等，釋放活性氧、蛋白水解酶，在慢性炎癥、微血管形成等方面發(fā)揮著重要的作用。國外學者在研究腦膠質(zhì)瘤細胞時發(fā)現(xiàn)，C6膠質(zhì)瘤細胞受細胞外ATP(三磷酸腺苷)刺激，細胞表達MIP-1α的量增加，同時培養(yǎng)上清MIP-1α濃度也增加，升高的MIP-1α能夠促進腫瘤細胞遷移。在本實驗中無論是顱咽管瘤初發(fā)組還是復發(fā)組血清MIP-1α濃度較對照組均有顯著升高，證明MIP-1α參與的炎癥反應(yīng)與顱咽管瘤形成發(fā)展有關(guān)［8］。

術(shù)后易復發(fā)是顱咽管瘤最大的特點，如果手術(shù)不能全切，則術(shù)后幾乎均會復發(fā)［9］。即使是有影像學證實的全切患者，術(shù)后仍有一定的復發(fā)率，從0～27.3%各家報道不等［10］。如今在臨床實踐中顱咽管瘤的復發(fā)日益受到人們關(guān)注，但其分子機制仍研究甚少。本實驗結(jié)果表明，三種炎癥因子中，只有MIP-1α濃度在初發(fā)組與復發(fā)組之間有顯著差異，提示MIP-1α促進了顱咽管瘤復發(fā)過程。大量文獻報道，IL-6和 IL-8是 NF-κB信號通路的重要靶分子［11］，但 MIP-1α 與 NF-κB 的關(guān)系則未見權(quán)威報道。我們認為，MIP-1α與IL-6、IL-8可能受不同的信號通路調(diào)節(jié)。顱咽管瘤中與IL-6、IL-8相關(guān)的NF-κB 信號通路強烈激活［5］，與 MIP-1α 相關(guān)的信號通路的表達情況，有必要深入研究。通過MIP-1α相關(guān)信號通路的研究，可能發(fā)現(xiàn)治療該腫瘤復發(fā)的作用靶點。目前，術(shù)后影像學隨訪是監(jiān)測顱咽管瘤復發(fā)的主要工具。由于CT有潛在的放射作用，患兒復查宜采用MRI檢查。但MRI檢查價格過高，定期多次復查會加重患者家庭的經(jīng)濟負擔。筆者認為可將MIP-1α血清濃度檢測作為顱咽管瘤復發(fā)的篩選試驗，濃度升高者再進一步做影像學檢查既可節(jié)約醫(yī)療資源又可減輕患者的經(jīng)濟負擔。

總之，顱咽管瘤患兒血清IL-6、IL-8和MIP-1α三種炎癥因子水平均有不同程度升高，其中MIP-1α升高最為顯著，且與顱咽管瘤的復發(fā)有關(guān)。針對MIP-1α及其相關(guān)分子的研究，有可能發(fā)現(xiàn)有價值的診斷指標及理想的治療靶點。

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