基因修飾

了不同種類的基因修飾小鼠。通過(guò)對(duì)這些小鼠的基因組測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及代謝組學(xué)測(cè)序等可深度探索疾病的病因和遺傳發(fā)育機(jī)制，極大地促進(jìn)了科學(xué)研究[6-7]。而實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)要求在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中需要遵從3R原則：替代(replacement)、減少(reduction)和優(yōu)化(refinement)，旨在減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量，減輕動(dòng)物痛苦[8-9]。因此，在使用實(shí)驗(yàn)小鼠時(shí)應(yīng)盡可能地縮減實(shí)驗(yàn)周期，優(yōu)化小鼠繁育，短時(shí)間內(nèi)獲取足夠數(shù)量的小鼠，從而減少不必要的飼養(yǎng)和安樂(lè)死。在評(píng)

細(xì)胞）進(jìn)行基因修飾使之能夠殺死癌細(xì)胞而獲得的。 CAR-T 細(xì)胞靶向識(shí)別癌細(xì)胞表面上的一種特定蛋白（稱為抗原）。幾種治療復(fù)發(fā)性T-ALL 的CAR-T 療法靶向抗原CD7。這種抗原存在于許多T-ALL 癌細(xì)胞表面上。 然而，有一個(gè)問(wèn)題。 大多數(shù)正常T 細(xì)胞也表達(dá)CD7，且因?yàn)檫@些CAR-T 細(xì)胞會(huì)殺死任何攜帶這種特定標(biāo)志物的細(xì)胞。許多科研人員已經(jīng)嘗試通過(guò)基因修飾或以其他方式改變CAR-T 細(xì)胞以去除CD7 的表達(dá)來(lái)解決這個(gè)問(wèn)題。 然而這些方法很復(fù)雜，且有

的基因獲得的基因修飾豬，能夠克服異種移植免疫排斥反應(yīng)，可延長(zhǎng)豬來(lái)源供體器官在非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物受體中的存活時(shí)間。本文就基因修飾豬作為異種器官移植供體在克服各階段免疫排斥反應(yīng)的研究進(jìn)展作一綜述。1 超急性排斥反應(yīng)超急性排斥反應(yīng)（Hyperacute Rejection，HAR）是指當(dāng)異種細(xì)胞、組織或器官作為供體移植到宿主體內(nèi)，發(fā)生的快速而又強(qiáng)烈的免疫排斥反應(yīng)，表現(xiàn)為異種供體剛與受體血管吻合，在器官尚未發(fā)揮功能時(shí)就與體內(nèi)存在的天然抗體結(jié)合，通過(guò)激活體內(nèi)免疫系統(tǒng)攻擊

進(jìn)行HO-1基因修飾可能有助于提高療效。已有文獻(xiàn)報(bào)道[9]，HO-1基因修飾的EPC促進(jìn)后肢缺血大鼠模型缺血肢體的血管生成，HO-1基因修飾的EPC可能為下肢缺血性疾病提供一種新的有效治療策略[9]。因此，本研究觀察HO-1基因修飾的EPC對(duì)壓力負(fù)荷型高血壓大鼠心肌肥厚的治療作用，并初步揭示其分子機(jī)制，旨在探討高血壓心肌肥厚防治的新策略。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 藥品與試劑 淋巴細(xì)胞分離緩沖液(北京索萊寶科技有限公司)；胎牛血清(FBS，美國(guó)G

代［13］。基因修飾通常是在基因組中插入或刪除某些基因，從而獲得理想的表型特征。在技術(shù)層面，基因修飾豬最開(kāi)始主要依賴顯微注射來(lái)獲得，通過(guò)將多拷貝的DNA 注入到受精卵的核中，至少有一個(gè)拷貝的DNA 整合到受精卵的基因組中，才能成功獲得轉(zhuǎn)基因豬［14］。而后，隨著體細(xì)胞核移植技術(shù)（somatic cell nuclear transfer，SCNT）的興起，可以將發(fā)生了基因修飾的體細(xì)胞核移植到去核的卵母細(xì)胞中，再移植到代孕動(dòng)物的輸卵管中，分娩后即可獲得基因修

月7日接受了基因修飾豬心臟移植手術(shù)，病人術(shù)后情況良好，可檢測(cè)到正常的心跳、脈搏和血壓，且沒(méi)有明顯的排斥反應(yīng)。這是人類首次成功將基因修飾豬心臟移植到活著的患者體內(nèi)，標(biāo)志著異種器官移植新時(shí)代的開(kāi)始，將為大批缺乏人源心臟供體的心臟病患者帶來(lái)希望。但專家也坦言，現(xiàn)在說(shuō)美國(guó)這例手術(shù)取得成功還為時(shí)過(guò)早，需要確?；颊咴谖磥?lái)幾個(gè)月內(nèi)依然狀態(tài)良好，才能說(shuō)手術(shù)是成功的。這項(xiàng)技術(shù)不僅需要克服倫理問(wèn)題，還需要時(shí)間發(fā)展。截至1月19日，接受手術(shù)的患者已脫離ECMO（體外膜肺氧合），

型的研究中，基因修飾小鼠模型通過(guò)改變基因組的表達(dá)，將基因型和表型關(guān)聯(lián)，實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程的機(jī)制研究。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)多種基因與AD相關(guān)，如淀粉樣蛋白前體(amyloid precursor protein，APP)基因、Tau蛋白基因、載脂蛋白E(Apolipoprotein E，ApoE)基因、早老蛋白(Presenilin，PS)基因、ob(leptin)基因等。圍繞這些基因在指定位點(diǎn)上進(jìn)行突變，開(kāi)發(fā)出不同的基因修飾小鼠模型來(lái)模擬AD的發(fā)病過(guò)程或者是對(duì)藥物

的飛速發(fā)展和基因修飾技術(shù)的興起為PEDF的臨床應(yīng)用帶來(lái)了希望。MSCs是一類具有自我更新、高度增生、多向分化、歸巢遷移、低免疫原性特點(diǎn)的成體干細(xì)胞，具有損傷修復(fù)、神經(jīng)保護(hù)、免疫抑制、營(yíng)養(yǎng)、基因工程載體等作用。研究表明，MSCs在炎癥、退行性疾病、免疫性疾病中均可發(fā)揮一定的治療作用[5-7]。在眼科領(lǐng)域，已證實(shí)MSCs可用于治療視網(wǎng)膜及視神經(jīng)病變、眼部外傷、干眼等眼部疾病[8-9]。基因修飾技術(shù)通過(guò)基因組修飾改變細(xì)胞遺傳物質(zhì)，改善和增強(qiáng)生物細(xì)胞功能[10]。

模式生物）、基因修飾模型資源庫(kù)建設(shè)項(xiàng)目、人源化抗體小鼠模型研發(fā)項(xiàng)目、基于基因修飾動(dòng)物模型的藥效平臺(tái)建設(shè)項(xiàng)目、補(bǔ)充流動(dòng)資金項(xiàng)目?；久娼榻B：發(fā)行人主要從事基因修飾動(dòng)物模型及相關(guān)技術(shù)服務(wù)。發(fā)行人以“編輯基因，解碼生命”為己任，打造了以模式生物基因組精準(zhǔn)修飾、基因功能表型分析、藥物篩選與評(píng)價(jià)為核心的技術(shù)平臺(tái)，為客戶提供定制化模型、標(biāo)準(zhǔn)化模型等基因修飾動(dòng)物模型，以及模型繁育、藥效評(píng)價(jià)及表型分析、飼養(yǎng)服務(wù)等相關(guān)技術(shù)服務(wù)。發(fā)行人累計(jì)研發(fā)構(gòu)建了超過(guò)6，000種標(biāo)準(zhǔn)化模型

[8，9]。基因修飾是一種有潛力的提高EPCs遷移、增殖和分化能力的方法。許多研究表明移植基因修飾的EPC能夠有效修復(fù)血管損傷[10，11]和缺血造成的損傷[12-14]。脂聯(lián)素(adiponectin，APN)是大量存在于血液中的主要由脂肪細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，除了具有改善機(jī)體血脂、血糖代謝的作用外，還具有抑制動(dòng)脈粥樣硬化、促進(jìn)缺血組織局部血管新生等作用[15，16 ]。研究表明，APN促進(jìn)EPC的增殖、遷移、分化和形成管腔樣結(jié)構(gòu)[17，18]，而且與EP

PlGF-2基因修飾的BMSCs中檢測(cè)到了hPlGF-2 mRNA與蛋白的表達(dá)，且感染重組腺病毒pAd/hPlGF-2對(duì)BMSCs的增殖能力無(wú)影響。在大鼠皮膚創(chuàng)面注射hPlGF-2基因修飾的BMSCs后，創(chuàng)面感染程度較輕，愈合速度較快，在創(chuàng)傷后7d和14d觀察到EGFP標(biāo)記的BMSCs出現(xiàn)在創(chuàng)面血管周?chē)脱軆?nèi)皮處，同時(shí)有FⅧ表達(dá)。在創(chuàng)傷后7d新生肉芽組織中，bFGF的表達(dá)明顯增加。結(jié)論：hPlGF-2基因修飾的BMSCs能分化為成纖維細(xì)胞參與到皮膚創(chuàng)面修

實(shí)MSC通過(guò)基因修飾或適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)劑后，具有在特定基因表達(dá)和功能特性的神經(jīng)元細(xì)胞中分化的潛力[4-7]。此外，植入MSC對(duì)微環(huán)境信號(hào)有反應(yīng)并分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，這些神經(jīng)元樣細(xì)胞可誘導(dǎo)動(dòng)物坐骨神經(jīng)再生[8-9]。MSC還具有分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的能力，有助于修復(fù)受損神經(jīng)元[10]。因此，MSC作為理想的種子細(xì)胞，為外周神經(jīng)細(xì)胞損傷的臨床治療提供了機(jī)會(huì)。然而，有研究表明MSC的神經(jīng)源性分化能力有限，移植入動(dòng)物體內(nèi)后再生能力不足限制了MSC作為種子細(xì)胞在研究中的應(yīng)用。

ATP酶2a基因修飾的骨髓干細(xì)胞移植治療作用，旨在為臨床治療提供依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料選取由北京醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的雄性SD大鼠及雌性SD大鼠，4周齡，清潔級(jí)。將雄性大鼠作為骨髓供體，36只雌性大鼠為細(xì)胞移植受體及基因治療的受體，體重200～250g；正常飲食、飲水。1.2 試劑與儀器浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)療儀器廠生產(chǎn)的小動(dòng)物呼吸機(jī)，德國(guó)Leica公司生產(chǎn)的冰凍切片機(jī)，Philips公司生產(chǎn)的心臟超聲心動(dòng)圖。胎牛血清、IMDM培養(yǎng)基、胰蛋白酶由Si

-TRAIL基因修飾間充質(zhì)干細(xì)胞及其殺傷肺腺癌細(xì)胞的研究米一，王立華，李欣，王皓，張晨亮，馬靜，苗麗，劉擁軍，劉廣洋100176 北京貝來(lái)生物科技有限公司（米一、李欣、王皓、張晨亮、馬靜、苗麗、劉擁軍、劉廣洋）；100176 北京市亦創(chuàng)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)研究院干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)研究所（米一、李欣、王皓、張晨亮、馬靜、苗麗、劉擁軍、劉廣洋）；053600 石家莊，河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液科（王立華）通過(guò)基因工程手段構(gòu)建了可高表達(dá)十二聚體 TRAIL的間充質(zhì)干細(xì)胞（M

探究t-PA基因修飾內(nèi)皮祖細(xì)胞治療大鼠急性心肌梗死的作用。1 資料與方法1.1 方法 本研究所選用的大鼠均為成年SD大鼠，均是雄性，體質(zhì)量在200 g-230 g，平均體質(zhì)量（215.0±5.0）g，鼠齡6周-9周，平均（7.5±0.5）周。建立心肌梗死模型：麻醉、消毒后開(kāi)胸，左心耳暴露后，對(duì)大鼠的左前降支動(dòng)脈進(jìn)行結(jié)扎，對(duì)心肌顏色進(jìn)行觀察，若大鼠的心肌顏色變白，心電圖顯示ST短抬高則為模型創(chuàng)建成功。將入建模成功額70只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為各35例的對(duì)照

長(zhǎng)期可遺傳的基因修飾，在維持細(xì)胞正常的轉(zhuǎn)錄活性、DNA 損傷修復(fù)能力以及在遺傳印記、胚胎發(fā)育和腫瘤的發(fā)生發(fā)展中都有不可替代的作用，是分子生物學(xué)及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。本文總結(jié)了近年來(lái)對(duì)DNA甲基化的相關(guān)研究，歸納了DNA甲基化的保守功能、在動(dòng)植物中甲基化研究、在疾病中的甲基化研究和DNA甲基化的應(yīng)用，以期對(duì)DNA 甲基化這一表觀遺傳學(xué)熱點(diǎn)進(jìn)行深入的學(xué)習(xí)探討。關(guān)鍵詞 DNA；甲基化；基因修飾1 引言DNA甲基化是指將DNA基團(tuán)加入到DNA分子的過(guò)程，這一過(guò)程可

Bcl-2雙基因修飾的MSC，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)其在糖氧剝奪環(huán)境下能更強(qiáng)旁分泌多種細(xì)胞因子[8]。2016年10月至2017年3月，我們將VEGF和Bcl-2雙基因修飾的MSC與新生SD大鼠心肌細(xì)胞共培養(yǎng)并缺氧處理24 h，研究其是否能減少缺氧心肌細(xì)胞的凋亡。1 材料與方法1.1 材料 SD大鼠MSC購(gòu)自中國(guó)Cyagen公司；VEGF和Bcl-2雙基因修飾的MSC(MSC+BV)為本實(shí)驗(yàn)室之前所構(gòu)建并保存[8]；出生1～3 d的新生SD大鼠購(gòu)自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)

展極大縮短了基因修飾小鼠的制備周期，大量的靶位點(diǎn)修飾、轉(zhuǎn)基因小鼠被應(yīng)用于基因功能的研究，這些品系小鼠的活體保種工作也成為各研究機(jī)構(gòu)工作的重要部分。配子冷凍保種是將小鼠精子、卵子以及胚胎保存在極低溫度下，使其新陳代謝完全停止的一種保種方式，被認(rèn)為可以替代活體保種[1]。配子冷凍保存一方面可以防止品系的遺傳漂變，減少各種因素造成的品系丟失，另一方面可以減少活體保種帶來(lái)的人力財(cái)力消耗。常用的品系保存方法包括胚胎冷凍法和精子冷凍法。精子冷凍相比于胚胎冷凍操作更加簡(jiǎn)

易于接受外源基因修飾［5］，并具有靶向遷移到腫瘤組織、損傷組織以及慢性炎性反應(yīng)部位的特性［6］，因此可被用作腫瘤等基因治療的載體細(xì)胞。然而，在進(jìn)行體內(nèi)移植時(shí)，外源輸入的MSC在氧化應(yīng)激［7］和組織缺血、缺氧［8］等惡劣環(huán)境下會(huì)大量死亡，療效受到限制；另一方面，MSC的免疫調(diào)節(jié)能力對(duì)炎性因子的刺激有依賴性，只有在受到γ-干擾素等刺激并誘導(dǎo)性地表達(dá)吲哚胺-2，3-雙加氧酶（indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO）等效應(yīng)分子后，MSC的免

林，耿立霞△基因修飾，主要是指利用生物化學(xué)方法修改DNA 序列，達(dá)到改變宿主細(xì)胞基因型或者使得原有基因型得到加強(qiáng)的效果。目前常用于基因修飾的病毒載體有腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒3 種。其中腺病毒載體具有制備簡(jiǎn)單、易轉(zhuǎn)染、表達(dá)目的基因效果強(qiáng)、免疫排斥反應(yīng)低、安全性好等優(yōu)勢(shì)［1］。間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是一群具有多向分化潛能并可自我復(fù)制的多能干細(xì)胞。目前研究比較多的是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow st

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(基因修飾動(dòng)物)作為人類疾病動(dòng)物模型開(kāi)始進(jìn)入了醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，轉(zhuǎn)基因(基因修飾)動(dòng)物及技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的作用越來(lái)越顯著，應(yīng)用也越來(lái)越廣泛，新型基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9更被看作下一個(gè)諾貝爾獎(jiǎng)的熱門(mén)[4,5]。因此，讓醫(yī)學(xué)院校的研究生了解和掌握轉(zhuǎn)基因動(dòng)物領(lǐng)域的前沿技術(shù)和發(fā)展動(dòng)態(tài)，初步掌握轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制作方法與技能，將會(huì)為其以后的研究工作增加理論和技術(shù)儲(chǔ)備。首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部面向全校(包括校本部和臨床醫(yī)院)開(kāi)設(shè)了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)這門(mén)課程，上課后

少，并可通過(guò)基因修飾來(lái)增強(qiáng)供體器官的匹配性［2-4］。因此，豬被公認(rèn)為是最適合的異種移植供體。隨著基因編輯、體細(xì)胞核移植技術(shù)的發(fā)展以及新型免疫抑制劑的開(kāi)發(fā)，人們可以最大限度地降低豬器官的免疫原性，甚至通過(guò)嵌合方法在豬體內(nèi)直接生長(zhǎng)出人體器官，使豬成為源源不斷供應(yīng)人體器官的工廠，解決人類器官供體短缺的難題。在最近的十多年里，異種器官移植得到了快速發(fā)展，在很大程度上解決了免疫排斥等難題，進(jìn)一步推動(dòng)了豬器官、組織和細(xì)胞在異種移植臨床中的應(yīng)用。1 異種移植供體豬面臨

的 TCR 基因修飾T細(xì)胞在治療滑膜肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤以及黑色素瘤等腫瘤中已取得了較好的臨床療效[7-10]，證明腫瘤抗原特異性TCR基因修飾T細(xì)胞具有較強(qiáng)的抗腫瘤效果，是比較有前景的抗腫瘤免疫治療手段。胎盤(pán)特異性基因1（placenta-specific 1，PLAC1）是CT抗原中的新一員。CT抗原家族最典型的特征是在正常組織的表達(dá)僅限于生殖細(xì)胞，或（和）胎盤(pán)滋養(yǎng)層組織，但在腫瘤組織的表達(dá)呈廣泛性。研究已證實(shí)，PLAC1在多種腫瘤尤其在乳腺癌中異?；罨?/div>

中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版) 2018年2期2018-06-11

將應(yīng)用NGF基因修飾的BMSCs經(jīng)腦梗死模型大鼠的尾靜脈移植進(jìn)入其體內(nèi)，以求發(fā)揮NGF和BMSCs兩者的協(xié)同治療作用，為臨床治療腦梗死做出有益的探索。1 材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料相同遺傳背景健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，體質(zhì)量280～320 g，由鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。優(yōu)級(jí)胎牛血清(Hyclone)，DMEM培養(yǎng)基(Hyclone公司)，G418(Gibco公司)，淋巴細(xì)胞分離液及BrdU(Sigma公司)，小鼠抗B

答：常用的基因修飾大小鼠可以分為以下5大類，構(gòu)建的方法如下：(1)全身敲除大小鼠：目前主要采用基因編輯工具(如TALENs、CRISPR/Cas9)造成基因移碼突變，或刪除一段DNA片段來(lái)實(shí)現(xiàn)全身敲除基因大小鼠。(2)條件性敲除大小鼠：通常利用基因條件性表達(dá)體系(如Cre/loxP)來(lái)實(shí)現(xiàn)，具體需要兩種小鼠進(jìn)行交配：a. 帶有兩個(gè)loxP位點(diǎn)的小鼠；b. 組織特異性表達(dá)Cre的小鼠。兩種小鼠交配后繁育的子代中可實(shí)現(xiàn)在特定組織或器官中基因敲除。(3)點(diǎn)突變敲

了新的希望。基因修飾支架原位促血管化是用于臨界性骨修復(fù)的有效途徑之一。眾所周知，骨組織工程包括 3 個(gè)關(guān)鍵因素：生長(zhǎng)因子、生物支架材料和種子細(xì)胞[5]。其中，生物支架材料的選擇是骨組織工程的核心問(wèn)題。在新骨形成之前，生物支架不僅為細(xì)胞提供黏附、生長(zhǎng)、增殖、分化、營(yíng)養(yǎng)交換、新陳代謝的空間及機(jī)械支撐，而且也是細(xì)胞外基質(zhì)分泌的空間場(chǎng)所，是形成新的具有一定形態(tài)和功能的組織、器官的物質(zhì)基礎(chǔ)，是決定組織工程骨能否用于臨床的關(guān)鍵[6,7]。傳統(tǒng)方法制備的支架材料，由于內(nèi)

?非人靈長(zhǎng)類基因修飾模型研究進(jìn)展劉真，蔡毅君，孫強(qiáng)中國(guó)科學(xué)院神經(jīng)科學(xué)研究所中國(guó)科學(xué)院腦科學(xué)與智能技術(shù)卓越創(chuàng)新中心神經(jīng)生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中國(guó)科學(xué)院靈長(zhǎng)類神經(jīng)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200031劉真, 蔡毅君, 孫強(qiáng). 非人靈長(zhǎng)類基因修飾模型研究進(jìn)展. 生物工程學(xué)報(bào), 2017, 33(10): 1665–1673.Liu Z, Cai YJ, Sun Q. Advance of gene-modified non-human primate models.

病毒的型別；基因修飾實(shí)驗(yàn)根據(jù)被敲除或插入的序列位點(diǎn)上下游病毒核酸序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增及電泳，并用電泳圖分析OH2病毒基因組中是否剔除ICP34.5基因、ICP47基因及插入hGM-CSF基因；ELISA檢測(cè)OH2上清中hGM-CSF含量驗(yàn)證插入的hGM-CSF基因能否正常表達(dá)。結(jié)果 型別鑒定實(shí)驗(yàn)中HSV-1經(jīng)酶切實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)130bp和70bp兩條條帶，而HSV-2和OH2病毒PCR條帶和酶切條帶均只有一條，且為200bp。基因修飾實(shí)驗(yàn)中OH2病毒在四對(duì)

輯方法建立的基因修飾動(dòng)物為生物醫(yī)學(xué)研究提供了重要工具，這些動(dòng)物模型極大地促進(jìn)了人們對(duì)基因、蛋白的認(rèn)識(shí)，加速了人們對(duì)疾病發(fā)病機(jī)理探討和新藥研發(fā)的進(jìn)度。 為加強(qiáng)同行間學(xué)術(shù)交流，提高科技人員技術(shù)水平，推廣基因編輯技術(shù)在基因修飾動(dòng)物研究中的應(yīng)用，陜西省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)擬在2017年12月8日于西安陽(yáng)光國(guó)際酒店舉辦“基因修飾動(dòng)物開(kāi)發(fā)和應(yīng)用”學(xué)術(shù)研討會(huì)，會(huì)議將邀請(qǐng)日本山梨大學(xué)范江霖教授、中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥健康研究院賴良學(xué)研究員、中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院張連峰研究員、百奧賽圖基因

綜述與講座·基因修飾DC疫苗在肺癌中的研究進(jìn)展簡(jiǎn) 艷綜述 鈄方芳審校基因修飾；樹(shù)突細(xì)胞；肺癌肺癌是我國(guó)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤[1]，大部分患者在確診時(shí)已處于中晚期，手術(shù)和放化療是肺癌的傳統(tǒng)治療模式。近年來(lái)，生物治療逐漸成為腫瘤的第四大治療模式，表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑為肺癌患者的生存帶來(lái)福音，以DC和CIK疫苗為基礎(chǔ)的主動(dòng)和過(guò)繼免疫治療也在臨床上取得了一定成績(jī)，但肺癌的5年生存率仍不足15%[2]。所以不斷探索肺癌的發(fā)病機(jī)制及尋找新的治療方式

，實(shí)現(xiàn)了樹(shù)鼩基因修飾技術(shù)的突破。相關(guān)成果發(fā)表在《細(xì)胞研究》雜志?？蒲腥藛T首先成功篩選到細(xì)胞表面標(biāo)記分子Thy1可用于富集樹(shù)鼩睪丸中的精原干細(xì)胞，并發(fā)現(xiàn)一個(gè)信號(hào)通路及樹(shù)鼩睪丸支持細(xì)胞對(duì)于精原干細(xì)胞維持其增殖及干細(xì)胞特征至關(guān)重要，據(jù)此改善了樹(shù)鼩精原干細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)體系，并建立了多株可長(zhǎng)期穩(wěn)定傳代培養(yǎng)的樹(shù)鼩精原干細(xì)胞系。這些體外長(zhǎng)期培養(yǎng)的樹(shù)鼩精原干細(xì)胞可穩(wěn)定表達(dá)外源基因，也可以利用CRISPR/Cas9進(jìn)行基因編輯。基因修飾后的樹(shù)鼩精原干細(xì)胞移植到經(jīng)白消安處理

%被修飾。將基因修飾細(xì)胞移植到免疫缺陷小鼠時(shí)，其植入率與非基因修飾細(xì)胞相當(dāng)。此外，在免疫缺陷小鼠模型中，HIV-1體內(nèi)感染期間，基因修飾的CD4+細(xì)胞被優(yōu)先地?cái)U(kuò)增。該研究的結(jié)果顯示了用工程化megaTAL核酸酶靶向原代T細(xì)胞CCR5基因的可行性，以及用基因修飾細(xì)胞重建病人免疫系統(tǒng)和抵抗HIV 感染的潛能。Mol Ther Nucleic Acids，2016，5( 8) : e352( 李光明)

個(gè)基因進(jìn)行了基因修飾(敲除、點(diǎn)突變、堿基序列替換等)，如果其中一個(gè)等位基因包含基因修飾，另外的等位基因未修飾，我們稱為雜合突變小鼠，一般簡(jiǎn)寫(xiě)為HET小鼠。如果兩個(gè)等位基因都包含了基因修飾，我們稱為純合子突變小鼠，也稱為敲除小鼠(knockout mouse)，簡(jiǎn)稱KO小鼠。(感謝中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所 馬元武 博士的解答)

括對(duì)蚊蟲(chóng)進(jìn)行基因修飾以及使蚊蟲(chóng)攜帶細(xì)菌以抑制蚊卵孵化。WHO表示，其專家團(tuán)隊(duì)已經(jīng)對(duì)目前5種應(yīng)對(duì)伊蚊的策略進(jìn)行了評(píng)估。其中的3種，包括殺蚊技術(shù)、陷阱導(dǎo)航及含糖毒餌，目前處于實(shí)驗(yàn)室研究階段，尚不具有實(shí)用價(jià)值。但另兩項(xiàng)應(yīng)對(duì)策略，包括釋放帶有沃爾巴克體的蚊蟲(chóng)及使用基因修飾或轉(zhuǎn)基因雄性蚊蟲(chóng)，可在嚴(yán)格的監(jiān)控下開(kāi)展相關(guān)試驗(yàn)和評(píng)估。轉(zhuǎn)基因蚊蟲(chóng)是由Oxitec公司培育的，該蚊種成長(zhǎng)為性成熟個(gè)體前即死亡，不具有繁殖能力。沃爾巴克體不感染人，但可導(dǎo)致蚊卵孵化障礙。前期研究已發(fā)現(xiàn)

有兩套。獲得基因修飾動(dòng)物為了檢測(cè)單倍體胚胎干細(xì)胞的功能，科學(xué)家們將孤雄單倍體干細(xì)胞注射到卵母細(xì)胞中，驚奇地發(fā)現(xiàn)，它能夠成功替代精子完成使卵受精的使命，所得胚胎能正常發(fā)育至成年并具有生育能力。進(jìn)一步，科學(xué)家們對(duì)這種孤雄單倍體胚胎干細(xì)胞進(jìn)行了特定的基因修飾，并注射進(jìn)卵母細(xì)胞得到后代，這樣出生的小鼠直接攜帶了這種修飾后的基因序列，從而方便地獲得了基因修飾動(dòng)物。利用單倍體胚胎干細(xì)胞獲得基因修飾動(dòng)物，為一些其胚胎干細(xì)胞不能嵌合到生殖系的物種，例如非人靈長(zhǎng)類等，提供了

·實(shí)驗(yàn)論著·基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)變化謝茂松，徐國(guó)興，黃禮彬Abstract?AIM: To study the changes of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) expression in gene modified bone marrow mesenchymal stem cells (BMSC).?METHODS: BMSC were divided into blank

于iPS進(jìn)行基因修飾大動(dòng)物的制作打通了技術(shù)瓶頸；首次將鋅指核酸酶介導(dǎo)的基因打靶技術(shù)應(yīng)用于豬基因修飾，實(shí)現(xiàn)了對(duì)大動(dòng)物高效基因打靶；首次將2A序列介導(dǎo)的多基因轉(zhuǎn)移技術(shù)應(yīng)用于豬基因組修飾，成功獲得了四色熒光豬，并實(shí)現(xiàn)了多個(gè)外源基因在動(dòng)物體內(nèi)的高效協(xié)同表達(dá)……這些原創(chuàng)成果都出自中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院聯(lián)合南方醫(yī)科大學(xué)、浙江大學(xué)、深圳華大基因研究院等完成的項(xiàng)目“豬基因突變技術(shù)創(chuàng)新及基因修飾豬模型的建立”，該項(xiàng)目組在大動(dòng)物基因修飾技術(shù)方面所取得的突破及所獲得

獲得克隆豬和基因修飾豬。近年來(lái)新興了多種基因高效靶向修飾和調(diào)控技術(shù)，為基因修飾豬研究奠定了技術(shù)基礎(chǔ)，推進(jìn)了基因修飾豬的研究從基礎(chǔ)研究轉(zhuǎn)向應(yīng)用研究。介紹了豬體細(xì)胞核移植技術(shù)的發(fā)展歷程，主要技術(shù)環(huán)節(jié)的優(yōu)化，并對(duì)豬體細(xì)胞核移植的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，在農(nóng)業(yè)、生物醫(yī)藥上的應(yīng)用及意義，存在問(wèn)題與前景等進(jìn)行了概述。體細(xì)胞核移植技術(shù)；豬；基因修飾；轉(zhuǎn)基因核移植技術(shù)是創(chuàng)建基因完全相同的個(gè)體的過(guò)程（即為克?。?，包括卵母細(xì)胞的成熟，供體細(xì)胞的分離和處理，重構(gòu)胚的人工激活，胚胎培養(yǎng)和胚胎移

入研究。隨著基因修飾技術(shù)的發(fā)展，小鼠肝癌模型的構(gòu)建更加快速、容易和方便。本文擬對(duì)用于肝癌研究的各種小鼠模型進(jìn)行概述，并著重強(qiáng)調(diào)基因修飾小鼠肝癌模型的構(gòu)建，以期為相關(guān)癌癥基因功能研究、應(yīng)用基因編輯技術(shù)研發(fā)肝癌模型提供新思路和方向?！娟P(guān)鍵詞】肝癌；基因修飾；小鼠模型世界范圍內(nèi)，肝癌在男女性中分別位居第三和第六大死亡率癌癥，已經(jīng)嚴(yán)重威脅到人類健康和生命［1］。全球每年約有700 000新發(fā)肝癌患者和近600 000患者死于肝癌［2］。我國(guó)是全球肝癌發(fā)病率最高和死

討了如何通過(guò)基因修飾技術(shù)來(lái)改善豬脂肪酸的組成和比例袁為人們提供更加健康的肉類遙關(guān)鍵詞院脂肪；肉質(zhì)；脂肪酸；基因修飾1　脂肪對(duì)豬肉品質(zhì)的影響脂肪是動(dòng)物體的重要組成部分，過(guò)多蓄積會(huì)導(dǎo)致肥胖。豬常常被視為是動(dòng)物界“胖”的代表，其實(shí)不然，目前市場(chǎng)上的絕大多數(shù)商品豬都是瘦肉型，它們的脂肪率約為18.2%，而常人的脂肪率在10%～30%之間[1]。所以從科學(xué)的角度看，取笑某人“胖得像豬”是不準(zhǔn)確的。市場(chǎng)上的瘦肉型豬是長(zhǎng)期選育而來(lái)，脂肪沉積較少，飼料利用率高，生長(zhǎng)快，背

負(fù)荷載體經(jīng)過(guò)基因修飾擴(kuò)增原代培養(yǎng)的BM-MSCs，將構(gòu)成的細(xì)胞-支架復(fù)合物直接植入兔關(guān)節(jié)軟骨缺損處，觀察其成軟骨的病理形態(tài)及軟骨基質(zhì)的蛋白表達(dá)變化。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 動(dòng)物15 只新西蘭大白兔購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，1.5 月齡，體重（1±0.1）kg。1.1.2 主要試劑DMEM、胎牛血清、無(wú)血清培養(yǎng)基Opti-MEM 購(gòu)自Hyclone 公司；Lipofectimane 2000 購(gòu)自Sigma 公司；殼聚糖購(gòu)自ALVITO B

等.文章將對(duì)基因修飾技術(shù)發(fā)展脈絡(luò)做統(tǒng)一梳理，并將系統(tǒng)闡述CRISPR/Cas系統(tǒng)的原理、應(yīng)用以及該技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn).關(guān)鍵詞：基因修飾；CRISPR/Cas系統(tǒng)；基因編輯從20世紀(jì)50年代沃森和克里克揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)開(kāi)始，人們真正從分子水平認(rèn)識(shí)了基因，開(kāi)啟了通過(guò)改造基因來(lái)改造生物的科學(xué)實(shí)踐.1980年,Gordon利用顯微注射的方法獲得了第一例轉(zhuǎn)基因小鼠，標(biāo)志著動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的建立，也是基因編輯技術(shù)的開(kāi)始[1].基因編輯技術(shù)是人們開(kāi)啟認(rèn)識(shí)基因功能的鑰

院心血管內(nèi)科基因修飾內(nèi)皮祖細(xì)胞在冠心病治療中的研究進(jìn)展馬國(guó)棟 梁偉鈞（通訊作者） 524000廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科冠心病的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其中一個(gè)重要的發(fā)病機(jī)制是冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮損傷和修復(fù)兩者間的平衡受到破壞。目前關(guān)于冠心病治療方法主要包括藥物治療、冠脈搭橋、支架介入等。內(nèi)皮祖細(xì)胞在一定條件下能分化為內(nèi)皮細(xì)胞，參與血管新生。但是內(nèi)皮祖細(xì)胞在人體組織中含量極低，遠(yuǎn)不夠?yàn)橐浦仓委熕?。另外，有多?xiàng)研究顯示，年齡大、冠心病、糖尿病、高血壓患者的內(nèi)皮祖細(xì)胞相比正

充質(zhì)干細(xì)胞；基因修飾[中圖分類號(hào)] R457.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）13-48-04[Abstract] Bone marrow mesenchymal stem cells （BMSCs） are non-hematopoietic adult stem cells existing in bone marrow matrix that have multi-directional differentiatio

人員開(kāi)始應(yīng)用基因修飾小鼠進(jìn)行各種科學(xué)研究，如研究疾病的發(fā)生機(jī)制、研究基因的表達(dá)與調(diào)控、研究藥物的作用機(jī)制等。然而隨著基因修飾小鼠的廣泛使用，在飼養(yǎng)管理中必然會(huì)遇到一些新情況，這些新情況、新問(wèn)題對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從業(yè)者和管理者而言也是一個(gè)嶄新的課題。本文以北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施中飼養(yǎng)的基因修飾小鼠為對(duì)象，著重探討在管理和使用中出現(xiàn)的問(wèn)題，并加以分析，為建立基因修飾小鼠的管理規(guī)范奠定基礎(chǔ)。1 飼養(yǎng)在清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施中基因修飾小鼠的概況基因修

用前景。1 基因修飾技術(shù)及修飾后MSC的優(yōu)越性基因修飾主要是指利用生物化學(xué)方法修改DNA 序列，將目的基因片段導(dǎo)入宿主細(xì)胞，或者將特定基因片段從基因組中刪除，從而達(dá)到改變宿主細(xì)胞基因型或使得原有基因型得到加強(qiáng)的作用。修飾基因一旦導(dǎo)入細(xì)胞，即可超表達(dá)特定基因或構(gòu)建的基因，不斷合成特定蛋白質(zhì)，使其對(duì)高血糖、激素濃度或藥物、化學(xué)因素等生理刺激反應(yīng)更敏感。相比其他成體干細(xì)胞（造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞等）而言，MSC 具有明顯的營(yíng)養(yǎng)和免疫調(diào)節(jié)特性，更適用于治療退行性疾

因mazF在基因修飾系統(tǒng)中的應(yīng)用進(jìn)展石楊1，2董會(huì)娜2張大偉2（1.天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，天津 300072；2.中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所，天津 300308）毒素-抗毒素系統(tǒng)（Toxin-antitoxin system，TA系統(tǒng)）存在于大部分細(xì)菌中。mazEF是大腸桿菌中一種毒素-抗毒素系統(tǒng)。毒素基因mazF編碼的MazF毒素蛋白可以特異性地剪切自由mRNA的ACA序列，從而抑制蛋白合成、引起細(xì)胞生長(zhǎng)停滯；近些年，許多學(xué)者利用mazF基因

，IL－18基因修飾能增強(qiáng)腫瘤疫苗的療效[1]，但I(xiàn)L－18基因修飾否能增強(qiáng)肺癌細(xì)胞來(lái)源exosome誘導(dǎo)的抗腫瘤作用尚不清楚。腫瘤細(xì)胞來(lái)源的exosome含有腫瘤抗原，能夠刺激樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells，DC)誘導(dǎo)活化T細(xì)胞而產(chǎn)生抗腫瘤作用[2]，是exosome疫苗重要來(lái)源。為此，本文旨在研究IL－18基因修飾的NCI-H460肺癌細(xì)胞來(lái)源exosome誘導(dǎo)活化T細(xì)胞對(duì)肺癌細(xì)胞的殺傷作用，為獲得高效的exosome疫苗作初步探討。材料和

步提高?，F(xiàn)就基因修飾后間充質(zhì)干細(xì)胞在急性心肌梗死中的應(yīng)用綜述如下。1 間充質(zhì)干細(xì)胞的特性MSCs在特定微環(huán)境和適宜的細(xì)胞因子作用下可分化為成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肌肉細(xì)胞和心肌細(xì)胞等[1]。此類細(xì)胞可從骨髓、臍帶血及脂肪組織中提取。由于MSCs具有多向分化和體外自我增殖特性,使其成為再生醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)。體外研究表明MSCs具有免疫調(diào)節(jié)功能,能夠抑制T淋巴細(xì)胞的增殖和抗原呈遞細(xì)胞的成熟,同時(shí)可調(diào)節(jié)B細(xì)胞功能,抑制炎癥介質(zhì)的釋放[2]

,GDNF)基因修飾大鼠胚胎中腦神經(jīng)干細(xì)胞(mesencephalic neural stem cells,mNSCs)移植對(duì) PD大鼠的治療作用,為臨床應(yīng)用細(xì)胞移植治療 PD奠定研究基礎(chǔ)。1 材料與方法1.1 SPIO、EGFP雙標(biāo)大鼠胚胎 mNSCs的建立[5]1.2 SPIO、EGFP雙標(biāo) GDNF基因修飾大鼠胚胎 mNSCs的建立[6]1.3 PD模型大鼠的建立 2%戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉 SD大鼠,于右側(cè)前腦內(nèi)側(cè)束(A/P:-3.6mm