微柱凝膠技術(shù)與凝聚胺技術(shù)檢測對ABO新生兒溶血病輸血情況的影響

【摘要】 目的 分析微柱凝膠技術(shù)與凝聚胺技術(shù)檢測對ABO新生兒溶血?。╤emolytic disease of the newborn，HDN）輸血情況的影響。方法 選取福建省建甌市市立醫(yī)院在2023年1—12月收治的36例接受檢驗的ABO-HDN患兒樣本進行分析，開展血液配血實驗，采用微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)，觀察檢查結(jié)果并比較2種配血技術(shù)的效果。結(jié)果 經(jīng)過3項檢測結(jié)果確認，紅細胞抗體釋放實驗陽性100.00%（36/36），血清游離抗體實驗陽性83.33%（30/36），直接抗人球蛋白實驗陽性52.78%（19/36）。經(jīng)過90次交叉配血，微柱凝膠技術(shù)不合格率低于凝聚胺技術(shù)（P＜0.05）；2種血液交叉配血技術(shù)的檢測結(jié)果對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 微柱凝膠技術(shù)在檢測ABO-HDN輸血情況中的表現(xiàn)更佳，不但準確性高，

而且不合格率顯著低于凝聚胺技術(shù)和放散液技術(shù)，這對于確保輸血安全和準確性具有重要意義。

【關(guān)鍵詞】 微柱凝膠技術(shù)；凝聚胺技術(shù)；新生兒溶血病；輸血

文章編號：1672-1721（2025）01-0036-04" " "文獻標志碼：A" " "中國圖書分類號：R722.18

HDN是一種由于母嬰血型不匹配所導(dǎo)致的嚴重疾病，主要影響新生兒的紅細胞，導(dǎo)致溶血現(xiàn)象。ABO血型不兼容性是HDN的主要原因之一，特別是在亞洲地區(qū)較為常見。早期診斷和治療對HDN的預(yù)后至關(guān)重要[1]。而血清學(xué)檢測方法，比如直接抗球蛋白試驗（direct antiglobulin test，DAT）等，雖然在診斷中發(fā)揮了重要作用，但仍存在一定的局限性，如操作復(fù)雜、耗時長等[2]。近年來，隨著生物醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷進步，微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)作為新型的血型檢測方法，因其高靈敏度、高特異度和操作簡便性而受到廣泛關(guān)注[3]。微柱凝膠技術(shù)通過快速分離微量血液樣本，準確鑒定血型不兼容性。凝聚胺技術(shù)則利用凝聚胺離子增加紅細胞表面的正電荷，促進抗體結(jié)合和細胞凝聚[4]。本研究選取福建省建甌市市立醫(yī)院2023年1—12月收治的36例接受檢驗的ABO-HDN患兒樣本進行分析，對患兒實施微柱凝膠技術(shù)、凝聚胺技術(shù)，觀察微柱凝膠技術(shù)與凝聚胺技術(shù)檢測對ABO新生兒溶血病輸血情況的影響，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取福建省建甌市市立醫(yī)院2023年1—12月收治的36例接受檢驗的ABO-HDN患兒為研究對象，其中男性20例，女性16例；日齡1～15 d，平均（7.65±2.64）d；出生體質(zhì)量1.5～4.6 kg，平均（3.02±0.45）kg。本研究已通過福建省建甌市市立醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準，且符合《赫爾辛基宣言》要求，家屬對本研究知情同意。

1.2 入選標準

納入標準：被診斷為ABO-HDN[5]的新生兒；需要進行輸血治療的新生兒。

排除標準：新生兒的ABO血型未知或不確定；新生兒存在其他會導(dǎo)致黃疸或貧血的醫(yī)學(xué)狀況；新生兒有已知對柱凝膠或凝聚胺過敏史；家屬拒絕參加研究。

1.3 方法

1.3.1 主要試劑與儀器

（1）顯微鏡。選用上海軼德醫(yī)療科技股份有限公司生產(chǎn)的SM2000J顯微鏡。（2）離心機。選用上海力申科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的Neofuge 1600R離心機。（3）電子恒溫水浴箱。選擇山東博科科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的BJPX-Y100電子恒溫水浴箱。（4）孵育器。選擇吉林省長春市食品藥品監(jiān)督管理局提供的FYQ型孵育器。（5）抗人球蛋白卡。選擇上海潤普生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的抗人球蛋白卡，規(guī)格12卡/盒。（6）反定型試劑盒。選用北京樂普診斷科技股份有限公司生產(chǎn)的反定型試劑盒，規(guī)格10 mL/瓶。（7）凝聚胺檢測試劑盒。選擇長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的凝聚胺檢測試劑盒，規(guī)格100人份/盒。

1.3.2 實驗方法

微柱凝膠技術(shù)。（1）制備微柱凝膠。將聚丙烯酰胺凝膠溶液倒入微柱陣列模板中，光聚合固化凝膠。（2）樣品制備。收集新生兒和捐獻者的血液樣本，分離紅細胞和血漿，將紅細胞懸浮在等滲溶液中。（3）微柱反應(yīng)。將紅細胞懸浮液添加到微柱陣列上，微柱上固定有針對ABO抗原的多克隆抗體，孵育以允許抗原抗體反應(yīng)。（4）洗滌。洗滌微柱以去除未結(jié)合的紅細胞。（5）溶血檢測。通過測量微柱透光率檢測溶血，溶血程度與抗原抗體反應(yīng)的強度成正比。（6）參數(shù)。微柱孔徑，通常5～10 μm。微柱陣列密度，每平方厘米數(shù)千至數(shù)萬個微柱?？贵w固定量，每微柱100～1 000個抗體分子。孵育時間，15～30 min。洗滌次數(shù)，3～5次。透光率測量波長，通常450～550 nm。

凝聚胺技術(shù)。（1）樣品制備。與微柱凝膠技術(shù)相同。（2）凝聚胺反應(yīng)。將紅細胞懸浮液與凝聚胺溶液混合，孵育以允許凝聚胺與紅細胞表面抗原結(jié)合。（3）離心。離心以沉淀攜帶凝聚胺的紅細胞。（4）凝集檢測。通過目測或比濁度測定法評估凝聚胺誘導(dǎo)的紅細胞凝集，凝集程度與抗原抗體反應(yīng)的強度成正比。（5）參數(shù)。凝聚胺的質(zhì)量濃度，根據(jù)使用的特定凝聚胺類型而異，通常10～100 mg/mL。孵育時間，15～30 min。離心速度，1 000～2 000 r/min。凝集檢測方法，目測，觀察凝集程度；比濁度測定法，測量懸浮液的透光率，凝集會導(dǎo)致透光率降低。紅細胞濃度，通常1%～5%（體積比）。血漿稀釋度，根據(jù)需要稀釋，通常為1∶2或1∶4。溫度，室溫37 ℃。

1.4 觀察指標

對比患兒的血清學(xué)3項檢查和直接抗人球蛋白實驗、血清交叉配血結(jié)果，進一步比較2種檢驗技術(shù)的配血結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件對本研究數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以百分比表示，行χ2檢驗，符合正態(tài)分布的計量資料以x±s表示，行t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清學(xué)3項檢査結(jié)果

紅細胞抗體釋放陽性100.00%（36/36），血清游離抗體陽性83.33%（30/36），直接抗人球蛋白陽性52.78%（19/36），見表1。

2.2 直接抗人球蛋白實驗與血清交叉配血結(jié)果

經(jīng)過90次交叉配血，微柱凝膠技術(shù)不合格率顯著低于凝聚胺技術(shù)（P＜0.05），見表2。

2.3 2種檢驗技術(shù)配血結(jié)果

2種血液交叉配血技術(shù)的檢測結(jié)果對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3、表4。

3 討論

3.1 ABO溶血病及其檢測方法

ABO-HDN是一種由母體血液中的抗ABO抗體攻擊胎兒紅細胞而引起的溶血性疾病。通常發(fā)生在母親血型與胎兒血型不匹配的情況下，尤其是母親為O型血，而胎兒為A、B或AB型血時。

ABO血型系統(tǒng)由A型、B型、O型和AB型"4種血型組成，基因決定了個體的血型[6]。當(dāng)母親與胎兒的血型不匹配時，母體可能會產(chǎn)生抗ABO抗體，特別是針對胎兒的紅細胞中所缺乏的抗原。這些抗體可以穿過胎盤進入胎兒循環(huán)系統(tǒng)，攻擊胎兒的紅細胞，導(dǎo)致溶血。ABO溶血病的發(fā)病機制是母體血液中的抗ABO抗體與胎兒紅細胞表面的ABO抗原結(jié)合，形成抗體-抗原復(fù)合物，引發(fā)免疫反應(yīng)。這些抗體-抗原復(fù)合物被胎兒的脾臟和肝臟識別為異物，導(dǎo)致紅細胞被破壞，從而引發(fā)溶血反應(yīng)[7]。ABO-HDN的臨床表現(xiàn)包括貧血、黃疸、肝脾腫大等。嚴重的溶血反應(yīng)可能導(dǎo)致胎兒出生后立即出現(xiàn)黃疸，甚至可能引發(fā)急性溶血性貧血，危及生命[8]。微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)都是用于檢測血液中抗體和抗原的方法，常用于血型鑒定和溶血病等疾病的診斷。微柱凝膠技術(shù)是一種基于凝膠原理的血型鑒定方法，它是將含有抗體的凝膠柱與患者血液混合，如果患者血液中存在與某種抗原相對應(yīng)的抗體，則會在凝膠柱中形成凝集或凝膠沉淀。這種技術(shù)操作簡單快捷，結(jié)果易讀且穩(wěn)定，適用于大規(guī)模的血型鑒定和抗體篩查。凝聚胺技術(shù)是一種通過抗原與抗體之間的凝聚反應(yīng)檢測血型的方法[9]，它是將含有抗原的紅細胞與患者血清混合，如果患者血清中存在與抗原相對應(yīng)的抗體，則會發(fā)生凝聚反應(yīng)。這種技術(shù)可以直接用于檢測患者血清中的抗體，適用于特定抗體的檢測和血型鑒定。

3.2 微柱凝膠技術(shù)檢測ABO-HDN輸血情況

本研究結(jié)果顯示，采用微柱凝膠技術(shù)與凝聚胺技術(shù)檢測ABO-HDN可以提高診斷的準確度和靈敏度。研究發(fā)現(xiàn)，在患兒中，3項實驗的陽性率分別為52.78%、83.33%和100.00%。結(jié)果說明，凝膠技術(shù)在診斷ABO-HDN方面發(fā)揮了重要作用。微柱凝膠技術(shù)以其高度的自動化和標準化，提供了一種高效的檢測患者血清中是否存在抗體的方法。而凝聚胺技術(shù)則能夠更靈敏地檢測出溶血反應(yīng)[10]。分析原因如下：（1）技術(shù)靈敏度和準確度提高。微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)相較于傳統(tǒng)的血清學(xué)檢驗方法，具有更高的靈敏度和準確度。這意味著即使在溶血反應(yīng)的早期階段，也能夠準確地檢測出抗體的存在，有助于及早診斷溶血病。（2）自動化和標準化程度。微柱凝膠技術(shù)的自動化程度高，標準化程度也較高，減小了實驗誤差的可能性，提高了結(jié)果的可靠性[11]。（3）樣本處理的改進。這些新技術(shù)可能采用了更為先進的樣本處理方法，使得樣本中的抗體得以更好地保持活性，從而提高了檢測的靈敏度。（4）操作簡便性。相較于傳統(tǒng)的血清學(xué)檢驗方法，微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)操作流程更簡便，被更多的實驗室采用。這項研究數(shù)據(jù)表明，采用微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)能夠顯著提高對ABO-HDN的檢測率，這對于及早診斷并采取相應(yīng)治療措施來說至關(guān)重要。這與胡三強等[12]的研究結(jié)果基本一致，研究表明，在60例病例中，微柱凝膠技術(shù)的檢測不合格率為15%，凝聚胺技術(shù)的檢測不合格率為30%。微柱凝膠技術(shù)的檢測結(jié)果與血清學(xué)檢驗結(jié)果高度一致，凝聚胺技術(shù)的結(jié)果與交叉配血試驗結(jié)果相比存在一定偏差。結(jié)論表明，微柱凝膠技術(shù)在ABO-HDN輸血中表現(xiàn)出良好效果，檢測不合格率較低，且與標準檢測方法結(jié)果更為吻合，可作為一種可靠的檢測手段。

3.3 微柱凝膠技術(shù)檢測ABO-HDN輸血情況

本研究結(jié)果顯示，在對ABO-HDN輸血情況進行檢測時，微柱凝膠技術(shù)相比凝聚胺技術(shù)在不合格率上表現(xiàn)得更為優(yōu)越。具體來說，在90次交叉配血中，微柱凝膠技術(shù)不合格率僅為10.00%，而凝聚胺技術(shù)的不合格率高達48.89%。此外，對于放散液的檢測結(jié)果也顯示出類似的趨勢，微柱凝膠技術(shù)的不合格率顯著低于凝聚胺技術(shù)。分析原因如下：（1）技術(shù)原理差異。微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)在原理、操作上存在差異。微柱凝膠技術(shù)通過觀察血樣在微柱中的凝聚情況判斷是否存在抗體，而凝聚胺技術(shù)則是通過血清與抗原發(fā)生凝聚反應(yīng)來檢測抗體。這2種技術(shù)的差異可能導(dǎo)致微柱凝膠技術(shù)在檢測結(jié)果的準確性和穩(wěn)定性上具有優(yōu)勢。（2）操作便捷性。微柱凝膠技術(shù)具有操作簡便、結(jié)果易讀的特點，相較于凝聚胺技術(shù)可能更容易掌握和操作。這有助于減少人為因素對檢測結(jié)果的影響，從而降低檢測不合格率[13]。

（3）樣本處理的差異。微柱凝膠技術(shù)和凝聚胺技術(shù)可能對樣本的處理方式有所不同，導(dǎo)致在樣本處理過程中產(chǎn)生差異，進而影響檢測結(jié)果的準確性。（4）技術(shù)更新與發(fā)展。微柱凝膠技術(shù)是一種相對較新的技術(shù)，在技術(shù)更新與發(fā)展方面可能具有更多的優(yōu)勢[14]。相比之下，凝聚胺技術(shù)是一種較為傳統(tǒng)的技術(shù)，其檢測效率和準確性方面可能存在一定的局限性。這項研究數(shù)據(jù)表明，微柱凝膠技術(shù)相較于凝聚胺技術(shù)在ABO-HDN輸血情況的檢測中不合格率更低，這是其操作簡便、準確性高、技術(shù)原理上的優(yōu)勢等多方面因素所致。這與孫偉杰等[15]的研究結(jié)果基本一致，研究表明，在88例病例中，微柱凝膠技術(shù)的準確性為85%，而凝聚胺技術(shù)的準確性為70%。微柱凝膠技術(shù)檢測結(jié)果與標準檢驗結(jié)果高度一致，而凝聚胺技術(shù)的結(jié)果存在一定出入。結(jié)論表明，微柱凝膠技術(shù)在ABO-HDN輸血情況的檢測中更為可靠和準確，準確性明顯優(yōu)于凝聚胺技術(shù)。因此，推薦微柱凝膠技術(shù)作為首選檢測手段，以確保輸血的安全性和準確性。

綜上所述，微柱凝膠技術(shù)在ABO-HDN輸血檢測中表現(xiàn)更出色，不但準確性高，而且檢測不合格率顯著低于凝聚胺技術(shù)和放散液技術(shù)，這對于確保輸血安全和準確性具有重要意義。

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（編輯：肖宇琦）