傳代
- 胎鼠神經(jīng)干細(xì)胞原代培養(yǎng)及傳代條件優(yōu)化
示：NSCs 在傳代培養(yǎng)后的活性受培養(yǎng)基成分、生長(zhǎng)因子濃度、消化時(shí)長(zhǎng)和吹打力度等方面的影響，但傳代的細(xì)胞密度和傳代時(shí)神經(jīng)球大小對(duì)NSCs 活性影響及其作用效果尚未完全闡明。本研究在原代培養(yǎng)NSCs 的基礎(chǔ)上，探討傳代的細(xì)胞密度和神經(jīng)球大小對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞活性的影響，為優(yōu)化NSCs 的體外培養(yǎng)條件提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器孕12~14 d SPF級(jí)SD 大鼠，無(wú)特定病原體動(dòng)物，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)
- 富集纖維素降解菌群過(guò)程中微生物群落多樣性分析
用。本研究以連續(xù)傳代的纖維素降解復(fù)合菌系為研究對(duì)象，利用16S rRNA 及ITS基因擴(kuò)增子高通量測(cè)序方法，分析不同傳代復(fù)合菌系降解纖維素過(guò)程中各微生物分類(lèi)單元的群落組成及其相對(duì)豐度變化，探究復(fù)合菌系群落結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。1 材料與方法1.1 材料接種物：取自四川省金堂縣農(nóng)村合作社新鮮屠宰的山羊瘤胃內(nèi)溶物，4℃保存于無(wú)菌的血清瓶中。配制赫奇遜無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基(g·L-1)：KH2PO41.0，NaCl 0.1，MgSO4·7H2O 0.3，NaNO32.5，
中國(guó)沼氣 2023年1期2023-03-27
- 狂犬病病毒aG株在人用狂犬病疫苗中應(yīng)用的研究進(jìn)展
毒，隨后通過(guò)兔腦傳代，馴化為一種固定毒：1~10代的潛伏期不穩(wěn)定，波動(dòng)在10～26 d；30代后的潛伏期穩(wěn)定在6 d。將該毒株命名為“北京株”，適應(yīng)31代后用于制備狂犬病疫苗，該株病毒毒力略強(qiáng)于法國(guó)、德國(guó)、意大利、波蘭、印度等國(guó)家的毒株，具有免疫原性好、遺傳穩(wěn)定的特點(diǎn)，用其生產(chǎn)的狂犬病疫苗有效性良好［3］。20世紀(jì)60~70年代，研究者將狂犬病病毒北京株通過(guò)豚鼠腦傳代與原代地鼠腎細(xì)胞交替傳代的方法適應(yīng)于原代地腎細(xì)胞培養(yǎng)，用于狂犬病疫苗生產(chǎn)。該毒株免疫原性好
中國(guó)生物制品學(xué)雜志 2022年3期2022-11-15
- 豬繁殖與呼吸綜合征病毒傳代與免疫原性變化的關(guān)聯(lián)研究
JX143經(jīng)細(xì)胞傳代的三個(gè)代次病毒（JXM105、JXM125和JXM135）為研究對(duì)象，通過(guò)3株傳代毒株對(duì)其親本毒株JX143免疫保護(hù)效力評(píng)價(jià)和全基因組序列分析，解析病毒體外傳代與毒株免疫原性間的關(guān)聯(lián)。本研究首先用4周齡仔豬的免疫接種試驗(yàn)和攻毒保護(hù)試驗(yàn)初步評(píng)價(jià)了3株傳代毒株的安全性和免疫效力，為PRRSV傳代致弱毒株的科學(xué)評(píng)價(jià)提供參考。隨后在對(duì)這3個(gè)毒株進(jìn)行全長(zhǎng)基因組測(cè)序的基礎(chǔ)上，結(jié)合動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果，探討了JX143毒株在細(xì)胞傳代過(guò)程中獲得的基因突變與病毒
中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào) 2022年4期2022-09-23
- 嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌遺傳性對(duì)其益生特性及貨架期菌數(shù)的影響
]。這是因?yàn)檫B續(xù)傳代和轉(zhuǎn)管次數(shù)可導(dǎo)致基因重排或缺失，影響其益生特性[20-23]。本研究中菌株是經(jīng)文獻(xiàn)報(bào)道，具有優(yōu)良益生特性[24]。通過(guò)評(píng)價(jià)益生性狀遺傳性及貨架期存活率，篩選益生特性最佳菌株，旨在為益生菌產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化提供依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料與試劑嗜酸乳桿菌Z-43，乳雙歧桿菌Z-1，Z-36，Z-38，Z-39，長(zhǎng)雙歧桿菌Z-5，短雙歧桿菌Z-47，由青島根源生物技術(shù)集團(tuán)公司食品菌株資源庫(kù)提供；鼠李糖乳桿菌LGG購(gòu)于新西蘭恒天然公司。MRS肉湯
中國(guó)乳品工業(yè) 2022年4期2022-05-19
- 無(wú)血清全懸浮PK15細(xì)胞培養(yǎng)豬圓環(huán)病毒2型的研究
、低血清懸浮優(yōu)化傳代、無(wú)血清懸浮傳代培養(yǎng)，累計(jì)傳代23次后，該株細(xì)胞可在無(wú)血清全懸浮培養(yǎng)條件下，初始密度為0.5×106/mL時(shí)，經(jīng)72 h密度可增殖到4.0×106/mL左右，形態(tài)良好，倍增時(shí)間穩(wěn)定，且細(xì)胞活率達(dá)到95%以上，命名為PK15-S[5]。1.2.2 PK15-S細(xì)胞對(duì)PCV2敏感性實(shí)驗(yàn) 參考平面PK15細(xì)胞接毒工藝，將馴化后的PK15-S細(xì)胞按0.04 MOI接毒，接毒密度為0.5×106/mL，同時(shí)加入2% D-G(V/V)，48 h、7
中國(guó)獸藥雜志 2022年1期2022-02-21
- 酵母在傳代過(guò)程中生長(zhǎng)性能、碳流向及抗氧化特性的研究
問(wèn)題，需要不斷地傳代保藏，在傳代保藏過(guò)程中會(huì)發(fā)生衰老，嚴(yán)重影響發(fā)酵產(chǎn)物的品質(zhì)[5]。酵母的衰老主要分為兩種：(1)隨著酵母不斷傳代、分裂次數(shù)的增多，活力逐漸降低，稱(chēng)為復(fù)制性衰老；(2)單個(gè)酵母產(chǎn)生有限的子細(xì)胞的時(shí)序性衰老[6-7]。引起酵母細(xì)胞衰老的原因主要有：(1)酵母細(xì)胞端粒理論[8-9]，酵母細(xì)胞在每次分裂過(guò)程中細(xì)胞端粒縮短3～4 bp，直到細(xì)胞的平均端粒長(zhǎng)度200 bp耗盡，酵母的DNA發(fā)生損傷造成衰老。(2)酵母內(nèi)源性氧化脅迫[10]，酵母在代謝
- 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響因素：供體年齡和體外擴(kuò)增
研究表明，在早期傳代中，hBMSC的細(xì)胞增殖率約為48 h。在第10 代（10 passages，P10）后，細(xì)胞的增殖效率穩(wěn)步下降。至少在P10之前hBMSC 保留了其高水平的端粒酶活性和長(zhǎng)端粒長(zhǎng)度。hBMSCs 在P15 顯示出擴(kuò)大、扁平的細(xì)胞形態(tài)，此后他們停止進(jìn)行細(xì)胞分裂，但仍保持存活。在P20， hBMSCs 經(jīng)歷了周期阻滯，端粒酶活性顯著降低。大鼠的BMMSCs 成纖維細(xì)胞樣形態(tài)維持了7 ～ 10 代。漸漸地，衰老細(xì)胞的增殖速度明顯減緩，凋亡率增
實(shí)用器官移植電子雜志 2021年6期2021-11-30
- 塞尼卡病毒A在BHK-21細(xì)胞中培養(yǎng)條件探索
酶-EDTA消化傳代（比例為1:3），隨機(jī)將細(xì)胞分成2組，一組同步接種1% SVA；另一組待細(xì)胞生長(zhǎng)約90%時(shí)，棄去營(yíng)養(yǎng)液，異步接種1% SVA，加入MEM維持液（含2%新生牛血清）；設(shè)健康細(xì)胞作對(duì)照。接毒后細(xì)胞放37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)12 h后每3 h觀察一次，18 h后每3 h、每組隨機(jī)收獲2瓶，直至30 h，收獲后反復(fù)凍融2次，測(cè)定TCID50。2.2 不同細(xì)胞濃度培養(yǎng)同時(shí)收獲對(duì)比試驗(yàn) 將長(zhǎng)滿(mǎn)致密單層的BHK-21細(xì)胞消化后，按1:2
福建畜牧獸醫(yī) 2021年5期2021-10-03
- 豬圓環(huán)病毒2型培養(yǎng)工藝比較研究
毒+氨糖組：細(xì)胞傳代接毒基本同C組，在培養(yǎng)至48 h棄營(yíng)養(yǎng)液后，加入含3 mmol/L D-氨基葡萄糖、30 mL/L無(wú)豬圓環(huán)病毒污染的新生牛血清的細(xì)胞維持液繼續(xù)培養(yǎng)36 h～48 h，凍融收獲細(xì)胞及培養(yǎng)液。④帶毒傳代組：將擴(kuò)大培養(yǎng)的細(xì)胞，加入0.2 g/L EDTA、0.5 g/L胰酶消化液，37℃作用5 min～8 min，消化分散均勻。用含80 mL/L無(wú)豬圓環(huán)病毒污染的新生牛血清的MEM細(xì)胞生長(zhǎng)液制備成每毫升約2×105個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液。按細(xì)胞生長(zhǎng)
動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 2021年4期2021-04-06
- 非洲豬瘟病毒細(xì)胞傳代致弱株研究進(jìn)展
可以在細(xì)胞上繁殖傳代[1-3]。早期研究就已發(fā)現(xiàn)，分離強(qiáng)毒株在細(xì)胞上連續(xù)傳代后再次接種豬不再出現(xiàn)典型的臨床癥狀，而且這些豬可以經(jīng)受住同源強(qiáng)毒株的攻擊[3]。但后期的一些研究卻發(fā)現(xiàn)，某些毒株在傳代細(xì)胞系連續(xù)傳代后雖然毒力減弱，卻不能提供同源保護(hù)[4]。同時(shí)，不同ASFV在不同細(xì)胞上的適應(yīng)性傳代結(jié)果并不相同。面對(duì)上述進(jìn)展，國(guó)內(nèi)尚無(wú)專(zhuān)業(yè)材料進(jìn)行論述，因此本文將對(duì)國(guó)際上ASFV細(xì)胞傳代致弱毒株相關(guān)研究進(jìn)行整理，分析其傳代致弱規(guī)律，從而為我國(guó)ASFV細(xì)胞適應(yīng)株研究及
中國(guó)動(dòng)物檢疫 2021年6期2021-03-28
- DMEM 和F- 12K 對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG- 2 的影響
1.2.1 細(xì)胞傳代待細(xì)胞生長(zhǎng)至培養(yǎng)皿的80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代。棄上清，用1mlPBS 清洗兩次，棄PBS，加1ml 胰酶后放置在培養(yǎng)箱中37℃消化1min，鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變圓后棄胰酶，加2ml 培養(yǎng)液用移液槍沖刷并收集細(xì)胞。將上述的2ml 混有細(xì)胞的培養(yǎng)液向兩個(gè)空皿中各加入1ml，再將培養(yǎng)液補(bǔ)足至7ml，輕微振蕩后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1.2.2 細(xì)胞換液棄上清，用1mlPBS 清洗兩次，棄PBS，將培養(yǎng)液補(bǔ)足至7ml，輕微振蕩后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。圖11
科學(xué)技術(shù)創(chuàng)新 2021年7期2021-03-23
- 母系肥胖通過(guò)miR-27a-3p增加子代肝細(xì)胞癌的發(fā)病率
代脂肪肝病變發(fā)生傳代性累積，但目前領(lǐng)域內(nèi)尚不清楚母系肥胖是否會(huì)影響子代HCC的發(fā)生發(fā)展。因此，本研究設(shè)計(jì)有關(guān)實(shí)驗(yàn)旨在研究這其中的聯(lián)系及其潛在機(jī)制。在實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)前期建立的小鼠高脂飲食誘導(dǎo)的三代肥胖模型中，用二乙基亞硝胺誘發(fā)HCC，并進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序以確定子代中基因和microRNA的變化。利用細(xì)胞系和裸鼠模型評(píng)估了miR-27a-3p-Acsl1/Aldh2軸在HCC中的作用，并利用孕鼠及其后代研究了該調(diào)控軸對(duì)代間的影響。在高脂飲食刺激下，母系肥胖導(dǎo)致子代更易患
臨床肝膽病雜志 2020年10期2020-12-13
- 兩株自篩酵母衰退性對(duì)葡萄酒發(fā)酵原酒品質(zhì)的影響
的，而是經(jīng)過(guò)連續(xù)傳代逐漸變化的[4]，除了連續(xù)傳代以外，不適宜的培養(yǎng)和保藏條件也是加速菌種衰退的一個(gè)重要原因[5]。因此，菌種保藏的基本手段是采用低溫、干燥、冷凍或隔氧等方法來(lái)中止菌種繁殖，降低代謝強(qiáng)度，使之處于休眠狀態(tài)[6-7]。適合葡萄酒自篩酵母的保存方法有很多，如斜面低溫保藏法、液體石蠟保藏法、液體甘油保藏法等[8-9]。工廠由于設(shè)備和技術(shù)等條件的限制，最常用的菌種保藏方法是斜面低溫保藏法，此法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，不需特殊設(shè)備，能隨時(shí)檢查所保藏的菌株是
釀酒科技 2020年9期2020-11-02
- 異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)脊髓組織 細(xì)胞系的建立及對(duì)CyHV-2 的敏感性*
胞系中進(jìn)行連續(xù)的傳代(馬杰等， 2016)， 比如胖頭鯉細(xì)胞(fathead minnow cells， FHM) (Junget al， 1995)、鯉魚(yú)上皮瘤細(xì)胞(epithelioma papulosum cyprini， EPC)、草魚(yú)卵巢細(xì)胞(grass carp ovary， CO)、草 魚(yú) 腎 細(xì) 胞(grass carp kidney， CIK)均對(duì)CyHV-2 不敏感， 僅錦鯉鰭細(xì)胞(koi fin， KF-1)能產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE
海洋與湖沼 2020年5期2020-10-14
- 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離方法的改良與比較*
的分離效率較低，傳代時(shí)間較久。2019年9—11月，本研究對(duì)胰蛋白酶消化合并細(xì)胞刮刮取法的分離培養(yǎng)方法進(jìn)行探索，改進(jìn)了傳統(tǒng)的分離方法，以期在較短的時(shí)間內(nèi)獲得更多數(shù)量的BMSCs，為BMSCs進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供參考。1 材料與方法1.1 一般材料1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)雄性SD大鼠9只，體重(200±15)g，由昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物部提供；取材過(guò)程符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。1.1.2 主要試劑及儀器 胎牛血清(FBS)、培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液(PBS)、青鏈霉素、
廣東醫(yī)學(xué) 2020年14期2020-08-17
- 液體發(fā)酵高產(chǎn)納豆激酶菌株的復(fù)合誘變選育
的突變株，經(jīng)8次傳代后5株菌液體發(fā)酵產(chǎn)NK活性分別達(dá)到了1 846.15、1 956.48、2 184.32、1 865.38和2 095.23U/mL，是復(fù)合誘變出發(fā)菌株的1.62、1.81、1.98、1.61、1.62倍，為液體發(fā)酵生產(chǎn)NK的工業(yè)化奠定了良好的基礎(chǔ).1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料1.1.1 菌種 本實(shí)驗(yàn)所用NK 生產(chǎn)菌株，為實(shí)驗(yàn)室保藏的菌株和市售豆豉、黃豆醬和豆腐乳中篩選的產(chǎn)NK菌株.1.1.2 主要試劑 牛纖維蛋白原、凝血酶和標(biāo)準(zhǔn)尿激
河南科學(xué) 2020年5期2020-07-04
- 復(fù)方金連菊制劑對(duì)PRRSV、TGEV 體外作用的研究
arc-145 傳代細(xì)胞，PK-15 傳代細(xì)胞，TGEV 均為廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所病毒研究室提供。1.1.3 主要試劑DMEM培養(yǎng)基、1640培養(yǎng)基、小牛血清、胰蛋白酶（0.25%）、NaHCO3、雙抗（青霉素80 萬(wàn)單位、鏈霉素80 單位）1.2 方法（1） PRRSV、TGEV 病毒毒力測(cè)定（TCID50）。按殷震[6]方法、馮曉巍[3]方法將Marc-145 傳代細(xì)胞進(jìn)行消化傳代，細(xì)胞數(shù)調(diào)整至2×105個(gè)/ml，加到96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，100u
中國(guó)畜禽種業(yè) 2020年6期2020-07-02
- PK15細(xì)胞的無(wú)血清全懸浮馴化研究
大、放大倍數(shù)大、傳代方便等優(yōu)勢(shì)，但是對(duì)攪拌和氣體的剪切力非常敏感，對(duì)反應(yīng)器的結(jié)構(gòu)有較高的要求。無(wú)血清培養(yǎng)是通過(guò)用已知的人源或者動(dòng)物源的蛋白或生長(zhǎng)因子、激素來(lái)代替動(dòng)物血清的一種培養(yǎng)方式，可減少后期純化工作的難度，提高產(chǎn)品質(zhì)量[7]。本研究對(duì)一株貼壁的PK15進(jìn)行了無(wú)血清的全懸浮馴化，以期為大規(guī)模培養(yǎng)豬圓環(huán)2型病毒提供理論依據(jù)。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 細(xì)胞和毒株 PK15細(xì)胞(豬圓環(huán)病毒1型陰性、豬肺炎支原體陰性)由大北農(nóng)動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究中心保存。1
中國(guó)獸藥雜志 2019年9期2019-10-14
- UL46基因移碼突變對(duì)PRV毒力的影響
ro細(xì)胞上40℃傳代培養(yǎng)120代后，獲得了1株高度適應(yīng)Vero細(xì)胞的毒株（JS-2012-F120株），該毒株病毒滴度明顯提高，對(duì)豬和小鼠的毒力減弱[2]。測(cè)序結(jié)果顯示，在傳代過(guò)程中病毒基因組有多處基因缺失和突變[3]。gE是PRV主要的毒力基因，高溫傳代弱毒株（JS-2012-F120株）的gE至US2基因區(qū)域2307個(gè)堿基缺失被認(rèn)為是PRV毒力減弱的主要因素[2]。另外，UL46基因在1796位有29個(gè)堿基插入導(dǎo)致基因移碼突變，使3'端130個(gè)氨基酸突
中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào) 2019年4期2019-09-06
- 人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1細(xì)胞培養(yǎng)方法的改良
ANC-1細(xì)胞的傳代1）準(zhǔn)備器械和試劑，常規(guī)消毒；2）鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和匯合度，一般于匯合度80%左右進(jìn)行傳代；3）常規(guī)洗滌、胰酶消化細(xì)胞；4）利用消化的間隙，在新培養(yǎng)皿中加入培養(yǎng)液，作好標(biāo)記；5）鏡下觀察細(xì)胞脫落和離散；6）將原培養(yǎng)皿內(nèi)細(xì)胞懸液，平均分配于新培養(yǎng)皿中；震蕩混勻后放37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育。3.結(jié)果從2016年8月-2017年9月，本課題組共復(fù)蘇PANC-1細(xì)胞11次，傳代19次，見(jiàn)圖。圖 傳統(tǒng)方法和改良方法對(duì)比圖細(xì)胞傳統(tǒng)復(fù)蘇到傳代
醫(yī)藥前沿 2019年11期2019-05-23
- 菌種超低溫保存法與人工傳代法的比較
[1-2]。人工傳代法的操作雖簡(jiǎn)單，但費(fèi)時(shí)、費(fèi)工、效率低，且反復(fù)傳代會(huì)增加菌種污染的機(jī)會(huì)。因而尋求一種簡(jiǎn)單易行、較長(zhǎng)期有效的菌種保存方法一直是實(shí)驗(yàn)室研究的熱點(diǎn)和所期望的目標(biāo)。本文對(duì)超低溫法（-80 ℃）與人工傳代法保存菌種的效果，結(jié)合文獻(xiàn)資料進(jìn)行了比較觀察，其中超低溫法（-80 ℃）采用兩種方法保存，菌種保存液法及瓷珠菌種保存管法，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。1 材料與方法1.1 保存菌的菌種名錄本研究共使用的15種菌種，分別購(gòu)自廣東省微生物研究所菌種保藏中心及美國(guó)
現(xiàn)代食品 2018年21期2019-01-14
- 有關(guān)擬南芥高溫記憶的表觀遺傳機(jī)制研究取得重要進(jìn)展
維持植物對(duì)高溫的傳代記憶的新機(jī)制。通過(guò)生物化學(xué)、分子生物學(xué)和遺傳學(xué)相結(jié)合的方法，該研究鑒定出一個(gè)F-box泛素連接酶SGIP1（SGS3-INTERACTING PROTEIN1） 參與降解SGS3蛋白。高溫對(duì)SGIP1的上調(diào)表達(dá)同樣具有傳代記憶。對(duì)傳代記憶機(jī)制的深入研究結(jié)果表明，高溫能激活熱激轉(zhuǎn)錄因子HEAT SHOCK TRANSCRIPTION FACTOR A2 (HSFA2)。HSFA2一方面能直接結(jié)合SGIP1啟動(dòng)子上的熱激轉(zhuǎn)錄元件從而激活SG
蔬菜 2019年3期2019-01-04
- 牦牛病毒性腹瀉病診斷與病毒分離鑒定
驗(yàn)室保存的牦牛腎傳代細(xì)胞，牛病毒性腹瀉病毒陽(yáng)性血清、陰性血清、牛病毒性腹瀉間接免疫熒光檢測(cè)試劑盒3種物品均購(gòu)自于中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。1.2 臨床診斷結(jié)合大通縣某養(yǎng)殖場(chǎng)的實(shí)際發(fā)病情況，對(duì)該養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病牛的臨床癥狀進(jìn)行認(rèn)真仔細(xì)地觀察，結(jié)合養(yǎng)殖場(chǎng)該病的流行情況和患病牛的臨床表現(xiàn)，對(duì)該病做出初步診斷。1.3 試驗(yàn)方法1.3.1 樣品采集采集養(yǎng)殖場(chǎng)某患病牛的鼻腔粘液和糞便，作為臨床實(shí)驗(yàn)室診斷病料，低溫保存帶回實(shí)驗(yàn)室。1.3.2 病毒分離培養(yǎng)與細(xì)胞病變觀察將從患病養(yǎng)殖場(chǎng)
畜牧獸醫(yī)科學(xué) 2018年13期2018-11-19
- 兩株lager啤酒酵母在傳代及自溶過(guò)程中生理性能差異的比較
種操作過(guò)程被稱(chēng)為傳代(serial re-pitching)[1, 3]。在傳代過(guò)程中，酵母細(xì)胞在發(fā)酵結(jié)束時(shí)被收集并用于新一代的接種，而酵母細(xì)胞用于連續(xù)發(fā)酵的次數(shù)，叫做“代數(shù)”。啤酒釀造工業(yè)中，活躍的、年輕的和生理穩(wěn)定的酵母細(xì)胞是生產(chǎn)高質(zhì)量啤酒必不可少的，一些啤酒廠也盡量避免出現(xiàn)傳代次數(shù)過(guò)多的問(wèn)題[4]。啤酒酵母根據(jù)發(fā)酵結(jié)束后酵母細(xì)胞在發(fā)酵液中活動(dòng)的狀態(tài)可分為兩類(lèi)，分別為上面啤酒酵母和下面啤酒酵母。上面啤酒酵母(Saccharomycescerevisia
食品與發(fā)酵工業(yè) 2018年10期2018-11-14
- 非實(shí)驗(yàn)期Jurkat細(xì)胞培養(yǎng)方法探討
是每隔1天行換液傳代[1]或者凍存。最近，細(xì)胞自噬引起關(guān)注。自噬是一種保守的細(xì)胞防御機(jī)制，在一定條件下細(xì)胞自噬能夠維持細(xì)胞的存活[2]。引起細(xì)胞自噬的因素很多，包括血清、葡萄糖、溫度和二氧化碳等。本文將探討室溫中維持Jurkat細(xì)胞非實(shí)驗(yàn)期的培養(yǎng)，并從細(xì)胞自噬方面尋求依據(jù)。1 材料與方法1.1材料 白血病T淋巴細(xì)胞株Jurkat細(xì)胞為培養(yǎng)細(xì)胞，小牛血清購(gòu)于杭州四季青生物工程材料有限公司；RPMI1640培養(yǎng)基 （含青霉素100U/mL，鏈霉素100μg/m
浙江實(shí)用醫(yī)學(xué) 2017年6期2018-01-30
- 中國(guó)乙型腦炎病毒株的毒力變異和減毒活疫苗的研究
同鼠齡以不同途徑傳代的毒力變異研究，結(jié)果顯示在鼠腦傳代過(guò)程中，皮下毒力隨著傳代次數(shù)的遞增而下降，降低的速度又與傳代用小鼠的鼠齡密切關(guān)系。即鼠齡越大，腦內(nèi)傳代后皮下毒力下降越快，下降幅度越大。如將A2株在7日齡、3周、5周和1年齡小鼠的腦內(nèi)傳代時(shí)，經(jīng)7日乳鼠腦內(nèi)傳代的病毒到145代時(shí)，才可見(jiàn)毒力明顯下降，在3周小鼠腦內(nèi)傳代的病毒，到113代后，皮下毒力已下降到4.5lg LD50，在5周鼠腦內(nèi)傳代時(shí)到113代后皮下毒力已下降至1.0～1.3lg LD50，而
中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志 2018年5期2018-01-17
- IBDV超強(qiáng)毒株NJ09株在DF—1細(xì)胞上的增殖工藝
105個(gè)/mL）傳代培養(yǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)36～48 h后按體積分?jǐn)?shù)0.1%～0.2%接種IBDV NJ09株毒種，接毒后 36～48 h收毒；同時(shí)篩選出適宜IBDV NJ09株病毒增殖的MD611培養(yǎng)基及小牛血清，既可以滿(mǎn)足高滴度抗原增殖的生長(zhǎng)需要，又降低了疫苗生產(chǎn)成本，形成了適用于規(guī)?；a(chǎn)的抗原接種、收獲、處理工藝技術(shù)指標(biāo)，按上述工藝所增殖的IBDV NJ09株抗原病毒含量穩(wěn)定在108.0 TCID50/mL以上，可滿(mǎn)足含IBDV組分的系列滅活疫苗生產(chǎn)需要，
江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年17期2017-11-15
- 豬瘟疫苗（傳代細(xì)胞源）生產(chǎn)工藝研究
69）豬瘟疫苗（傳代細(xì)胞源）生產(chǎn)工藝研究禮 穎，王春雪（哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）豬瘟是一種傳染性疾病，是目前危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的主要疫病之一。由豬瘟病毒引起，因其流行廣、發(fā)病率及死亡率高，豬瘟的防控工作也變得越來(lái)越艱巨。接種疫苗是控制豬瘟的主要途徑，試驗(yàn)通過(guò)對(duì)豬瘟傳代細(xì)胞源的工藝優(yōu)化研究，以獲得較好的生產(chǎn)工藝技術(shù)參數(shù)，從而確保提高產(chǎn)品效價(jià)和穩(wěn)定性。ST細(xì)胞；消化；接毒，效價(jià)豬瘟由豬瘟病毒（CSFV）引起，流行廣，發(fā)病率及死亡率較高，
飼料博覽 2017年7期2017-08-29
- 傳代次數(shù)對(duì)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞系生物學(xué)特性的影響
0515基礎(chǔ)研究傳代次數(shù)對(duì)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞系生物學(xué)特性的影響王濟(jì)舟，曾 宇，宋 燁，漆松濤南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院，廣東 廣州 510515目的探索不同傳代次數(shù)對(duì)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞系生物學(xué)特性的影響及其分子機(jī)制。方法以?xún)煞N不同傳代次數(shù)的U87（I）、U87（II）為研究對(duì)象，使用MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)及Boyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)U87細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力；使用Western Blot技術(shù)檢測(cè)U87（Ⅰ）及U87（Ⅱ）的
分子影像學(xué)雜志 2017年2期2017-07-03
- 豬瘟活疫苗(傳代細(xì)胞源)免疫產(chǎn)生期和免疫持續(xù)期試驗(yàn)
3)豬瘟活疫苗(傳代細(xì)胞源)免疫產(chǎn)生期和免疫持續(xù)期試驗(yàn)任向陽(yáng)1，2, 吳文福1, 岑小清1，游啟有1, 劉秋燕1，賴(lài)月輝1，黃秋雪1(1.廣東永順生物制藥股份有限公司，廣東廣州511356 ； 2.廣州出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東廣州510623)將三批豬瘟活疫苗(傳代細(xì)胞源)以單劑量分別接種仔豬進(jìn)行免疫產(chǎn)生期試驗(yàn)。在免疫同時(shí)以及免后1、2、3、4、5日連同對(duì)照組分別攻擊豬瘟強(qiáng)毒，攻毒后觀察16天，結(jié)果表明，豬瘟活疫苗(傳代細(xì)胞源)免后4日即可產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的免疫保護(hù)
中國(guó)獸醫(yī)雜志 2017年4期2017-06-29
- 防治食用菌種老化“六步”
2.嚴(yán)格控制菌種傳代次數(shù)，減少機(jī)械損傷，保證菌種活力。3.在適當(dāng)?shù)臏囟缺４婢N：低溫型菌種如蘑菇、香菇等，在4℃有利于保存菌絲體活力；高溫型菌種如草菇，在16℃有利于保存菌絲體活力。4.避免在單一培養(yǎng)基中多次傳代；菌種不宜過(guò)長(zhǎng)時(shí)間使用，超齡菌種會(huì)出現(xiàn)老化，而老化與退化是有機(jī)相連的，生活力弱的菌種容易出現(xiàn)退化。5.菌種要定期進(jìn)行復(fù)壯，在適溫、合適酸堿度、充足氧量、無(wú)雜菌培養(yǎng)等條件下進(jìn)行。6.每年進(jìn)行孢子分離，以有性繁殖來(lái)發(fā)現(xiàn)優(yōu)良菌株，以組織分離來(lái)鞏固優(yōu)良菌株
農(nóng)家之友 2017年3期2017-03-27
- 微生物實(shí)驗(yàn)室菌種復(fù)蘇傳代保存流程分析
實(shí)驗(yàn)室菌種復(fù)蘇、傳代、保存體系是一件非常重要的事情，從而促進(jìn)我國(guó)微生物實(shí)驗(yàn)精確度提升，增強(qiáng)相關(guān)工程管理質(zhì)量的規(guī)范程度，為我國(guó)醫(yī)藥行業(yè)發(fā)展及生產(chǎn)質(zhì)量提高創(chuàng)造良好的條件。關(guān)鍵詞：菌種復(fù)蘇；傳代；保存微生物實(shí)驗(yàn)是我國(guó)建筑醫(yī)藥研發(fā)及生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，是確保我國(guó)醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵基礎(chǔ)。根據(jù)藥典中的標(biāo)準(zhǔn)，微生物實(shí)驗(yàn)室對(duì)于新引進(jìn)的培養(yǎng)基需要通過(guò)靈敏度測(cè)試后才能投入使用；另外，在對(duì)無(wú)菌實(shí)驗(yàn)成果進(jìn)行檢查時(shí)需要使用金黃色葡萄球菌作為對(duì)比參照，而在對(duì)日常灌裝環(huán)境質(zhì)量檢測(cè)時(shí)需要
科學(xué)與財(cái)富 2016年32期2017-03-04
- 豬藍(lán)耳病活疫苗生產(chǎn)工藝探索
細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)的傳代比例、培養(yǎng)液血清濃度、毒種繁殖時(shí)的接毒量、培養(yǎng)液體積、病毒原液收獲時(shí)間、半成品原液保存溫度及保存時(shí)間等幾方面參數(shù)對(duì)原液的病毒效價(jià)的影響，展開(kāi)對(duì)比試驗(yàn)，最終確定最佳參數(shù)，為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（HuN4-F112株）的大批量生產(chǎn)提供參考，不但要保障疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量，更要大大降低疫苗的生產(chǎn)成本和生產(chǎn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度。一、試驗(yàn)方案（一）確定Marc-145細(xì)胞傳代比率試驗(yàn)。將長(zhǎng)滿(mǎn)單層的Marc-145細(xì)胞棄去營(yíng)養(yǎng)液，用分散液分散后按1
獸醫(yī)導(dǎo)刊 2016年21期2016-11-24
- AKT-mTOR信號(hào)通路在大鼠椎間盤(pán)軟骨終板細(xì)胞自然退變中的意義
胞，建立體外自然傳代退變模型。隨機(jī)分為空白對(duì)照組(自然傳代第2代細(xì)胞)，自然退變組(自然傳代第5代細(xì)胞)、AKT-mTOR信號(hào)通路抑制組(含LY294002抑制劑培養(yǎng)基傳代至第5代)，AKT-mTOR信號(hào)通路激動(dòng)組(含IGF-1激動(dòng)劑培養(yǎng)基傳代至第5代)。倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)；甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞蛋白聚糖變化；RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中Ⅱ型膠原、蛋白多糖、SOX9以及AKT-mTOR信號(hào)通路中關(guān)鍵基因mTOR的表達(dá)情況；Western印跡檢測(cè)AKT、p
中國(guó)老年學(xué)雜志 2016年15期2016-10-26
- 豬瘟傳代細(xì)胞活疫苗、口蹄疫和高致病性豬藍(lán)耳病聯(lián)合免疫效果試驗(yàn)研究
獸醫(yī)科學(xué)院）豬瘟傳代細(xì)胞活疫苗、口蹄疫和高致病性豬藍(lán)耳病聯(lián)合免疫效果試驗(yàn)研究周建國(guó)1，張應(yīng)國(guó)1，楊余山1，段博芳1，李志明2，夏九仙2，楊品3，元正菊4（1.云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南昆明 650201；2昆明市西山區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心；3.昆明市富民縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心；4.云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院）為評(píng)估豬瘟傳代細(xì)胞活疫苗在豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病和口蹄疫三種疫苗同步兩點(diǎn)免疫新技術(shù)（即“321”免疫新技術(shù)）應(yīng)用中的免疫效果，特進(jìn)行本試驗(yàn)。1 材料與
中獸醫(yī)學(xué)雜志 2016年4期2016-09-20
- 針對(duì)代次較多的3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化法的改良
; 誘導(dǎo)分化; 傳代次數(shù)小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-L1在特定的誘導(dǎo)條件下，可以分化為成熟的脂肪細(xì)胞，因此，3T3-L1常被作為研究與脂肪相關(guān)疾病(肥胖、糖尿病等)的模型細(xì)胞，而誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞是開(kāi)展上述研究的前提。本實(shí)驗(yàn)室的3T3-L1已被傳代10次左右，用經(jīng)典方法誘導(dǎo)時(shí)也遇到了細(xì)胞卷邊和收縮嚴(yán)重的問(wèn)題。結(jié)合上述報(bào)道的內(nèi)容，我們適當(dāng)改良了經(jīng)典誘導(dǎo)方法，該方法適用于多次傳代的3T3-L1的誘導(dǎo)。1 材料與方法1.1材料小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-
實(shí)驗(yàn)科學(xué)與技術(shù) 2016年4期2016-09-18
- 改良組織塊法培養(yǎng)C57BL/6小鼠胰腺星狀細(xì)胞
原代PSCs，并傳代。采用油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴變化，采用細(xì)胞免疫法及蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)細(xì)胞α-SMA、Desmin表達(dá)。結(jié)果貼壁4 d的原代PSCs多呈橢圓形或星形，胞質(zhì)內(nèi)大量脂滴，表達(dá)α-SMA及Desmin蛋白的細(xì)胞少；傳代后細(xì)胞變大、偽足豐富，脂滴減少或消失，原代、傳代PSCs的α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量分別為0.653±0.071、2.290±0.055，傳代細(xì)胞的表達(dá)顯著高于原代細(xì)胞(P組織培養(yǎng)技術(shù)；胰腺星形細(xì)胞；細(xì)胞分離；體外研究胰腺的進(jìn)行性纖
中華胰腺病雜志 2016年1期2016-09-08
- 改良Frey氏液體培養(yǎng)基質(zhì)控菌株菌種代次與生長(zhǎng)曲線研究
質(zhì)控；菌種代次；傳代支原體污染是生物制品常見(jiàn)的污染源，給科研、疫苗生產(chǎn)及生物制品產(chǎn)業(yè)帶來(lái)許多麻煩，《美國(guó)藥典》、《歐洲藥典》及《中國(guó)獸藥典》二〇一〇年版三部中均有使用培養(yǎng)法進(jìn)行生物制品支原體檢查的專(zhuān)題論述[1-3]，《中國(guó)獸藥典》二〇一〇年版三部規(guī)定滑液支原體、豬鼻支原體分別為支原體檢驗(yàn)用培養(yǎng)基支原體改良Frey氏培養(yǎng)基、支原體培養(yǎng)基質(zhì)控菌株[3]。通過(guò)測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)段的CCU，繪制出的MS生長(zhǎng)曲線表明：其遲緩期為培養(yǎng)后6 h內(nèi)，對(duì)數(shù)期為6～36 h，穩(wěn)定
中國(guó)獸藥雜志 2016年1期2016-02-07
- 大腸桿菌對(duì)環(huán)丙沙星和恩諾沙星的敏感性恢復(fù)
復(fù)的差異以及細(xì)菌傳代、營(yíng)養(yǎng)因素和耐藥菌比例對(duì)敏感性恢復(fù)的影響。1 材料與方法1.1 菌株、藥品和培養(yǎng)基菌株：耐藥大腸桿菌D600、野生型大腸桿菌D549（敏感菌株），由貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院基礎(chǔ)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室提供；質(zhì)控菌株為大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC25922，購(gòu)自中國(guó)獸藥監(jiān)察所。藥品：環(huán)丙沙星、恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)于上海盛思生化科技有限公司。培養(yǎng)基：LB肉湯、米勒－海頓肉湯（MHB），購(gòu)于上海博微生物科技有限公司。1.2 藥物的最小抑菌濃度（MIC）測(cè)定參照美
貴州農(nóng)業(yè)科學(xué) 2015年6期2015-07-01
- 小鼠和奶牛乳腺上皮細(xì)胞的分離及培養(yǎng)特性比較
種細(xì)胞的體外培養(yǎng)傳代和凍存復(fù)蘇試驗(yàn)，對(duì)比了MMECs和BMECs的分離、培養(yǎng)方法、生長(zhǎng)特性、細(xì)胞傳代和復(fù)蘇性狀，為選擇及建立合適的MMECs和BMECs體外模型，以及開(kāi)展乳腺相關(guān)功能研究提供參考。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 妊娠后期SPF 昆明鼠購(gòu)自湖北省疾病控制中心，泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺組織采自湖北省某獸醫(yī)站。1.1.2 主要試劑及耗材 膠原酶（Collagenase）Ⅰ和Ⅱ?yàn)镾olarbio公司產(chǎn)品；2.5g／L 胰蛋白酶－0.2
動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 2015年12期2015-06-11
- 支原體培養(yǎng)基質(zhì)控菌株菌種代次與生長(zhǎng)曲線研究
了不同代次與不同傳代方式豬鼻支原體生長(zhǎng)情況。結(jié)果顯示：3%與10%濃度傳代，0～48 h內(nèi)，活菌濃度持續(xù)上升，菌液pH值持續(xù)下降，3%濃度傳代的支原體生長(zhǎng)較均勻，更利于菌種生長(zhǎng)；1～5代支原體活菌濃度無(wú)顯著差異；通過(guò)0.3 mL菌液加9.7 mL培養(yǎng)基傳代，20組菌液平均濃度為(24.4±5.7)×108CFU/mL，通過(guò)0.9 mL菌液加29.1 mL培養(yǎng)基傳代，菌液平均濃度為(7.2±2.1)×108CFU/mL，兩種濃度差異極顯著，前種傳代方式更有利
中國(guó)獸藥雜志 2015年8期2015-03-13
- 雞傳染性法氏囊病病毒弱毒株在雞體連續(xù)傳代后毒力增強(qiáng)的分子機(jī)理研究
SPF雞體內(nèi)連續(xù)傳代，發(fā)現(xiàn)弱毒株在雞體內(nèi)傳代后囊體比大幅度下降，表明IBDV弱毒株在SPF雞體內(nèi)連續(xù)傳代后毒力返強(qiáng)。為進(jìn)一步研究弱毒株及其雞體傳代毒毒力變化與基因的關(guān)系，本試驗(yàn)測(cè)定了基礎(chǔ)弱毒株及其雞體傳代毒的基因組編碼區(qū)序列，并對(duì)其進(jìn)行比較分析，以期從分子水平上為該病毒毒力相關(guān)位點(diǎn)的研究提供依據(jù)。1 材料與方法1.1 毒株、菌株和載體 IBDV弱毒株A、弱毒株B由本實(shí)驗(yàn)室保存；大腸桿菌JM109感受態(tài)細(xì)胞、pGEM－T載體均購(gòu)于promega公司。21日齡
中國(guó)獸藥雜志 2014年5期2014-05-29
- 1型鴨甲肝病毒LY0801株VP1基因在鴨胚傳代中的變異規(guī)律研究
VP1基因在鴨胚傳代中的變異規(guī)律研究馬明杰，郭翠平，焦玉祥，呂佳泓，孫 振，張瑞華，陳君豪，謝之景，姜世金（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 山東省動(dòng)物生物工程與疾病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，泰安 271018）為了解1型鴨甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 1）VP1基因在鴨胚傳代中的變異規(guī)律，本研究將LY0801株DHAV-1在鴨胚體內(nèi)傳代至30代，分別對(duì)1～5、10、15、20、25、30代病毒進(jìn)行VP1基因的克隆測(cè)序。各代次病毒分別以10
中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào) 2014年5期2014-04-13
- 金黃色葡萄菌球菌毒力基因在傳代過(guò)程中的穩(wěn)定性
菌球菌毒力基因在傳代過(guò)程中的穩(wěn)定性孫美英，何劍斌?（沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110866）為了解分離自奶牛乳房炎的金黃黃葡萄球菌（Staphylococcus aureus）毒力基因在傳代過(guò)程中的穩(wěn)定性，對(duì)傳代前后金黃色葡萄球菌的毒力和毒力基因進(jìn)行測(cè)定和檢測(cè)。本研究采用急性毒性試驗(yàn)的方法測(cè)定8株金黃色葡萄球菌原代、第5代、第10代、第15代、第20代及第25代的菌株對(duì)小鼠的半數(shù)致死量，通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)原代、第5代、第10代、1
現(xiàn)代畜牧獸醫(yī) 2014年2期2014-03-07
- HP-PRRSV原始株在抗體壓下傳代突變株抗原性及致病力變化研究
原始株在抗體壓下傳代突變株抗原性及致病力變化研究范書(shū)金 （山東省聊城市動(dòng)物醫(yī)院 252000） 肖延光 趙愛(ài)民 魏雅茹 王素紅（山東省聊城市畜牧站）為了比較高致病性藍(lán)耳病山東分離株SD0612原始株及其在抗體選擇壓下突變株在回歸豬體后的抗體動(dòng)態(tài)變化，試驗(yàn)中，將15頭健康豬分為5組，分別為SD0612原毒感染組、有抗體條件下第1次傳40代突變株F40感染組及有抗體條件下再次傳40代突變株e40感染組、無(wú)抗體條件下再次傳40代突變株a40感染組及陰性對(duì)照組，分
山東畜牧獸醫(yī) 2013年1期2013-11-26
- 流式細(xì)胞儀在檢測(cè)系膜細(xì)胞衰老特征中的應(yīng)用
約7 d后第1次傳代，傳代的細(xì)胞24 h全部貼壁，生長(zhǎng)迅速，形態(tài)為梭形或不規(guī)則星形，3～4 d已匯合成片，純度極高，經(jīng)鑒定結(jié)蛋白(Desmin)陽(yáng)性、抗Ⅷ因子抗體陰性，傳代，用于實(shí)驗(yàn)的為第3、5、10 代。1.2.2 衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶活性(SA-β-gal)染色 種于六孔板中的各組細(xì)胞，待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%匯合，用PBS液清洗3次，于室溫固定細(xì)胞5 min，PBS液清洗3次后，加上新配制的含1 mg/ml X-gal的 SA-β-gal染液，置 37℃
中國(guó)老年學(xué)雜志 2013年19期2013-09-12
- 羊睪丸原代細(xì)胞傳代試驗(yàn)
）羊睪丸原代細(xì)胞傳代試驗(yàn)張玉紅，何玉仙，井蓮娜，王玉紅（新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司，新疆 烏魯木齊830011）生產(chǎn)山羊痘活疫苗時(shí)，羊睪丸采集工作量大，易污染，費(fèi)時(shí)費(fèi)事，是否有辦法減少人員外出采集羊睪丸次數(shù)，值得摸索，本實(shí)驗(yàn)將長(zhǎng)成單層的羊睪丸細(xì)胞進(jìn)行傳代，長(zhǎng)成致密單層后進(jìn)行接毒，收獲毒液，并對(duì)毒液及疫苗成品進(jìn)行病毒含量測(cè)定，結(jié)果表明，羊睪丸細(xì)胞完全可以傳一代，細(xì)胞形態(tài)良好，毒液、疫苗成品毒價(jià)均達(dá)到規(guī)程要求，羊睪丸原代細(xì)胞傳代可以大大提高睪丸組織利用率
草食家畜 2013年3期2013-06-05
- 豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源）豬瘟病的克星
出了豬瘟活疫苗（傳代細(xì)胞源），即一般所稱(chēng)的“豬瘟傳代細(xì)胞苗”，簡(jiǎn)稱(chēng)豬瘟ST苗。豬瘟傳代細(xì)胞苗是一種優(yōu)質(zhì)高效的新型疫苗，它具有高度不易污染外源病毒而特別安全、高效、無(wú)應(yīng)激、價(jià)格合理等特點(diǎn)。研究人員預(yù)測(cè)豬瘟傳代苗將在未來(lái)豬瘟的預(yù)防控制方面起重要作用。近年來(lái)，我國(guó)不少地方豬瘟疫情呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。豬群豬瘟帶毒或隱性感染十分普遍，豬瘟流行呈現(xiàn)典型豬瘟和非典型豬瘟共存、混合感染或繼發(fā)感染頻繁出現(xiàn)的特點(diǎn)，母豬繁殖障礙和新生仔豬先天性感染等疫病嚴(yán)重威脅我國(guó)的養(yǎng)豬生產(chǎn)安全。
四川畜牧獸醫(yī) 2013年9期2013-04-08
- 腦癱患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)特性分析
。1.3 原代及傳代細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)特征及細(xì)胞增長(zhǎng)速率計(jì)算 原代細(xì)胞一般在分離后6～9 d傳代1次，P1以后于細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到覆蓋培養(yǎng)皿的60% ～80%后予1∶2或1∶3傳代。從第2代以后，每次傳代時(shí)行hMSCs鑒定:棄去上清，用PBS清洗2次，滴加0.05%的Trypsin-EDTA胰酶消化，顯微鏡下觀察細(xì)胞觸角收縮，細(xì)胞變成圓形后，添加培養(yǎng)基終止消化，制成(1～3)×106/mL的細(xì)胞懸液分裝于不同培養(yǎng)皿中，3～4 d根據(jù)培養(yǎng)基顏色換液。流式細(xì)胞儀檢測(cè)示CD
山東醫(yī)藥 2012年23期2012-08-05
- 保藏過(guò)程中乳酸菌發(fā)酵菌種的選擇
菌種在保藏期間的傳代實(shí)驗(yàn)，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析比較可得出，在沒(méi)有特殊要求的情況下，乳酸菌菌種的保藏最好是使用保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的混合菌種，這樣可以大大降低乳酸菌菌種在保藏期內(nèi)的特性變化。保加利亞乳桿菌，嗜熱鏈球菌，傳代培養(yǎng)導(dǎo)致菌種活性退化的原因是多方面的，而且活性退化是絕對(duì)的，不可避免的。為了保持菌種優(yōu)良性狀的穩(wěn)定性，應(yīng)盡量減少或降低退化速度[1]，但是在實(shí)際的生產(chǎn)過(guò)程中，菌種的傳代是不可避免的。Tamine、馬鋼等認(rèn)為嗜熱鏈球菌與保加利亞乳桿菌單
食品工業(yè)科技 2011年10期2011-10-25
- RT-SHIV感染中國(guó)恒河猴及體內(nèi)傳代
中國(guó)恒河猴及體內(nèi)傳代姚 南1，王 衛(wèi)1，叢 喆1，陳 霆1，金 光1，陶 真1，陳志偉2，魏 強(qiáng)1(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，衛(wèi)生部人類(lèi)疾病比較醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家中醫(yī)藥管理局人類(lèi)疾病動(dòng)物模型三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，北京 100021;2.香港大學(xué)李嘉誠(chéng)醫(yī)學(xué)院艾滋病研究所，香港 999077)目的 了解RT-SHIV感染中國(guó)恒河猴的感染特點(diǎn)，研究 RT-SHIV在中國(guó)恒河猴中傳代特點(diǎn);建立RT-SHIV中國(guó)恒河猴動(dòng)物模型，為評(píng)價(jià)HIV-1藥物有效性提供動(dòng)物
中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志 2011年4期2011-10-19
- SLE患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究
0%融合時(shí)，則可傳代。用0.5%胰酶/乙二胺四乙酸(EDTA)(Gibco，美國(guó))消化貼壁細(xì)胞，收集細(xì)胞并懸浮于完全培養(yǎng)液中，按104/cm2的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，置37℃、5%CO2飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每3～4天更換1次培養(yǎng)液，約1周待細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)90%左右時(shí)，進(jìn)行再次傳代。1.3 MTT法檢測(cè)MSC的生長(zhǎng)情況 MTT比色法檢測(cè)SLE患者第2代MSC的生長(zhǎng)情況，作傳代細(xì)胞培養(yǎng)的生長(zhǎng)曲線分析。1.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MSC表面分子的表達(dá) 細(xì)胞培養(yǎng)
中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥 2011年29期2011-08-13
- 豬瘟活疫苗的田間免疫效果試驗(yàn)
淋組織疫苗和ST傳代細(xì)胞苗。牛睪丸細(xì)胞苗由于使用原代細(xì)胞培養(yǎng)，批間差異較大；病毒培養(yǎng)液中病毒含量不高；再加上牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）的污染，對(duì)疫苗的穩(wěn)定性和純凈性影響極大。兔脾淋組織疫苗是利用兔子組織來(lái)制作疫苗，由于兔的飼養(yǎng)量有限和兔對(duì)豬瘟病毒的敏感性也在下降，這些對(duì)兔脾淋組織疫苗的質(zhì)量和穩(wěn)定性都有較大的影響。ST傳代細(xì)胞疫苗，采用國(guó)際認(rèn)證的同源傳代ST細(xì)胞培養(yǎng)，批間差異極小，穩(wěn)定性好，病毒培養(yǎng)液中病毒含量高，而且避免了其他病毒污染的威脅，相對(duì)目前其他
中國(guó)豬業(yè) 2010年11期2010-09-12
- 人脂肪組織來(lái)源干細(xì)胞生物學(xué)特性研究
積比1∶1）消化傳代.1.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察使用倒置顯微鏡（IX70－131，OLYMPUS）觀察細(xì)胞生長(zhǎng)，并對(duì)傳代貼壁生長(zhǎng)在培養(yǎng)瓶中的脂肪干細(xì)胞的生長(zhǎng)、純化情況及增殖進(jìn)行連續(xù)觀察、攝像.1.3 細(xì)胞增殖動(dòng)力學(xué)分析將第4代ADSC以不同密度6.25×104、1.25×105、2.50×105、5.00×105、1.00×106和2.00×106cells/m L種于96孔板內(nèi)，獲得細(xì)胞密度與光密度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線.以5.00×103cells/m L的密度接種
大連理工大學(xué)學(xué)報(bào) 2010年5期2010-06-05
- 山羊原始生殖細(xì)胞分離與培養(yǎng)的影響因素
GCs進(jìn)行培養(yǎng)和傳代，從而得到ESCs，將其在不同的條件下培養(yǎng)，初步分析了各種不同條件對(duì)培養(yǎng)效果的影響。1 材料與方法1.1 材料試劑：高糖DMEM、非必需氨基酸（non-essential amino acid）：Gibco 公司；LIF、SCF：Sigam 公司；胎牛血清（FBS）：杭州四季青公司；L-谷氨酰胺（L-glutamine）、胰蛋白酶（trypsinase）、牛血清白蛋白（BSA）、膠原酶（collagenase）：上海生工生物工程有限公司
中國(guó)草食動(dòng)物科學(xué) 2010年5期2010-06-04