脂滴熒光探針的研究進展

摘要 脂滴（LDs）是真核細胞中一類重要的細胞器，在脂質代謝等生命活動中發(fā)揮了重要作用。脂滴的檢測不僅有助于理解脂滴參與生命活動的作用機制，而且對相關疾病的診斷和治療具有重要的指導意義。脂滴熒光探針可分為兩類：一類是單功能脂滴定位探針，僅對細胞中的脂滴進行特異性標記和熒光成像；另一類是多功能脂滴熒光探針，具有定位脂滴、監(jiān)測細胞微環(huán)境、同時成像雙細胞器、檢測脂滴中活性物種和診療一體化等多重功能。本文對近年來報道的脂滴熒光探針進行了總結與評述，探討了脂滴熒光探針應用于探究重要細胞生理過程、脂滴與其它細胞器（如內質網(wǎng)、線粒體、溶酶體和細胞核等）的動態(tài)相互作用以及在相關疾病診斷方面的發(fā)展趨勢。

關鍵詞 脂滴；熒光探針；生物成像；細胞器靶向；評述

脂滴（Lipid droplets， LDs）是一種普遍存在于大多數(shù)細胞和生物體中的高度動態(tài)的球形細胞器[1]。脂滴的結構與傳統(tǒng)的膜結構細胞器不同，其疏水的中性脂質核心被單層磷脂膜和一組具有不同功能的表面蛋白覆蓋[2]。脂滴是一種多功能細胞器，不僅用于細胞內脂質儲存，還參與調節(jié)多種代謝過程[3]，如脂質代謝、膜合成和轉移、信號轉導和蛋白質降解等[4]。脂滴的相關性質與細胞的生理狀態(tài)密切相關，細胞內穩(wěn)態(tài)破壞或微環(huán)境突變使得細胞器出現(xiàn)異常，從而導致紊亂，甚至發(fā)生肥胖、糖尿病、神經(jīng)退行性疾病、炎癥性疾病和癌癥等疾病[ 5-8] ，因此，異常積累的脂滴已成為多種脂質失衡有關疾病的標志物[9-10]。脂滴與許多細胞器存在相互作用，包括線粒體、過氧化物酶體、溶酶體、內質網(wǎng)和細胞核等[11]。實時監(jiān)測脂滴動態(tài)變化及脂滴與其它細胞器的相互作用，對深入了解細胞的生理狀態(tài)以及對相關疾病的早期診斷具有重要意義。

傳統(tǒng)的透射電鏡和拉曼顯微鏡方法由于操作過程復雜，不適合實時跟蹤活細胞內脂滴的分解、融合以及運動等行為[12]。熒光成像技術因具有高靈敏度、高選擇性、無創(chuàng)、可實時成像、樣品制備方便以及具有高時空分辨率等優(yōu)點[13-14]，已成為活細胞內脂滴精確定位的有力工具。熒光成像技術的核心為熒光探針分子，雖然尼羅紅（NileRed）和BODIPY 493/503 等商業(yè)染料已廣泛用于標記脂滴[15]，但是仍有很多局限之處，如尼羅紅會同時染色細胞中的其它疏水結構，導致對脂滴的選擇性較低；BODIPY 493/503對脂滴雖然表現(xiàn)出較高的選擇性，但染色耗時長，斯托克斯位移小，可能會導致激發(fā)光譜和發(fā)射光譜之間的嚴重串擾[16]。因此，開發(fā)性能優(yōu)良的脂滴靶向熒光探針對相關疾病的診斷至關重要。

近年來，一系列具有較高選擇性、良好光學性質以及低細胞毒性的脂滴靶向性熒光探針陸續(xù)被報道[17-18]。脂滴熒光探針設計的關鍵點之一是調節(jié)探針的疏水性，探針的親脂基團與脂滴內脂質結合，使其優(yōu)先聚集于脂滴疏水內核，從而實現(xiàn)脂滴的特異性識別。研究者常利用長烷基鏈、三苯胺和苝等取代基團，提高探針的脂滴靶向能力[19-20]。探針設計的另一個關鍵點在于提高其在脂滴中的熒光量子產(chǎn)率[21]。依據(jù)脂滴極性、粘度以及含水量等微環(huán)境，研究者?；诜肿觾入姾赊D移（Intramolecular charge"transfer， ICT）、聚集誘導發(fā)光（Aggregation-induced emission， AIE）、扭曲分子內電荷轉移（Twisted intramolecularcharge transfer， TICT）和激發(fā)態(tài)分子內質子轉移（Excited state intramolecular proton transfer，ESIPT）等熒光響應機理合理設計脂滴熒光探針的結構[22-25]。此外，基于碳點和量子點的熒光納米探針也被應用于脂滴成像。本文從熒光探針的設計、結構和功能等方面對近年來開發(fā)的脂滴熒光探針及其生物學應用進行了總結和評述。

1 單功能脂滴特異性熒光探針

1.1 有機小分子脂滴熒光探針

近年來，有機小分子熒光探針在生物分析領域備受關注?；贐ODIPY[26-30]、苯并噻唑[31-36]、萘酰亞胺[37-39]、3-羥基黃酮衍生物[40-41]、香豆素[42-44]、單苯環(huán)[45]和多環(huán)芳烴[46-49]等結構的熒光團被廣泛應用于脂滴熒光探針的設計。Jiang 等[41]報道了一系列基于3-羥基黃酮的熒光探針（圖1A， 1a～1d），用于監(jiān)測細胞和組織中脂滴的動態(tài)變化。該系列探針的親脂性可通過二烷基氨基的鏈長調節(jié)，不同鏈長的探針（1a～1c）均有良好的膜通透性和兩親性，并能特異性染色脂滴。同時，通過調節(jié)3-羥基黃酮單元的共軛結構，該研究組還開發(fā)了另外一種不同發(fā)射波長的脂滴探針1d。該系列探針在水溶液中發(fā)射較弱熒光，在有機溶劑中則顯示較強的熒光和較大的Stokes 位移（gt;150 nm）， 并表現(xiàn)出良好的親脂性。HepG2 細胞成像實驗表明，該系列探針可用于有效觀測脂滴的動態(tài)變化（圖2A）[41]。

Yoshihara等[50]構建了一種脂滴靶向的香豆素類熒光探針2（圖1B）。光譜實驗結果表明，探針從正己烷（λex=498 nm）到乙腈（λex=625 nm）有較大紅移，表現(xiàn)出明顯的溶劑變色效應。同時，探針2 在正己烷和乙腈中均表現(xiàn)出較高的熒光量子產(chǎn)率（Φgt;0.8）。此外，利用熒光壽命成像顯微鏡對活體小鼠肝細胞中的脂滴進行成像，可以明顯區(qū)分脂滴探針的熒光信號與細胞/組織的自發(fā)熒光（圖2B）[50]，并可用于監(jiān)測和跟蹤培養(yǎng)細胞、特定組織和器官中脂滴的形成。Zhou 等[51]結合ESIPT 機制開發(fā)了一種AIE 熒光探針3（圖1C）用于細胞內脂滴成像，具有高選擇性、良好的光穩(wěn)定性、大的斯托克斯位移、良好的生物相容性以及免洗成像等優(yōu)點。生物實驗結果表明，探針3 可用于監(jiān)測斑馬魚中脂滴的形成及變化發(fā)展過程（圖2C）[51]。

Chen 等[52]設計合成了基于萘酰亞胺熒光團的探針4（圖1D）。探針4 的熒光開-關由氫鍵可逆控制，根據(jù)脂滴內/外的質子和非質子環(huán)境對脂滴進行熒光染色。萘酰亞胺核心的兩個羰基可作為質子接受位點，這些位點在脂滴外的質子環(huán)境中形成氫鍵，從而使探針處于熒光淬滅狀態(tài)，而探針4 在脂滴內的弱極性、非質子性環(huán)境中熒光開啟。與傳統(tǒng)高親脂性脂滴探針不同，該探針不完全進入到脂滴內，而是在脂滴外形成一個緩沖池。進入到脂滴的探針分子開啟熒光成像脂滴。探針分子在脂滴內的部分被氧化，發(fā)生光漂白，又使得親水性增加，光漂白的熒光團會從脂滴中釋放出來，并與緩沖池中未被氧化的探針進行動態(tài)交換，從而實現(xiàn)長期穩(wěn)定地動態(tài)監(jiān)測脂滴。

1.2 基于碳點/量子點的脂滴熒光納米探針

碳點（CDs）具有優(yōu)異的光學性能，如高量子產(chǎn)率、可調諧的發(fā)射波長和良好的生物相容性等優(yōu)點。She 等[53]合成了一種基于硼和氮共摻雜碳點的脂滴納米熒光探針5（圖1E）。該探針以3-氨基苯硼酸為原料，通過熱干法制備而成，平均尺寸約為6.9 nm。探針5 可在不引入脂滴靶向配體的情況下實現(xiàn)脂滴免洗成像，并可動態(tài)監(jiān)測活細胞中的脂滴。Jing 等[54]以3-（二甲胺基）苯酚為原料，采用溶劑熱合成法合成了一種基于碳點的脂滴熒光探針6（圖1F），由于該探針具有低光毒性和良好的光穩(wěn)定性，不僅能追蹤活細胞中脂滴的動態(tài)，并可在不同細胞系和富脂組織中成像脂滴以及區(qū)分癌細胞與正常細胞，對深入了解脂滴相關疾病具有重要價值。

Mandal 等[55]設計了一種基于量子點的脂滴熒光納米探針7（圖1G）。該探針具有一個量子點核心和一個具有兩性離子表面電荷的聚合物外殼。該納米探針具有30～40 nm 的水動力尺寸，在生理pH 條件下表面電荷接近于零，通過脂筏內吞作用進入細胞并標記脂滴。Liang 等[56]開發(fā)了一種環(huán)糊精修飾表面的基于二硫化鉬量子點的熒光探針8（圖1H）。二硫化鉬量子點具有良好的熒光特性、優(yōu)異的生物相容性和良好的穩(wěn)定性。細胞成像實驗顯示，這些量子點通過多種內化途徑進入活細胞的脂滴內，有望成為一種有效的細胞脂質代謝監(jiān)測工具。

基于碳點和量子點的脂滴熒光探針制備工藝簡單，可通過控制納米粒子的大小調諧熒光發(fā)射性能，并且無需脂滴靶向基團的修飾，一般通過細胞的內吞作用最終靶向脂滴。有些結構復雜的有機小分子脂滴熒光探針的合成步驟繁瑣，成本相對較高，但可通過對熒光團的修飾進行一定預期的功能化，可進一步設計成為多功能脂滴熒光探針，應用范圍更廣。

2 多功能脂滴特異性熒光探針

2.1 脂滴微環(huán)境檢測熒光探針

脂滴內微環(huán)境因素主要包括極性、粘度和pH 值等，與細胞代謝和生理過程密切相關，其非正常水平變化可在一定程度上反映細胞功能的異常[57-58]。

脂滴的極性反映了脂滴的狀態(tài)和功能，在調節(jié)生物過程中發(fā)揮了關鍵作用[59]。Fan 等[60]報道了一種可視化炎癥模型和臨床癌癥患者樣本中脂滴極性的熒光探針9（圖3A）。該探針具有典型的D-π-A結構，脂滴靶向基團三苯胺作為電子供體，吡啶作為電子受體。由于ICT 效應，在低極性條件下，探針由于電荷分離較少，與溶劑的相互作用較弱，因而發(fā)出強而較短的熒光。在高極性介質中，由于探針與溶劑之間的偶極-偶極相互作用，使其發(fā)生大的電荷分離和激發(fā)態(tài)能量耗散，導致激發(fā)能非輻射弛豫，使得熒光猝滅。探針在Δf=0.258～0.312 的線性范圍內對極性變化表現(xiàn)出較高的靈敏度，熒光增強超過278 倍。使用該探針首次通過共聚焦激光掃描成像脂肪肝組織、炎癥活小鼠和癌癥患者手術樣本中脂滴的極性，在癌癥的臨床診斷中擁有巨大的應用潛力。近年報道了許多基于ICT 機制的極性敏感的脂滴探針如探針10～12（圖3B～3D）[22，61-62]，為深入研究脂滴極性提供了更多工具。

細胞粘度在與擴散控制相關的生理過程中起著關鍵作用。粘度異?？芍苯臃从成眢w功能異常，異常的粘度會破壞機體中不同細胞器與細胞代謝的相互作用，甚至引起潛在的脂質毒性，導致阿爾茨海默病、高血壓、動脈粥樣硬化和高脂血癥等疾病[63-65]。Chen 等[65]合成了一種對粘度敏感的脂滴熒光探針13（圖3E）。在低粘度下，苯環(huán)與咔唑之間的單鍵可自由旋轉，整個探針不共平面，探針不發(fā)射熒光；在較高粘度下，由于單鍵旋轉受到限制，熒光強度明顯增加。此外，修飾咔唑的己基可增加探針的脂質相容性，能準確地靶向活細胞中的脂滴并檢測其粘度。利用單鍵旋轉受限， Dong 等[66]設計并合成了一種粘度敏感的近紅外熒光探針14（圖3F）用于對細胞鐵死亡過程中脂滴粘度的實時和原位成像。隨著粘度增加，探針中3 個單鍵的自由旋轉被限制，導致723 nm 處的熒光顯著增強。生物成像實驗表明，細胞發(fā)生鐵死亡過程并導致脂滴粘度增加。

細胞內/外多種生理和病理過程導致的pH 值變化，可以反映一些相關的炎癥和疾病[67-68]。Sk 等[69]開發(fā)了一種基于烷基取代吡啶醇和四苯乙烯的pH 敏感型脂滴熒光探針15（圖3G）。該探針在酸性條件下發(fā)生質子化，進而影響探針的光物理性質。質子化過程改變探針平面結構，削弱共軛，導致熒光發(fā)射減弱甚至完全猝滅。隨著pH 值增大，探針在堿性環(huán)境下發(fā)生去質子化，分子平面結構恢復，熒光強度增強。此外，該探針對高/低等真核生物中的脂滴均具有靶向能力。

2.2 雙細胞器靶向脂滴熒光探針

細胞中的生命活動通常與多個細胞器相關，可同時定位多個細胞器的單一熒光探針近年受到廣泛關注[70]。具有特定功能的細胞器之間密切接觸并相互協(xié)作，形成細胞器互作網(wǎng)絡，實現(xiàn)快速的信息交流和物質交換，高效有序地進行不同細胞生命條件下的多種生物學過程。對不同細胞器的同時成像對于闡明它們的分布和相互作用非常有價值[71，73]。因此，開發(fā)可同時靶向脂滴和其它細胞器的有機小分子熒光探針，對研究細胞器間相互作用、分子調節(jié)機制乃至在細胞、組織、個體水平的生理功能研究中均具有重要意義。

內質網(wǎng)主要由不飽和磷脂組成的脂質雙分子層包圍，包括一定數(shù)量的水，并顯示出比脂滴更高的極性[74-75]。Guo 等[23]利用脂滴與內質網(wǎng)含水量的差異，以經(jīng)典的ESIPT 骨架3-羥基黃酮為基礎，通過引入不同側取代基設計并合成了兩種熒光探針（圖4A， 16a 和16b），用于對脂滴和內質網(wǎng)的雙色成像。一方面，不同側取代基可以通過調整探針的親脂性提高對脂滴和內質網(wǎng)的靶向能力；另一方面，側取代基的供電子能力又會影響探針對不同含水環(huán)境的熒光響應敏感性。原位和實時熒光成像實驗結果表明，探針16a/16b 可通過不同熒光顏色區(qū)分脂滴和內質網(wǎng)，脂滴和內質網(wǎng)分別顯示橙色和綠色熒光，進一步揭示了脂滴和內質網(wǎng)之間的相互作用，有助于深入了解與其相關的生理過程。

線粒體作為細胞內的能量工廠，能夠為發(fā)生在細胞質膜上的多種生命活動，如細胞的分裂、增殖等生理活動提供主要能量。單層質膜結構的脂滴與線粒體存在密切的聯(lián)系[76-77]。靶向線粒體和脂滴的熒光探針應分別具有陽離子結構和中性親脂性結構，為了能夠同時兼具這兩種結構特性，并克服在成像應用上的局限性， Zhang 等[24]設計了一種AIE 單分子雙靶標探針17（圖4B），實現(xiàn)了脂滴和線粒體雙色成像?；谶@種兼具親脂性和陽離子結構的設計，該探針能夠穿過磷脂雙分子層生物膜結構，并于較大膜電位驅動下在線粒體內積累。探針17 通過酯酶介導的水解調節(jié)探針的雙色發(fā)射。探針17 的陽離子部分通過靜電作用靶向線粒體，并在650 nm 處發(fā)射紅色熒光；經(jīng)酯酶水解后，親脂性片段在脂滴內富集，并同時在480 nm 處發(fā)出藍色熒光。該探針為酯酶活性檢測和細胞活力評估提供了強有力的工具。這種同時靶向線粒體和脂滴的單分子熒光探針受到了廣泛研究，探針18 和19（圖4C 和4D）[78-79]基于分子螺旋環(huán)化的策略，利用線粒體和脂滴之間的電荷差異，分別以陽離子開環(huán)和中性閉環(huán)形式靶向線粒體和脂滴，實現(xiàn)線粒體和脂滴的雙色成像。

溶酶體是典型的酸性細胞器（pH 4.5～5.0），在內吞和內源性胞內物質的消化和清除過程中起著關鍵作用。脂滴和溶酶體在某些生物過程中也會相互作用[80-82]。Zheng 等[80]報道了一種基于萘酰亞胺的熒光探針20（圖4E），用于同時雙色成像脂滴和溶酶體。探針在中性脂滴內發(fā)出黃色熒光，而萘酰亞胺相連的二甲氨基又會在酸性微環(huán)境的溶酶體中發(fā)生質子化，從而靶向溶酶體發(fā)出紅色熒光。探針20 通過對脂滴和溶酶體的超分辨率成像，可以定量檢測這兩種細胞器的數(shù)量和直徑，并能夠實時跟蹤脂滴和溶酶體的運動行為（圖5）[80]。此外，該探針還可用于不同細胞系和斑馬魚胚胎的成像，為脂滴和溶酶體之間的相互作用提供了證據(jù)。類似地，探針21～23（圖4F～4H）[83-85]也被應用于脂滴和溶酶體的同時成像，并具有較好的光穩(wěn)定性和較低的細胞毒性，為深入研究二者的相互作用提供了更多方法。

細胞核是存在于真核細胞中的封閉式膜狀細胞器，儲存了真核細胞的遺傳物質，在調節(jié)細胞分化和行為方面具有重要作用[86]。原位檢測脂滴和細胞核，對于深入探索亞細胞器的相互作用具有重要意義。Wang 等[87]利用香豆素和陽離子喹啉單元開發(fā)了一種用于同時靶向脂滴和細胞核的熒光探針24（圖4I）。探針24 可以通過產(chǎn)生比率熒光發(fā)射和熒光壽命信號對細胞微環(huán)境極性的變化進行監(jiān)測。熒光成像實驗表明，利用探針24 可觀察到在鐵死亡過程中脂滴極性明顯增加，并且脂滴與細胞質之間的極性均質化。探針24 還具有良好的核酸結合能力，可用于區(qū)分鐵死亡和細胞凋亡。

2.3 生物活性物種檢測熒光探針

活性氧（ROS）、活性氮（RNS）和活性硫（RSS）是多種類型細胞中產(chǎn)生的活性小分子，在調節(jié)許多生理過程中發(fā)揮了重要作用，監(jiān)測其變化有助于研究氧化應激導致的疾病的發(fā)病機制和進展，并促進早期診斷和藥物開發(fā)。近年來，研究者開發(fā)了許多用于監(jiān)測ROS、RNS 和RSS 水平的熒光探針[88-90]。

Li 等[91]以三苯胺為骨架，通過在三苯胺上連接富電子硫醚基團和強吸電子–CN 基團構建D-π-A 分子結構，開發(fā)了一種可檢測ROS 的新型脂滴熒光探針25（圖6A）。探針25 具有較好的細胞穿透性，可特異性定位于脂滴并發(fā)出橙色熒光。探針25 不僅表現(xiàn)出典型的AIE 特性，還具有較大的Stokes 位移，避免了與細胞自身熒光重疊。另外，探針25 的硫醚和乙烯基兩個位點對ClO–具有良好的靈敏度和選擇性，可特異性檢測活細胞中的ClO–（圖7A）[91]。這種具有高亮度、低細胞毒性的多功能脂滴熒光探針被應用于斑馬魚體成像以及實時監(jiān)測HeLa 細胞中ClO–波動。Shi 等[92]報道了一種AIE 近紅外熒光探針26（圖6B），不僅可通過比率成像細胞的內/外源性ClO–，還可特異性靶向脂滴。當探針26 與ClO–反應時，ICT 過程中斷，熒光增強，并由紅色變?yōu)樗{色。此外，通過將探針26 負載到蛋白上還可有效提高其對ClO–的響應速度。

本研究組[93]開發(fā)了一種脂滴靶向和生物硫醇敏感的熒光探針27（圖6C）。該探針以苯并噻唑衍生物為熒光團、2， 4-二硝基苯磺酰（DNBS）為生物硫醇響應位點，對生物硫醇具有高選擇性，并顯示出明顯且快速的熒光開啟反應，這是由于強親核取代生物硫醇和硫化鈉促進DNBS 裂解，然后快速環(huán)化釋放熒光苯并噻唑基伊豆素BTDA。此外，探針27 還具有優(yōu)異的脂滴靶向能力（圖7B）[93]，不僅可用于活細胞中脂滴內生物硫醇的選擇性成像，還可用于區(qū)分癌細胞/組織和正常細胞/組織以及癌癥患者手術標本的診斷。

Pan 等[94]報道了一種基于BODIPY 的脂滴熒光探針28（圖6D），探針通過β-D-半乳糖部分與肝癌細胞表面高水平的唾液糖蛋白受體（ASGPr）結合，并在ASGPr 介導下通過內吞作用靶向肝癌細胞，進入到肝癌細胞后的探針分子富集在低極性的脂滴內。探針28 具有高選擇性和高靈敏度，在肝細胞中實現(xiàn)了對脂滴和NO 的雙重靶向識別。通過探針28 可實時觀察NO 對HIF-1 活性的影響，為深入理解HIF-1 的上調途徑提供了可能。

2.4 診療一體化脂滴熒光探針

光動力治療（PDT）作為一種無創(chuàng)癌癥治療方式，主要利用光敏劑在細胞內產(chǎn)生細胞毒性的ROS 引導癌癥治療[95]。Jiang 等[95]制備了一種H2O2 激活的脂滴靶向熒光探針29（圖8A），用于熒光引導癌細胞光動力治療。硼酸酯作為H2O2 反應位點，在缺氧的癌細胞中與高水平的H2O2 反應，探針釋放出的疏水部分積聚在脂滴內，并發(fā)出紅色熒光。此外，在光照射下，探針29 激活H2O2 產(chǎn)生單線態(tài)氧，觸發(fā)癌細胞凋亡，從而達到治療的目的。經(jīng)探針29 處理后由H2O2 激活誘導的細胞凋亡實驗中，隨時間延長，探針的熒光信號增強，在6 min 時大部分細胞發(fā)生凋亡，顯示出較高的PDT 效率（圖9A）[95]。

本研究組[96]開發(fā)了一種多功能AIE 脂滴熒光探針30（圖8B），用于癌癥的診斷和治療。酯酶介導的水解過程不僅能反映酯酶活力水平，還可利用發(fā)射波長的變化區(qū)分活細胞、凋亡細胞和死細胞。脂滴熒光探針30 在白光照射下也表現(xiàn)出顯著的ROS 生成能力，被成功用于癌細胞的高效PDT（圖9B）[96]。因此，探針30 在實時監(jiān)測細胞凋亡和光動力消融癌細胞方面均具有巨大的應用潛力，可望作為癌細胞診療一體化的分子工具。

3 總結與展望

本文總結了近年來脂滴熒光探針的研究進展，并分別介紹了這些熒光探針在生物成像中的應用及其響應機理。此類熒光探針大多具有某種識別基團或結合位點，基于同一個功能化的分子，以不同的相互作用或不同的響應機理與受體結合，從而產(chǎn)生明顯的光譜變化，達到特異性識別的目的。這些熒光探針或能用于脂滴成像、監(jiān)測脂滴微環(huán)境或同時靶向其它細胞器，以及監(jiān)測多種活性物質和診療疾病等。深入研究脂滴探針將有助于研究者進一步理解亞細胞水平上生理活動的分子機制和探究脂滴相關疾病的影響因素，以及利用脂滴探針進行疾病的早期診斷及后期治療。作為一種重要的成像工具，脂滴熒光探針在生理學、醫(yī)學等領域具有越來越廣闊的應用前景。但是，近紅外脂滴探針尤其是近紅外二區(qū)探針的數(shù)量目前仍較為有限，組織穿透深度等問題依然未得到有效解決。因此，結合不同的響應機制并引入共軛度更高的基團，將發(fā)射波長擴展至近紅外區(qū)，將是該類熒光探針的重要研究方向之一。開發(fā)同時靶向多種細胞器并可與多種活性物質或離子發(fā)生靈敏響應的脂滴探針也是未來該領域需關注的方向。此外，結合脂滴探針的成像優(yōu)勢及光療特征，同時在探針平臺中負載藥物活性分子，在脂質異常類疾病的診療一體化方面具有廣闊的應用前景。因此需要研究者對探針分子結構進行更合理的設計，探索更多反應機制，滿足更多場景的實際應用需求。但是，目前的工作主要集中在基礎研究方面，在臨床上尚未廣泛應用?？傊螣晒馓结樀拈_發(fā)設計應考慮以下方面：（1）潛在的生物毒性可能會對人體生理功能產(chǎn)生不利影響；（2）熒光壽命短、響應時間長、靈敏度不高、化學合成過程繁瑣耗時等缺點會阻礙脂滴熒光探針的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展；（3）除通過合理的策略消除上述不利因素外，脂滴在活體動物模型中的活性、毒理學和藥代動力學評價測試，對于脂滴熒光探針的更廣泛應用至關重要。

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