白翅浮鷗H5亞型禽流感及新城疫的卵黃抗體監(jiān)測(cè)

齊艷萍，陳雪龍，尹再軍，王曉龍，趙和生，張 旭

(1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江大慶，163319；2.大慶龍鳳濕地保護(hù)區(qū)，黑龍江大慶，163711；3.東北林業(yè)大學(xué)野生動(dòng)物資源學(xué)院，黑龍江哈爾濱，150040)

禽流感(Avia influenza，AI)是由正粘病毒科A型流感病毒屬的AI病毒(AIV)所引起的各種禽類的感染疾病綜合征[1]。新城疫(Neweastle disease，ND)是由ND病毒(NDV)引起禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病[2-3]。AI與ND是嚴(yán)重危害禽類的兩種烈性病毒性傳染病，一旦感染，通常引起禽類大批死亡，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為必須呈報(bào)的傳染病[4]。野禽中的許多種類又具有遷徙習(xí)性，成為傳播AIV和NDV的重要因素，歷史上已報(bào)道多個(gè)國家因進(jìn)口觀賞鳥類而導(dǎo)致AI或ND的流行。如何對(duì)這兩種疾病有效的防控，已經(jīng)成為全世界面臨的一個(gè)問題。

白翅浮鷗(Chlidonias leucoptera)屬鳥綱，鷗形目，鷗科，為我國常見候鳥，在大慶龍鳳濕地內(nèi)屬于優(yōu)勢(shì)種群，為了解大慶龍鳳濕地野生水禽母源抗體的攜帶狀況，本研究應(yīng)用血凝抑制試驗(yàn)，針對(duì)龍鳳濕地優(yōu)勢(shì)種白翅浮鷗進(jìn)行AIV和NDV卵黃抗體(母源抗體)的檢測(cè)，探討野生水禽種群對(duì)這兩種病毒性傳染病的自然被動(dòng)免疫狀況，并進(jìn)一步推測(cè)白翅浮鷗種群AIV和NDV的感染和接觸情況，為防控提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 白翅浮鷗巢卵 于2010年春季在大慶龍鳳濕地按照每個(gè)巢穴一枚的比例，采集白翅浮鷗巢卵，共144枚。

1.2 診斷試劑 H5亞型AI抗原和ND抗原及標(biāo)準(zhǔn)血清購自哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.3 卵黃抗體的提取 分別無菌吸取200μL卵黃，加入800μL PBS，混勻后，3000r/min離心10m in，取上清待測(cè)。

1.4 血凝抑制試驗(yàn) 在12孔微量反應(yīng)板以PBS對(duì)卵黃稀釋液、陽性血清和陰性血清進(jìn)行2倍倍比稀釋。每孔加入4單位抗原25μL，室溫作用20min。每孔加入1%雞紅細(xì)胞懸液，室溫作用20min后，進(jìn)行結(jié)果判定。

2 結(jié)果與討論

2.1 H5亞型AIV和NDV卵黃抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果 144枚白翅浮鷗巢卵中有56枚為H5亞型AIV卵黃抗體陽性，陽性率為38.89%，平均抗體滴度為3.76(log2)(表1)。該結(jié)果高于青海湖等地區(qū)的斑頭雁、鵪鶉等鳥類的血清抗體水平[5-6]，但兩者差異不大。144枚白翅浮鷗巢卵中有52枚為NDV卵黃抗體陽性，陽性率為36.11%，平均抗體滴度為4.08(log2)。

2.2 卵黃抗體與血清抗體分析 親本鳥感染AIV和NDV后在體內(nèi)產(chǎn)生抗體，通過卵黃直接傳遞給子代雛鳥使其被動(dòng)免疫，母源抗體水平可以在一定程度上反映親本鳥的特異性病原體感染及其在繁殖環(huán)境中的病原體存在狀況[8]。在家雞和家鴨兩種禽類中，血清抗體與卵黃抗體具有良好的一致性和相關(guān)性[7]，通過卵黃抗體的檢測(cè)可以推測(cè)其母體對(duì)病毒的接觸情況以及子代可能獲得的母源抗體滴度水平，進(jìn)而監(jiān)測(cè)整個(gè)種群的感染和自然被動(dòng)免疫狀況，這也為野禽某些疾病的研究提供了方便快捷的研究方法。

表1 白翅浮鷗H5亞型AIV和NDV卵黃抗體的檢測(cè)Table 1Detection of yolk antibody against H5subtype AIV and NDV in white-w inged tern by HI test

2.3 白翅浮鷗種群H5亞型AIV和NDV感染和接觸情況分析 野生鳥類攜帶AIV、NDV現(xiàn)象十分普遍，在鴨、鵝、斑鳩、麻雀、百靈、八哥、天鵝等許多鳥類體內(nèi)均檢測(cè)到AIV抗體，并發(fā)現(xiàn)至少236種野鳥可以自然或?qū)嶒?yàn)性感染NDV，它們作為病毒攜帶者在病毒傳播中發(fā)揮作用[9]。本次調(diào)查顯示，大慶龍鳳濕地白翅浮鷗巢卵H5亞型AIV和NDV卵黃抗體陽性率分別為38.89%和36.11%，檢出率較高，其原因可能是：(1)有資料表明禽類不同個(gè)體、不同品種之間的病毒可以通過糞便-水-口或者口-水-口途徑互相傳播[10]。龍鳳濕地內(nèi)湖泊沼澤星羅棋布，是鳥類重要的繁殖地，其內(nèi)棲居的鳥類多達(dá)76種，小環(huán)境內(nèi)部病毒互相傳播可能導(dǎo)致白翅浮鷗卵黃抗體陽性率較高。(2)白翅浮鷗為候鳥，其遷徙過程中可能會(huì)接觸到這兩類病毒，在龍鳳濕地以外發(fā)生抗體陽轉(zhuǎn)。

2.4白翅浮鷗種群預(yù)期感染或接觸情況推測(cè) 當(dāng)母源抗體效價(jià)為6(log2)左右時(shí)，其保護(hù)率為100%，為4(log2)時(shí)，其保護(hù)率為50%，為2(log2)時(shí)，其保護(hù)率為20%。白翅浮鷗卵H5亞型AIV和NDV平均抗體滴度分別為3.76(log2)和4.08(log2)，因此其雛鳥可能會(huì)獲得接近50%的保護(hù)率。同時(shí)，根據(jù)此研究結(jié)果推測(cè)龍鳳濕地白翅浮鷗種群中分別至少有61.11%和63.89%的雌性繁殖個(gè)體未產(chǎn)生H5亞型AIV和NDV血清抗體，因而種群再次感染AIV和NDV的風(fēng)險(xiǎn)依然很高。

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