不同免疫檢驗(yàn)法對乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢驗(yàn)效果的影響

摘要：目的" 研究不同免疫檢驗(yàn)法對乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢驗(yàn)效果的影響。方法" 以2020年6月-2023年6月安義縣人民醫(yī)院收治的60例疑似乙肝患者為研究對象，分別采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測患者的血清標(biāo)志物[乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗體（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（HBeAb）、乙肝核心抗體（HBcAb）]，比較兩種檢驗(yàn)方式對乙肝的診斷效能及對乙肝血清標(biāo)志物的陽性檢出率，統(tǒng)計其對不同乙肝分型的診斷準(zhǔn)確率。結(jié)果" CLIA對乙肝的診斷敏感度、準(zhǔn)確度、特異度高于ELISA（Plt;0.05）;CLIA對HBsAg、HBsAb、HBeAg的陽性檢出率高于ELISA（Plt;0.05），但二者對HBcAb、HBeAb的陽性檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。CLIA對乙肝小二陽和乙肝恢三陽的診斷準(zhǔn)確率高于ELISA（Plt;0.05），但二者對乙肝大三陽、小三陽的診斷準(zhǔn)確率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。結(jié)論" CLIA與ELISA在乙肝診斷中具有確切應(yīng)用價值，其中CLIA診斷效能較高，其對血清標(biāo)志物的檢出效果更為理想。

關(guān)鍵詞：乙肝;血清標(biāo)志物;化學(xué)發(fā)光免疫分析法;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);乙肝表面抗原

中圖分類號：R446" " " " " " " " " " " " " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A" " " " " " " " " " " " " " " " " DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.15.033

文章編號：1006-1959（2024）15-0142-04

Effect of Different Immunoassays on the Detection of Serum Markers of Hepatitis B Virus Infection

Abstract：Objective" To study the effect of different immune test methods on the test effect of serum markers of hepatitis B virus infection.Methods" A total of 60 patients with suspected hepatitis B admitted to Anyi County People's Hospital from June 2020 to June 2023 were selected as the research objects. The serum markers [hepatitis B surface antigen （HBsAg）， hepatitis B surface antibody （HBsAb）， hepatitis B e antigen （HBeAg）， hepatitis B e antibody （HBeAb）， and hepatitis B core antibody （HBcAb）] were detected by chemiluminescence immunoassay （CLIA） and enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）， respectively. The diagnostic efficacy of the two methods for hepatitis B and the positive detection rate of hepatitis B serum markers were compared. The diagnostic accuracy of different hepatitis B types was statistically analyzed.Results" The sensitivity， accuracy and specificity of CLIA in the diagnosis of hepatitis B were higher than those of ELISA （Plt;0.05）. The positive detection rates of HBsAg， HBsAb and HBeAg by CLIA were higher than those by ELISA （Plt;0.05）， but there was no significant difference in the positive detection rates of HBcAb and HBeAb between CLIA and ELISA （Pgt;0.05）. The diagnostic accuracy of CLIA was higher than that of ELISA （Plt;0.05）， but there was no significant difference in the diagnostic accuracy between between CLIA and ELISA （Pgt;0.05）.Conclusion" CLIA and ELISA have definite application value in the diagnosis of hepatitis B. The diagnostic efficiency of CLIA is higher， and its detection effect on serum markers is more ideal.

Key words：Hepatitis B;Serum markers;Chemiluminescence immunoassay;Enzyme linked immunosorbent assay;Hepatitis B surface antigen

乙肝（chronic hepatitis B）為我國法定乙類傳染性疾病，由乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus， HBV）感染引起，該病進(jìn)展復(fù)雜、傳染性強(qiáng)、感染途徑豐富，不僅影響著患者的預(yù)后生存，且對我國公共衛(wèi)生安全構(gòu)成了一定威脅，因此該病篩查及早期診斷尤為關(guān)鍵[1，2]。目前，血清學(xué)標(biāo)志物檢驗(yàn)為乙肝首選篩查方式，其指標(biāo)包括乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen， HBsAg）、乙肝表面抗體（hepatitis B surface antibody， HBsAb）、乙肝核心抗體（hepatitis B core antibody， HBcAb）、乙肝e抗原（hepatitis B virus e antigen， HBeAg）與乙肝e抗體（hepatitis B e antibody， HBeAb），以上檢驗(yàn)結(jié)果可作為乙肝的重要診斷依據(jù)[3，4]?，F(xiàn)階段，酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay， ELISA）與化學(xué)發(fā)光免疫分析法（chemiluminescent immunoassay， CLIA）均為臨床常用免疫檢驗(yàn)方式，前者可利用化學(xué)檢測體系完成待測物質(zhì)的量化分析，后者則可通過顯色對比進(jìn)行定性檢驗(yàn)，二者均可用于乙肝血清標(biāo)志物的檢驗(yàn)[5，6]。在此，為了探究不同免疫檢驗(yàn)法在乙肝檢測中的應(yīng)用優(yōu)劣，本研究結(jié)合2020年6月-2023年6月安義縣人民醫(yī)院收治的60例疑似乙肝患者，觀察ELISA與CLIA對乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢驗(yàn)效果的影響，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料" 以2020年6月-2023年6月安義縣人民醫(yī)院收治的60例疑似乙肝患者為研究對象，其中男39例，女21例;年齡24～67歲，平均年齡（42.37±6.22）歲。以上患者均因乏力、食欲不振、肝區(qū)不適、惡心、嘔吐等癥狀就診，所有患者均知情且自愿參與本次研究。

1.2納入和排除標(biāo)準(zhǔn)" 納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床初步診斷為疑似乙肝;②近期未接受抗乙肝治療;③接受并配合完成免疫檢驗(yàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①急性肝炎、肝癌等肝病患者;②合并全身性炎癥疾病者;③妊娠及哺乳期患者;④免疫系統(tǒng)疾病者。

1.3方法

1.3.1樣本采集" 所有受檢者均于檢驗(yàn)前1 d晚8點(diǎn)后開始禁食，于檢驗(yàn)當(dāng)日清晨采集空腹靜脈血5 ml，離心處理（3000 r/min，10 min）后，取上清液進(jìn)行免疫檢驗(yàn)。

1.3.2 CLIA檢測" 將血清樣本置于HBV核心抗原聚苯乙烯試管中，取辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記，隨后置于37 ℃環(huán)境下，放置2 h后，采用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行沖洗，反復(fù)沖洗3次，3 min/次，加入氫氧化鈉與同量魯米諾，各100 μl，于室溫下靜置10 min后，加入3%過氧化氫溶液100 μl，隨后采用化學(xué)發(fā)光儀（型號：ELSD-5000KS型，上?？普埽y定其發(fā)光強(qiáng)度。所有操作均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。HBsAg參考值：0～0.25 ng/ml，HBsAb：0～10 mU/ml，HBeAg：0～0.03 NCU/ml，HBeAb：0～2 NCU/ml，HBcAb：0～0.2 NCU/ml。超過以上范圍即為陽性。

1.3.3 ELISA檢測" 采用ELISA試劑盒（天津睿創(chuàng)生物科技有限公司）進(jìn)行檢驗(yàn)，將ELISA試劑盒與微孔反應(yīng)條于室溫下放置30 min，設(shè)置陽性、陰性、空白對照孔，隨后依次加入待測樣本與對照物，各50 μl，封板后置于37 ℃溫浴箱中，保持60 min后取出，取50 μl酶結(jié)合物分別加入到各反應(yīng)孔中，再次溫育30 min，結(jié)束后將其置于洗板機(jī)中洗滌，反復(fù)洗劑5次后拍干，隨后依次加入50 μl的顯色劑A與顯色劑B，充分震蕩混合后，放于溫浴箱中靜置15 min。最后其50 μl終止液加入反應(yīng)孔中，通過酶標(biāo)儀（型號：SpectraMax i3x，上海美谷分子）進(jìn)行比色，讀取其吸光度值，進(jìn)行計算與統(tǒng)計。當(dāng)S/COV≥1.0，其結(jié)果表示陽性，反之為陰性。所有操作均嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.4觀察指標(biāo)" ①以HBV-DNA檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較兩種檢驗(yàn)方式對乙肝的診斷效能;②比較兩種檢驗(yàn)方式對乙肝血清標(biāo)志物的陽性檢出率;③比較兩種檢驗(yàn)方式對不同乙肝分型的診斷準(zhǔn)確率，包括：乙肝大三陽：HBsAg+ HBeAg+HBcAb陽性;乙肝小三陽：HBsAg+ HBeAb+HbcAb陽性;乙肝小二陽：HBsAg+HBcAb陽性;乙肝恢三陽：HBsAg+ HBsAb+HBeAb陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法" 采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（x±s）表示，組間行t檢驗(yàn)，計數(shù)資料以[n（%）]表示，組間行χ2檢驗(yàn)，Plt;0.05表明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩種檢驗(yàn)方式對乙肝的診斷效能比較" HBV-DNA診斷結(jié)果顯示，本次乙肝陽性患者共52例，陰性者8例，其中，CLIA對乙肝的診斷敏感度、準(zhǔn)確度、特異度高于ELISA（Plt;0.05），見表1、表2。

2.2兩種檢驗(yàn)方式對乙肝血清標(biāo)志物的陽性檢出率比較" CLIA對HBsAg、HBsAb、HBeAg的陽性檢出率高于ELISA（Plt;0.05），但二者對HBcAb、HBeAb的陽性檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05），見表3。

2.3兩種檢驗(yàn)方式對不同乙肝分型的診斷準(zhǔn)確率比較" CLIA對乙肝小二陽和乙肝恢三陽的診斷準(zhǔn)確率高于ELISA（Plt;0.05），但二者對乙肝大三陽、乙肝小三陽的診斷準(zhǔn)確率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05），見表4。

3討論

HBV屬于雙鏈環(huán)狀嗜肝DNA病毒，其感染后可產(chǎn)生蛋白并釋放入血，由此可引起相應(yīng)血清標(biāo)志物水平升高[7，8]，其中，乙肝表面抗原/抗體（HBsAg/HBsAb）、乙肝e抗原/抗體（HBeAg/HBeAb）與核心抗體（HBcAb）為當(dāng)前常用乙肝標(biāo)志物，每項(xiàng)指標(biāo)均具有不同臨床意義，其診斷需結(jié)合以上結(jié)果進(jìn)行綜合評定[9，10]。目前，ELISA與CLIA均為乙肝主要免疫檢驗(yàn)方式，其中，ELISA屬于酶免疫測定技術(shù)常用手段，其原理在于酶分子與抗體的共價結(jié)合，通過抗原/抗體吸附于固相載體表面，隨后利用酶標(biāo)記抗體與載體表面抗原/抗體的特異性結(jié)合，借助酶與底物反應(yīng)的特定顏色呈現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果，其顏色深淺與樣本抗體/抗原的量呈正比，具有操作簡單、成本低廉等特點(diǎn)，但該檢驗(yàn)方式僅可進(jìn)行定性分析，整體應(yīng)用價值有限[11，12]。CLIA則屬于定量免疫測定技術(shù)，可結(jié)合免疫反應(yīng)與化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)的應(yīng)用優(yōu)勢，通過檢驗(yàn)物濃度與化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的線性關(guān)系完成檢驗(yàn)，可直觀反映HBV在體內(nèi)的感染狀態(tài)，其操作時間短、試劑消耗量少，在血清學(xué)檢測中具有較高診斷準(zhǔn)確率[13，14]。

本研究結(jié)果顯示，CLIA對乙肝的診斷敏感度、準(zhǔn)確度、特異度高于ELISA（Plt;0.05），此結(jié)果表明，相較于ELISA，CLIA在乙肝檢測中具有更高的診斷效能。分析認(rèn)為，ELISA僅可通過底物的顏色反應(yīng)判定免疫反應(yīng)的發(fā)生情況，無法完成精確的定量分析;另一方面，其檢驗(yàn)結(jié)果可受到試劑生產(chǎn)廠家、標(biāo)本污染等因素的影響，整體診斷價值有限[15，16]。而CLIA可利用發(fā)光底物在酶催化作用下的發(fā)光原理，通過光強(qiáng)度的測定完成量化分析，不僅可準(zhǔn)確辨識逃逸的突變株，且避免了突變抗體對檢測過程的影響，降低了人為因素對檢測結(jié)果的干擾，整體診斷效能更為理想[17，18]。而在血清標(biāo)志物的檢測中，CLIA對HBsAg、HBsAb、HBeAg的陽性檢出率高于ELISA（Plt;0.05），但二者對HBcAb、HBeAb的陽性檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05），提示CLIA對乙肝血清標(biāo)志物HBsAg、HBsAb、HBeAg的檢測作用優(yōu)于ELISA。究其原因，CLIA可對乙肝血清標(biāo)志物進(jìn)行重復(fù)使用，進(jìn)一步增強(qiáng)其發(fā)光強(qiáng)度，提高檢測靈敏度，以強(qiáng)化相關(guān)標(biāo)志物的檢出[19-21]。此外，CLIA對乙肝小二陽和乙肝恢三陽的診斷準(zhǔn)確率高于ELISA（Plt;0.05），但二者對乙肝大三陽、乙肝小三陽的診斷準(zhǔn)確率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05），可見CLIA在不同乙肝類型中的檢測作用優(yōu)于ELISA，其對乙肝小二陽與乙肝恢三陽的檢測價值相對更高，這與其血清標(biāo)志物的檢出效果存在直接關(guān)聯(lián)。

綜上所述，CLIA與ELISA在乙肝診斷中均具有確切應(yīng)用價值，其中，CLIA診斷效能更高，其對血清標(biāo)志物的檢出效果更為理想。

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