獨(dú)一味巴布膏對(duì)急性軟組織挫傷模型大鼠的實(shí)驗(yàn)研究

何夢(mèng)婕，楊婷，楊漾，蕭海容，張康寧，廖立東，包旭*

(1.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川成都610041;2.甘肅獨(dú)一味生物制藥股份有限公司，甘肅康縣746500)

獨(dú)一味Lamiophlomis rotate(Benth.)Kudo為唇形科獨(dú)一味屬植物，該屬僅一種，又名獨(dú)步通，藏語(yǔ)稱“大巴”、“打布巴”，分布在甘肅、青海、四川、云南、西藏等地。其根及其全草入藥，是我國(guó)藏、蒙、納西等民族民間常用藥之一［1］。具有活血止痛、化瘀止血［2］之功效，用于治療各種外科手術(shù)后的刀口疼痛、出血、外傷骨折、筋骨扭傷、風(fēng)濕痹痛等［3］。

獨(dú)一味巴布膏是專門(mén)針對(duì)軟組織挫傷所引起的血瘀疼痛專門(mén)研制的新藥。采用比較先進(jìn)的巴布膏成型技術(shù)，彌補(bǔ)了其他外用劑型容易過(guò)敏、剝離困難等缺點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)采用砝碼和啞鈴造成大鼠急性軟組織挫傷模型，研究其對(duì)急性軟組織挫傷的作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物、試劑獨(dú)一味巴布膏:為棕褐色膏體，0.727 g(生藥)/g(巴布膏)，由甘肅獨(dú)一味生物制藥股份有限公司提供。賦形劑:為白色膏體，由甘肅獨(dú)一味生物制藥股份有限公司提供。扶他林:白色乳膠劑，20 g/支(含雙氯芬酸鈉0.2 g)，由北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)。硫化鈉:規(guī)格:500 g/瓶，分析純，由天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.2 動(dòng)物SD大鼠，體質(zhì)量190～220 g，雌雄各半，由四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物使用許可證號(hào):第9號(hào)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用設(shè)施許可證號(hào):第113號(hào)。

1.3 儀器分析天平，北京賽多利斯天平有限公司，型號(hào):BS210S。電子天平，成都市東風(fēng)計(jì)量?jī)x器有限公司，型號(hào):T1000。

1.4 方法

1.4.1 砝碼法［4］取SD大鼠60只，給藥前24 h剪去大鼠背部及右下肢長(zhǎng)毛，然后用8%硫化鈉溶液對(duì)其脫毛處理，脫毛面積分別為5 cm×5 cm，2 cm×2 cm。第2天將脫毛且皮膚無(wú)破損的大鼠逐個(gè)置于自制挫傷模型臺(tái)上，以0.2 kg砝碼自20 cm的高度自由落下，直接打擊大白鼠右下肢脫毛部位，連續(xù)同上操作3次，造成急性挫傷模型;按體質(zhì)量、性別及挫傷程度隨機(jī)分為6組，每組10只，雌雄各半。大鼠陰性組每鼠滴涂生理鹽水10 mL/kg體質(zhì)量，陽(yáng)性對(duì)照組涂抹扶他林0.67 g/kg體質(zhì)量，賦形劑組涂抹賦形劑4.5 g/kg體質(zhì)量，藥物高、中、低劑量組分別涂抹獨(dú)一味巴布膏4.5 g(生藥)/kg、3.0g(生藥)/kg、1.5 g(生藥)/kg體質(zhì)量。每天給藥前用生理鹽水擦洗給藥處，待皮膚干燥后再給予藥物涂抹。每日給藥1次，連續(xù)給藥5 d。每日觀察挫傷處的紅腫，瘀血情況。并根據(jù)周國(guó)林等［5］軟組織挫傷的治療觀察的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)再細(xì)化形成的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行各組鼠的評(píng)分:①有輕微紅腫，但無(wú)鬧瘀斑及行為障礙，0～1分;②有輕微紅腫和瘀斑，但無(wú)行為障礙，1.1～2分;③有輕微紅腫和瘀斑，以及輕微的行為障礙(能行走，不影響行動(dòng))，2.1～3分;④有明顯紅腫和瘀斑，行為障礙(向右側(cè)傾斜)，3.1～4分;⑤嚴(yán)重的紅腫和瘀斑，完全不能自發(fā)行走，4.1～5分。于第5天處死大鼠，取傷肢肌肉固定在10%甲醛溶液中，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片，HE染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察其病理變化。所得數(shù)據(jù)均以±s)表示，用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)組間差異進(jìn)行方差分析。根據(jù)周國(guó)林等［5］肌肉挫傷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)(見(jiàn)表1)對(duì)各只鼠評(píng)分并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.4.2 啞鈴法［5］造模時(shí)以5 kg啞鈴自10 cm的高度，直接打擊大白鼠右下肢脫毛部位，連續(xù)同上操作2次，造成急性挫傷模型。其余操作及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)與1.4.1項(xiàng)及表1相同。

2 結(jié)果

2.1 獨(dú)一味巴布膏對(duì)大鼠急性軟組織挫傷的影響見(jiàn)表2、表3。

表1 肌肉挫傷病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 對(duì)大鼠急性軟組織挫傷作用的影響(砝碼)(分值，±s)

表2 對(duì)大鼠急性軟組織挫傷作用的影響(砝碼)(分值，±s)

注:各組與陰性對(duì)照組比較，*P＜0.05，＊＊＊P＜0.001;扶他林組與賦形劑組比較，△△△P＜0.001;陰性組與賦形劑組比較，P＞0.05。

1 d2 d3 d4 d5 d陰性組—104.01±0.48 4.17±0.44 4.30±0.43 4.42±0.404組別劑量/(g生藥·kg－1)動(dòng)物/只給藥前分值給藥后(d)分值.01±0.533.72±0.27扶他林組0.67 g·kg－1104.03±0.53 3.91±0.49 3.14±0.71 2.85±0.55＊＊＊△△△2.40±0.37＊＊＊△△△1.78±0.79＊＊＊△△△賦形劑組4.5103.91±0.43 4.18±0.36 4.28±0.36 4.26±0.413.91±0.283.67±0.39獨(dú)一味高劑量組4.5103.98±0.52 4.04±0.42 3.80±0.33 3.46±0.45＊＊＊2.98±0.58＊＊＊2.74±0.64＊＊＊獨(dú)一味中劑量組3.0103.90±0.41 4.07±0.38 3.90±0.38 3.90±0.31*3.54±0.42*3.36±0.47*獨(dú)一味低劑量組1.5103.98±0.27 4.11±0.30 4.06±0.32 4.08±0.333.85±0.393.64±0.27

表3 對(duì)大鼠急性組織挫傷作用的影響(啞鈴)(分值，±s)

表3 對(duì)大鼠急性組織挫傷作用的影響(啞鈴)(分值，±s)

注:各組與陰性組比較*P＜0.05，＊＊＊P＜0.001;扶他林組與賦形劑組比較，△△△P＜0.001;陰性組與賦形劑組比較，P＞0.05。

1 d2 d3 d4 d5 d陰性組—104.01±0.35 4.21±0.34 4.35±0.36 4.47±0.354組別劑量(g生藥·kg－1)動(dòng)物/只給藥前分值給藥后(d)分值.19±0.343.97±0.28扶他林組0.67 g·kg－1104.09±0.39 3.89±0.33 3.51±0.29 3.20±0.27＊＊＊△△△2.83±0.31＊＊＊△△△2.19±0.90＊＊＊△△△賦形劑組4.5103.95±0.42 4.07±0.38 4.16±0.34 4.23±0.364.27±0.354.20±0.36獨(dú)一味高劑量組4.5104.01±0.39 3.88±0.37 3.63±0.33 3.51±0.36＊＊＊3.28±0.34＊＊＊3.19±0.30＊＊＊獨(dú)一味中劑量組3.0104.02±0.31 3.91±0.30 3.67±0.27 3.59±0.26*3.41±0.24*3.12±0.37*獨(dú)一味低劑量組1.5103.98±0.23 3.93±0.26 3.85±0.27 3.75±0.313.66±0.303.49±0.31

由表2、3可見(jiàn)，獨(dú)一味高、中劑量有良好的改善大鼠急性軟組織挫傷引起的紅腫、瘀血及行走能力。與陰性組比較，具有顯著差異。

2.2 病理組織學(xué)檢查結(jié)果獨(dú)一味巴布膏對(duì)大鼠急性軟組織挫傷的病理組織學(xué)評(píng)分見(jiàn)表4、表5，圖1、圖2。

表4 對(duì)大鼠急性軟組織挫傷的病理組織學(xué)評(píng)分(砝碼)(分值，±s)

表4 對(duì)大鼠急性軟組織挫傷的病理組織學(xué)評(píng)分(砝碼)(分值，±s)

注:各組與陰性對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01;陰性組與賦形劑組比較，P＞0.05。

組別劑量/(g生藥·kg－1)動(dòng)物/只分值(x±s)102.4±0.70扶他林組0.67g·kg－1100.5±0.53＊＊賦形劑組4.5 g·kg－1102.5±0.85獨(dú)一味高劑量組4.5100.7±0.48＊＊獨(dú)一味中劑量組3.0101.5±0.53＊＊獨(dú)一味低劑量組陰性對(duì)照組－1.5102.6±0.70

表5 對(duì)大鼠急性軟組織挫傷的病理組織學(xué)評(píng)分(啞鈴)(分值，±s)

表5 對(duì)大鼠急性軟組織挫傷的病理組織學(xué)評(píng)分(啞鈴)(分值，±s)

注:各組與陰性對(duì)照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;陰性組與賦形劑組比較，P＞0.05。

只分值陰性對(duì)照組組別劑量/(g生藥·kg－1)動(dòng)物/102.2±0.63扶他林組0.67 g·kg－1100.6±0.52＊＊賦形劑組4.5 g·kg－1102.7±0.67獨(dú)一味高劑量組4.5100.9±0.32＊＊獨(dú)一味中劑量組3.0101.5±0.85*獨(dú)一味低劑量組－1.5102.3±0.67

①陰性組:可見(jiàn)大面積肌肉纖維出現(xiàn)變性壞死，斷裂。肌纖維間大量毛細(xì)血管擴(kuò)張充血和增生現(xiàn)象，組織間隙可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。炎癥面積廣。見(jiàn)圖1F、圖2F。

②陽(yáng)性組:肌肉纖維結(jié)構(gòu)完整，局部區(qū)域可見(jiàn)肌纖維排列紊亂，變性，斷裂，變形范圍小，有一定數(shù)量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。肌纖維間可見(jiàn)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血和增生現(xiàn)象。見(jiàn)圖1E、圖2E。

圖1 啞鈴法病理組織學(xué)照片(10×10)

圖2 砝碼法病理組織學(xué)照片(10×10)

③賦形劑組:可見(jiàn)大面積肌肉纖維出現(xiàn)變性壞死，斷裂。肌纖維間大量毛細(xì)血管擴(kuò)張充血和增生現(xiàn)象，組織間隙可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。炎癥面積廣。見(jiàn)圖1B、圖2B。

④獨(dú)一味高劑量組:肌肉纖維結(jié)構(gòu)完整，局部區(qū)域可見(jiàn)肌纖維排列紊亂，變性，斷裂，變形范圍小，有一定數(shù)量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。肌纖維間可見(jiàn)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血和增生現(xiàn)象。與陽(yáng)性組比較，肌纖維變性例數(shù)多。見(jiàn)圖1C、圖2C。

⑤獨(dú)一味中劑量組:肌肉纖維結(jié)構(gòu)出現(xiàn)局部性缺失，嚴(yán)重可見(jiàn)肌纖維變性壞死，斷裂。肌纖維間大量毛細(xì)血管擴(kuò)張充血和增生現(xiàn)象，組織間隙可見(jiàn)數(shù)量較多的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。見(jiàn)圖1D、圖2D。

⑥獨(dú)一味低劑量組:可見(jiàn)大面積肌肉纖維出現(xiàn)變性壞死，斷裂。肌纖維間大量毛細(xì)血管擴(kuò)張充血和增生現(xiàn)象，組織間隙可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。炎癥面積廣。見(jiàn)圖1A、圖2A。

以上結(jié)果表明，獨(dú)一味巴布膏以4.5、3.0 g(生藥)/kg給大鼠皮膚涂抹給藥，每日1次，連續(xù)5 d，能改善砝碼和啞鈴所致大鼠急性挫傷癥狀。說(shuō)明獨(dú)一味巴布膏具有顯著改善肌肉組織挫傷的作用。

3 討論

急性軟組織挫傷系指人體運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)、皮膚以下骨骼之外的組織所發(fā)生的一系列扭傷、挫傷、拉傷等外傷［6］因素而致局部損傷、出血、水腫、肌肉痙攣或肌肉錯(cuò)位，包括肌肉、韌帶、筋膜、肌腱、滑膜、脂肪、關(guān)節(jié)囊等組織以及周圍神經(jīng)、血管的不同情況的急性損傷［7］。引起損傷后機(jī)體的反應(yīng)為:首先是無(wú)數(shù)毛細(xì)血管的破裂、出血，局部有細(xì)胞的失活。隨即發(fā)生炎性反應(yīng)，在組織胺、5-羥色胺等炎性因子的作用下，微血管先發(fā)生短暫的收縮，然后擴(kuò)張和充血，通透性增加，血管內(nèi)的水、蛋白和一些細(xì)胞從血管內(nèi)滲入組織間隙，主要以局部急性炎癥和組織修復(fù)為特征，臨床表現(xiàn)為局部疼痛、壓痛、腫脹、青紫瘀斑、肢體活動(dòng)功能障礙等［8］。中醫(yī)認(rèn)為其病機(jī)為“氣滯與血瘀”并見(jiàn)，在治療軟組織挫傷方面有長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐，其中以中藥外治法獨(dú)具特色，包括貼藥、敷藥、擦劑、騰洗藥等，一般采用活血化瘀、理氣止痛的治療原則［9］。局部外服中藥可以使藥效集中作用于局部，高效而且安全，發(fā)揮較大的治療作用［10］。

巴布膏劑在《中國(guó)藥典》2005年版中由于皮膚親和性好、使用安全方便、刺激性小、生產(chǎn)無(wú)工業(yè)“三廢”，已被公認(rèn)為是透皮給藥體系發(fā)展的新方向［11］，獨(dú)一味作為傳統(tǒng)的治療跌打損傷藏藥，在多年的臨床應(yīng)用中，其鎮(zhèn)痛、消炎、活血化瘀的作用確切，但上市銷售品種均以口服制劑為主，如膠囊劑、顆粒劑、滴丸等，將其開(kāi)發(fā)成外用巴布膏劑，實(shí)現(xiàn)了劑型和給藥途徑上的重大突破。

機(jī)械損傷能使組織斷裂或細(xì)胞破裂，擊傷的強(qiáng)弱和持續(xù)時(shí)間的不同，引起的后果也不同［12］。本實(shí)驗(yàn)采用直接擊傷的方法造成動(dòng)物軟組織損傷，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)嚴(yán)格控制了打擊的高度和質(zhì)量，使在等同的條件下造成軟組織損傷的強(qiáng)度一致。本研究中，獨(dú)一味巴布膏對(duì)啞鈴和砝碼兩種方法所致的急性軟組織挫傷，無(wú)論從肉眼觀察，還是病理組織學(xué)檢查，均驗(yàn)證了該藥物在治療血瘀(軟組織損傷)方面的藥理作用，為臨床應(yīng)用提供了藥理學(xué)參考。

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