大鼠燙傷模型制備的實驗研究*

王雪妮，張德芹，黃云英，王元元，沈 麗，杜 娟

實驗采用YLS-5Q臺式超級控溫燙傷儀進行大鼠燙傷模型的制備，考察燙傷溫度、時間、壓力等因素對燙傷程度的影響，并進行燙傷皮膚病理學(xué)檢查，成功地制備了大鼠體表深Ⅱ度燙傷、淺Ⅱ度燙傷、Ⅰ度燙傷模型。所建立的模型制備方法操作簡單，溫度、壓力、時間準確可控，燙傷面積恒定，可重復(fù)性強[1]。

1 材料和方法

1.1 動物 Wistar大鼠，雄性，體質(zhì)量（200±10）g，由天津市山川紅實驗動物科技有限公司提供，飼養(yǎng)于清潔級動物實驗室內(nèi)，室溫（24±2）℃，相對濕度（50%±10%）。

1.2 試劑 水合氯醛；甲醛；70%乙醇；80%乙醇；95%乙醇；無水乙醇；二甲苯；石蠟；1%鹽酸乙醇；氨水；蘇木-伊紅（HE）染色劑。

1.3 儀器 YLS-5Q臺式超級控溫燙傷儀，濟南益延科技發(fā)展有限公司；WH-71電熱恒溫干燥箱，天津市泰斯特儀器有限公司；BMJ-1生物組織包埋機，天津天利航空機電有限公司；LEICA RM 2135切片機，德國徠卡公司；電熱恒溫水箱，天津市中環(huán)實驗電爐有限公司；DMI3000B倒置熒光顯微鏡，德國徠卡公司。

1.4 大鼠燙傷模型的制備 根據(jù)Rubner公式計算大鼠體表面積[2]：S（m2）≈0.1×體質(zhì)量（kg）2/3，根據(jù)實驗條件，擬燙傷6%體表面積，大鼠體質(zhì)量按200g計算，則燙傷面積（m2）=0.1×（200/1 000）2/3×6%≈0.002 0 m2=20（cm2）。取雄性 Wistar大鼠 32 只，將大鼠按體質(zhì)量根據(jù)隨機數(shù)字表法分為4組，每組8只，分別為正常對照組、模型1組、模型2組、模型3組。造模組剃除大鼠背毛，面積約為25 cm2以3.5%水合氯醛（10 mL/kg）腹腔注射麻醉。麻醉后用YLS-5Q臺式超級控溫燙傷儀配套的5 cm2的燙頭進行燙傷，制作4個相同的創(chuàng)面，控制燙傷面積為20 cm2。正常對照組不麻醉不進行燙傷；模型1組燙傷條件：溫度90℃，時間15秒，壓力1 000g；模型2組燙傷條件：溫度80℃，時間15秒，壓力1 000g；模型3組燙傷條件：溫度80℃，時間10秒，壓力500g。分別于燙傷后6、24、48、72 h觀察各組大鼠創(chuàng)面外觀情況。

1.5 病理學(xué)檢查 取正常對照組及模型組大鼠背部皮膚標本，常規(guī)固定，石蠟切片，HE染色，觀察皮膚組織學(xué)變化。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 模型1組（溫度90℃，時間15秒，壓力1 000g）：燙傷后創(chuàng)面皮膚立即變白，出現(xiàn)明顯的皺褶，輕度腫脹，皮下可見有小紅出血點散在，燙傷區(qū)域邊界清晰，肉眼可明顯區(qū)分燙傷創(chuàng)面與正常皮膚；燙傷后6 h創(chuàng)面比正常皮膚質(zhì)硬，顏色加深呈淺黃綠色，小出血點面積擴大，顏色加深顯紫紅色；燙傷后24 h創(chuàng)面質(zhì)變硬顏色略有加深，出血點顏色也略有加深；燙傷后48 h創(chuàng)面顏色加深，出血點處皮膚凹陷結(jié)痂；燙傷后72 h創(chuàng)面顏色加深，局部出現(xiàn)結(jié)痂。

模型2組（溫度80℃，時間15秒，壓力1000g）：燙傷后數(shù)分鐘創(chuàng)面皮膚變白，有少量皺褶，輕度腫脹，燙傷區(qū)域邊界清晰，肉眼可明顯區(qū)分燙傷創(chuàng)面與正常皮膚。燙傷后6 h創(chuàng)面比正常皮膚質(zhì)硬，顏色加深呈淺黃綠色；燙傷后24 h創(chuàng)面質(zhì)變硬顏色加深呈黃色，局部可見紫紅色血瘀斑；燙傷后48 h創(chuàng)面顏色加深，局部的紫紅色血瘀斑顏色加深；燙傷后72 h創(chuàng)面顏色加深，局部出現(xiàn)結(jié)痂。

模型3組（溫度80℃，時間10秒，壓力500g）：燙傷數(shù)分鐘后創(chuàng)面皮膚發(fā)白，有較少皺褶，稍微腫脹，燙傷區(qū)域邊界清晰，肉眼可區(qū)分燙傷創(chuàng)面與正常皮膚。燙傷后6 h創(chuàng)面比正常皮膚顏色稍深，但邊界不明顯；燙傷后24 h創(chuàng)面顏色加深呈淺黃色，邊界不明顯，局部可見紫紅色血瘀斑；燙傷后48 h創(chuàng)面顏色加深，局部的紫紅色血瘀斑顏色加深；燙傷后72 h創(chuàng)面顏色稍微加深，局部的紫紅色血瘀斑顏色也略有加深。

2.2 病理檢查 模型1組（溫度90℃，時間15秒，壓力1 000g）：燙傷后可見表皮下有水皰生成，表皮層細胞及毛囊上皮細胞核固縮，真皮組織深部受損，膠原纖維腫脹、融合，大量皮下脂肪細胞融合，真皮全層可見血管擴張充血，大部分皮脂腺、汗腺、毛囊被破壞，結(jié)構(gòu)不清。病變符合深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面特征[3]。

模型2組（溫度80℃，時間15秒，壓力1000g）：燙傷后可見真皮組織深部受損，膠原纖維離散、腫脹，部分皮下脂肪細胞融合，同時可見血管擴張充血，皮脂腺、汗腺腺上皮細胞及毛囊上皮細胞結(jié)構(gòu)尚清楚，部分腫脹、溶解。病變符合淺Ⅱ度燙傷創(chuàng)面特征[3]。

模型3組（溫度80℃，時間10秒，壓力500g）：燙傷后可見表淺淺層、基底層健存，真皮淺層充血、水腫。病變符合Ⅰ度燙傷創(chuàng)面特征[3]。

3 討論

動物模型的制備要求方法具有準確、恒定、可重復(fù)并且操作簡單易行等特點。YLS-5Q臺式超級控溫燙傷儀能夠準確的控制燙傷的溫度、時間、壓力，設(shè)備簡單，易于操作，便于推廣。通過該方法制作的燙傷模型對于燒（燙）傷創(chuàng)面修復(fù)和用藥的研究等具有較好的實用價值。

[1]施新猷.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2000:396,506-508.

[2]施新猷.醫(yī)學(xué)動物實驗方法學(xué)[M].北京:人民軍醫(yī)出版社，1980：146，247.

[3]陳意生.現(xiàn)代燒傷病理學(xué)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2008：13－14，561.