HPLC法測定復方瓜子金合劑中靛玉紅的含量

黃偉 郭潔

(1.陜西國際商貿(mào)學院 陜西 咸陽 712046; 2.陜西中醫(yī)學院 陜西 咸陽 712046)

復方瓜子金合劑是由瓜子金,大青葉,海金沙,白花蛇舌草,野菊花,紫花地丁六味藥制成的中藥復方制劑,由復方瓜子金顆粒改劑型而成[1～2]。具有利咽清熱,散結(jié)止痛,祛痰止咳的功效?，F(xiàn)代藥理研究證明大青葉中含靛藍、靛玉紅等活性成分,具有明顯的抗炎、解熱作用。本試驗參照有關(guān)文獻[3],采用高效液相色譜法對制劑中的大青葉所含的靛玉紅進行了定量控制,測定快捷、準確、可靠。

1 儀器和試藥

儀器:SSI高效液相色譜儀(美國SSI公司)。Phenomenex ODS(5μm,250mm×4.6mm ID色譜柱;SSI P4000泵;SSI 500UV/Vis檢測器;5mL定量環(huán)。HW-2000色譜工作站(千譜軟件有限公司)。塞多利斯BP211D電子天平。

試劑:甲醇為色譜純試劑(美國TEDIA公司);水為二次蒸餾水;其余試劑為分析純(西安化學試劑廠)。

試藥:靛玉紅對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號0717-200003;供含量測定用)。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

萃取次數(shù)的考察:精密量取本品30mL,置100mL燒瓶中,加氯仿30mL,加熱回流3次,每次30min,分取第1、2、3次的氯仿層,分別用氯仿飽和的水洗2次,每次20mL,氯仿層再用適量無水硫酸鈉脫水后,蒸干,殘渣加甲醇使溶解,定容至25mL量瓶中,0.45μm微孔濾膜濾過,進樣,測定峰面積,結(jié)果表明回流萃取2次,靛玉紅可提取完全。

2.2 靛玉紅線性關(guān)系

取靛玉紅對照品溶液(0.0307mg/mL)適量,用甲醇分別配制成濃度為0.00307、0.00614、0.00921、0.0123、0.0154mg/mL對照品溶液,進樣,記錄色譜圖,測定峰面積,結(jié)果。并以峰面積對進樣量進行回歸,得標準曲線方程y=5E+06x+8235.3,r=0.9997。結(jié)果表明,靛玉紅在0.0154～0.0770μg范圍內(nèi),峰面積值與進樣量有良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗

取配制好的供試品溶液(批號100801),按擬定的色譜條件測定,重復進樣5次,結(jié)果供試品峰面積平均值為184041,RSD%=0.93。表明本測定方法精密度良好。

2.4 溶液的穩(wěn)定性試驗

取供試液(批號100801)分別在不同間隔時間(0、2、4、6、8h)進樣,結(jié)果供試品峰面積平均值為183770,RSD%=1.02。表明供試品溶液在8小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

表1 中試樣品中靛玉紅含量測定結(jié)

2.5 回收率試驗

取靛玉紅對照品(濃度為0.0307mg/mL)3mL、3mL、5mL、5mL、7mL、7mL,分別置100mL燒瓶中,揮干,再分別加入已知含量的樣品(批號100801)15mL,按上述樣品制備方法和色譜條件制備加樣回收供試品溶液,并注入高效液相色譜儀,計算回收率,試驗結(jié)果表明,平均回收率為99.80%,RSD%為2.03%(n=6),符合定量測定要求。

2.6 樣品測定

取5批中試樣品,按上述方法測定其靛玉紅的含量,測定結(jié)果見表1。

3 結(jié)論

采用高效液相色譜法測定復方瓜子金合劑中靛玉紅的含量,方法可靠、簡便、準確、靈敏、重現(xiàn)性好,回收率等均符合要求,可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

[1]復方瓜子金顆粒質(zhì)量標準WS3-B-2749-97,國家藥品標準中藥成方制劑第14冊,國家食品藥品監(jiān)督管理局.

[2]中華人民共和國藥典,2010年版一部,國家藥典委員會,北京:化學工業(yè)出版社.

[3]苗明三,李振國主編.《現(xiàn)代實用中藥質(zhì)量控制技術(shù)》·北京:人民衛(wèi)生出版社,2000.