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    eNOS基因27bpVNTR多態(tài)性與新疆漢族原發(fā)性高血壓的相關(guān)性研究

    2011-01-11 02:56:22鄒放君唐斌何芳王剛張強(qiáng)盧賢貴鐘華石曉鵬楊建峰王振煥陳雄英鄧峰美石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室石河子8300石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院石河子83008
    關(guān)鍵詞:漢族脂蛋白多態(tài)性

    鄒放君,唐斌,何芳,王剛,張強(qiáng),盧賢貴,鐘華,石曉鵬,楊建峰,王振煥,陳雄英,鄧峰美(石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院/新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石河子8300;石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院,石河子83008)

    ZOU Fangjun1,TANG Bin2,HE Fang1,WANG Gang1,ZHANG Qiang1,LU Xiangui 1,ZHONG Hua1,SHI Xiaopeng1,YANG Jianfeng1,WANG Zhenhuan1,CHEN Xiongying 1,DENG Fengmei 1

    (1Medical College of Shihezi University/Key Laboratory of Ministry of Education,Xinjiang Endemic and Ethnic Diseases,Shihezi 832002,China;2First Affiliated Hospital,Medical College of Shihezi University,Shihezi 832002,China)

    原發(fā)性高血壓(essential hypertension,EH)是遺傳和環(huán)境因素共同作用的多基因遺傳性疾病。內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)基因是近年來發(fā)現(xiàn)的EH的易感基因,由于其對血壓調(diào)節(jié)的重要作用而備受重視。目前國內(nèi)外已有研究發(fā)現(xiàn)eNOS基因第4內(nèi)含子27bpVNTR 多 態(tài) 性 與 高 血壓有關(guān)[1-3],但也有不 一致的報(bào)道[4-5]。而在新疆漢族人群中尚未見報(bào)道。本研究旨在探討eNOS基因多態(tài)性與新疆漢族人群EH的相關(guān)性。

    1 對象與方法

    1.1 研究對象

    選取新疆天山北麓塔城地區(qū)沙灣縣博爾通古鄉(xiāng)牧區(qū),元興宮村、紅土莊子村及烏蘭烏蘇鎮(zhèn)的漢族人群,采取整群隨機(jī)抽樣,選擇本地居住的漢族居民,均簽署知情同意書,并得到石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院一附院倫理道德委員會(huì)同意,高血壓患者346例,其中男148例,女198例,平均年齡50.90±9.53歲,對照組385例,男142例,女243例,平均年齡49.75±10.27歲。病例組納入標(biāo)準(zhǔn)均符合1999年 WHO/ISH頒布診斷標(biāo)準(zhǔn):收縮壓≥140mmHg或舒張壓≥90mmHg,排除繼發(fā)性高血壓、心肌病、瓣膜性心臟病、先天性心臟病、肝腎功能不全、孕婦、哺乳期及口服避孕藥婦女。對照組納入標(biāo)準(zhǔn):查體健康者,收縮壓<140mmHg且舒張壓<90mmHg,無服用降壓藥史、高血壓家族史及其他器質(zhì)性心臟病史等,排除糖尿病、肝腎功能不全者。

    1.2 調(diào)查內(nèi)容

    簽署知情同意書后測量身高、體重、腰圍、臀圍、計(jì)算體重指數(shù)BMI=體重(kg)/身高2(m2)和腰臀比WHR=腰圍(cm)/臀圍(cm),)詢問職業(yè)、文化程度、婚姻狀況、吸煙、飲酒、飲食習(xí)慣、性格特點(diǎn)、疾病及家族史等,抽空腹血當(dāng)天檢測血糖、血脂(甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白)等生化指標(biāo)。

    1.3 熒光標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物長度多態(tài)分析檢測eNOS基因多態(tài)性

    1.3.1 基因組DNA提取

    試驗(yàn)前夜禁食12h以上。次晨抽取空腹血液標(biāo)本10mL,用EDTA抗凝管,分離血樣。用酚-氯仿法進(jìn)行DNA抽提。

    1.3.2 eNOS基因目的片段擴(kuò)增

    設(shè)計(jì)1對熒光標(biāo)記的PCR引物,用Primier primer5.0軟件設(shè)計(jì)

    PCR引物如下:上游:5′-tatggtagtgccttggctgga-3′,下游:5′-tgctcctgctactgacagcac-3′。

    PCR反應(yīng)體系:DNA模板1μL,Hotstar Taq聚合酶0.2μL,10×buffer 2μL,25mm MgCl20.4μL,dNTP 0.4μL,多重PCR引物2μL,去離子水14μL,總體系20μL。利用ABI公司的2720 Thermal Cycler預(yù)變性94℃5min后,繼之進(jìn)行35個(gè)循環(huán),每個(gè)循環(huán)94℃變性30s,59℃ 退火40s,72℃ 延伸45s,最后72℃持續(xù)10min延伸。

    1.3.3 eNOS基因多態(tài)性檢測

    取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳,紫外凝膠成像儀成像,鑒定PCR產(chǎn)物。熒光PCR產(chǎn)物上ABI3130XL測序儀,取0.5μL純化后的延伸產(chǎn)物,與0.5μL SIZE STANDARD,9μL Hi-Di混勻,95℃變性5min后上ABI3130XL測序儀。ABI3130XL測序儀上收集的原始數(shù)據(jù)用GeneMapper 4.0(AppliedBiosystems Co.,Ltd.,USA)來分析。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,病例組與對照組計(jì)量資料比較用t檢驗(yàn),計(jì)量資

    2 結(jié)果

    2.1 研究對象一般情況

    各指標(biāo)如收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓、脈壓、體重指數(shù)、腰臀比、膽固醇、低密度脂蛋白、肌酐、尿酸、載脂蛋白A1/B的平均水平,兩組間比較均有顯著差異(P<0.05),EH 組均高于對照組;其余指標(biāo)如年齡、性別、空腹血糖、甘油三脂、高密度脂蛋白、載脂蛋白-A1、載脂蛋白-B兩組間均無差異(P>0.05)。結(jié) 果見表1。

    表1 新疆漢族EH組與正常對照組臨床相關(guān)指標(biāo)比較±STab.1Clinical parameters of essential hypertension and control subjects in the Han people in Xinjiang

    表1 新疆漢族EH組與正常對照組臨床相關(guān)指標(biāo)比較±STab.1Clinical parameters of essential hypertension and control subjects in the Han people in Xinjiang

    指標(biāo) EH(n=346)對照組(n=385)P年齡/歲50.90±9.53 49.75±10.27 0.218性別/(男/女) 148/198 142/243 0.104收縮壓/mmHg 148.01±18.13 114.40±12.42 0.000舒張壓/mmHg 94.54±9.97 78.05±7.38 0.000平均動(dòng)脈壓/mmHg 112.36±10.22 90.17±8.09 0.000脈壓/mmHg 53.47±17.92 36.35±10.02 0.000體重指數(shù) 26.17±3.90 24.41±3.51 0.000腰臀 比 0.90±0.06 0.87±0.06 0.000空腹血糖/(mmol/L) 6.01±1.32 5.92±2.20 0.492膽固醇/(mmol/L) 4.77±1.14 4.42±0.92 0.000甘油三脂/(mmol/L) 1.68±1.51 1.43±4.23 0.283低密度脂蛋白/(mmol/L) 3.17±0.97 2.81±0.83 0.000高密度脂蛋白/(mmol/L) 1.40±0.35 1.41±0.36 0.464肌酐/(μmol/L) 66.71±16.49 62.68±17.68 0.002尿酸/(μmol/L) 271.55±86.92 245.65±110.95 0.001載脂蛋白-A1/(g/L) 1.47±0.28 1.44±0.29 0.159載脂蛋白-B/(g/L) 0.99±0.24 1.04±3.17 0.763載脂蛋白 A1/B/(g/L)1.54±0.45 1.70±0.58 0.000

    2.2 新疆漢族e(cuò)NOS基因27bpVNTR基因型分布的Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)

    EH組和對照組及總?cè)巳旱幕蛐头植碱l率均符合 Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),提示該人群有較好的遺傳代表性(表2)。

    表2 新疆漢族27bpVNTR多態(tài)性基因型分布的Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)Tab.2Hardy-Weinberg of eNOS4genotypes in the Han people in Xinjiang

    2.3 新疆漢族e(cuò)NOS基因27bpVNTR多態(tài)性分布及患病風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)

    27bp VNTR多態(tài)性基因型及等位基因在新疆漢族EH組與NT組間的分布見表3,4種基因型(bb、aa、ab、bc)和等位基因b、a、c在 EH 組和 NT組中分布頻率之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

    表3 新疆漢族27bp VNTR多態(tài)性基因型及等位基因分布及患病風(fēng)險(xiǎn)Tab.3Frequency distribution of eNOS4genotypes and alleles in the Han population in Xinjiang healthy and essential hypertension subjects

    2.4 Logistic回歸分析

    以有無高血壓為因變量,體重指數(shù)、腰臀比、年齡、空腹血糖、膽固醇、甘油三酯、eNOS各基因型等為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示體重指數(shù)增大、年齡、高血糖、高脂血癥為高血壓發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,eNOS基因27bp VNTR多態(tài)性與高血壓無關(guān)。

    3 討論

    高血壓是嚴(yán)重危害人類健康的一種常見病、多發(fā)病,發(fā)病原因未完全清楚,它的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,原發(fā)性高血壓具有遺傳傾向,它是一種多基因遺傳性疾病,其基因表達(dá)在很大程度上受環(huán)境因素的影響。已有研究顯示超重和肥胖與血壓升高有關(guān)[6-8],超重和肥胖是高血壓的危險(xiǎn)因素。本研究高血壓組與對照組一般資料比較顯示新疆漢族高血壓人群中體質(zhì)指數(shù)、腰臀比、膽固醇及低密度脂蛋白明顯高于正常對照人群,提示超重、肥胖及血脂異常(包括血漿膽固醇、低密度脂蛋白濃度增高)可能為該地區(qū)漢族高血壓的危險(xiǎn)因素。進(jìn)一步作Logistic回歸分析校正了年齡、性別、BMI及臨床指標(biāo)等混雜因素后,結(jié)果顯示體重指數(shù)增大、高血糖、血脂異常為該地區(qū)漢族高血壓的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,從而證實(shí)了血脂異常、超重和肥胖與該地區(qū)漢族高血壓發(fā)生的有關(guān)。因此,通過改變飲食結(jié)構(gòu)、生活方式,加強(qiáng)體力活動(dòng),控制體重,降低血脂水平,有助于預(yù)防該地區(qū)漢族高血壓的發(fā)生。

    本研究結(jié)果中eNOS基因27bp VNTR位點(diǎn)bb、aa、ab三種基因型在新疆漢族健康對照人群分布分別為79.5%、1.0%、19.2%,而非洲裔美國人分別為58.0%、14.5%、27.5%[9],新 加 坡 人 分 別 65%、2.9%、26%[1],內(nèi)地漢族人為86.15%、0.43%、13.42%[3],課題組研究的同一地區(qū)哈薩克族人為84.06%,0.72%,15.22%[5],均與本研究結(jié)果漢族人群基因型頻率分布存在顯著性差異。另外還在在新疆漢族健康對照人群檢測出重復(fù)6次串聯(lián)序列的c等位基因,其分布頻率為0.2%,在上述各項(xiàng)研究中,新加坡人群[1]中也檢測出c等位基因,其分布頻率為0.9%,而在非洲裔美國人[9]、內(nèi)地漢族人[3]、哈薩克族人[5]群中均未檢測出c等位基因。從上述各項(xiàng)研究中可以看出該基因多態(tài)分布特征在不同種族人群存在較大的差異。本研究結(jié)果顯示,EH組和NT組基因型和等位基因分布頻率無顯著性差異,表明eNOS基因27bp VNTR多態(tài)性可能與新疆漢族原發(fā)性高血壓不相關(guān)。Olcay等[4]對土耳其人群進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示27bp VNTR多態(tài)性與EH不相關(guān),F(xiàn)engmei DENG等[5]研究了新疆哈薩克族人群,發(fā)現(xiàn)eNOS基因27bp VNTR多態(tài)性與EH不相關(guān)。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果一致,而與Moe等[1]報(bào)道相異。分析這些研究結(jié)果的差異,可能與研究對象的種族差異、地區(qū)差異、飲食環(huán)境等不同有關(guān)。這說明不同人群中基因分布特征不同會(huì)影響到與疾病的相關(guān)性。同時(shí)也提示還需進(jìn)行更大樣本及在不同人群中進(jìn)一步研究。

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