基于代謝組學(xué)和腸道菌群研究黃芪甲苷對(duì)心肌梗死大鼠的作用

閆俊元，鐘鑫勤，趙玉翠，王小瑩

天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津 301617

心肌梗死是指因冠狀動(dòng)脈出現(xiàn)阻塞，心臟肌肉因缺乏血液供應(yīng)出現(xiàn)壞死，使心臟功能受損的一種病癥。臨床表現(xiàn)一般為胸痛為主、呼吸短促、心絞痛等[1-2]。其主要發(fā)作原因?yàn)楣跔顒?dòng)脈脂肪物質(zhì)的堆積，進(jìn)而造成冠狀動(dòng)脈的堵塞[3]。近些年，心肌梗死因具有極高的患病率和死亡率，已成為影響全球人類(lèi)健康的重要因素之一[4-5]。目前全球公認(rèn)的治療手段為服用阿司匹林、硝酸甘油和抗高血壓藥物，治療機(jī)制為分解血凝塊、降低血壓以及降低心臟需氧量[3]。雖然這些藥物具有較好的藥效，但也伴隨著較多的不良反應(yīng)。阿司匹林會(huì)伴隨腸胃不適以及耐藥性[6]，β 受體阻斷劑的不良反應(yīng)包括直立性低血壓、心動(dòng)過(guò)緩、誘發(fā)支氣管痙攣、加重慢性支氣管炎癥等[7]。因此，目前臨床采用化學(xué)藥物治療心肌梗死的策略仍有改善空間。近些年，中醫(yī)藥治療逐漸得到大眾認(rèn)可[8]。

2.2 不同b值下的診斷指標(biāo) 對(duì)不同b值下肺部結(jié)節(jié)良惡性的相關(guān)診斷指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示，b值為400 s/mm2時(shí)特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均為最高，而b值為400或800 s/mm2時(shí)，其敏感度均為91.28%，不同b值間敏感度相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

黃芪始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，性溫味甘，歸肺脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌的功效[9-10]。中醫(yī)臨床中，通常用黃芪與其他中藥配伍進(jìn)行心血管病治療。研究發(fā)現(xiàn)，黃芪桂枝五味加減方在臨床上可以改善心肌病患者的心功能[11]；防己黃芪湯加麻黃可以顯著改善慢性心衰患者病情[12]。黃芪甲苷是黃芪的主要活性成分，具有抗炎、抗氧化、抗病毒、促進(jìn)血管生成的藥理作用[13-14]。黃芪甲苷可以通過(guò)抑制Toll 樣受體4（Toll-like factor 4，TLR4）/髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信號(hào)通路緩解心肌梗死導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)，改善心功能指標(biāo)[15]。此外，黃芪甲苷能夠通過(guò)抑制miRNA-1 介導(dǎo)的炎癥和自噬，從而抑制脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）導(dǎo)致的心功能不全[16]。雖然目前關(guān)于黃芪甲苷對(duì)心肌梗死治療效果的研究相對(duì)完善，但是治療機(jī)制以及量-時(shí)-效關(guān)系方面還有很多可以探究的空間。因此，本研究旨在利用藥效學(xué)指標(biāo)探究黃芪甲苷量-時(shí)-效關(guān)系，并且利用非靶向代謝組學(xué)探討其治療機(jī)制通路，為今后臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF 級(jí)雄性SD 大鼠，體質(zhì)量（220±10）g，購(gòu)自北京維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物許可證編號(hào)SCXK（京）2016-0011。動(dòng)物飼養(yǎng)于SPF 級(jí)動(dòng)物房，自由進(jìn)水飲食。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)TCM-LAEC2020089）。

對(duì)于搜集時(shí)已初步理解的內(nèi)容，學(xué)生只要抓住教師的重點(diǎn)觀點(diǎn)和內(nèi)容，去掉無(wú)用信息，比對(duì)自己的理解和老師的講解有哪些差距，找到欠缺的方面，加深課本內(nèi)容的理解，課后就可以節(jié)約復(fù)習(xí)時(shí)間。

對(duì)照組給予頭孢曲松治療，靜脈給予注射用頭孢曲松鈉（上海羅氏制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H10983036，1.0 g/支，批號(hào) SH6345、SH6314），每次80 mg/kg，每日1次。

1.2 藥品與試劑

黃芪甲苷（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%，批號(hào)AB0162-1000）購(gòu)自埃法生物有限公司；10%多聚甲醛（批號(hào)3501）購(gòu)自北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司；無(wú)水乙醇、二甲苯、苯胺藍(lán)、鹽酸、氨水、中性樹(shù)脂、生理鹽水（批號(hào)10009259、10023418、71003644、10011018、10002108、10004160、69900793）購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；蘇木素-伊紅染液（批號(hào)G1076）購(gòu)自武漢谷歌生物科技；磷鎢酸、磷鉬酸（批號(hào)3705、3790）購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑廠；PBS 緩沖液、十二烷基硫酸鈉、Tris、甘氨酸、過(guò)硫酸銨、聚山梨酯20、MRS 肉湯（批號(hào)P1020、S8010、T8060、G8200、A1030、T8220、M8540）購(gòu)自北京索萊寶生物科技有限公司；肌酸激酶（creatine kinase，CK）、心肌鈣蛋白T（cardiac troponin-T，CTn-T）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）ELISA 試劑盒（批號(hào)MM-20460R1、MM-0795R1、MM-0873R1）購(gòu)自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司；甲醇、乙腈、蛋白酶抑制劑（批號(hào)R40121、4340863、36978）購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司；異丙醇、Immobilon Western 化學(xué)發(fā)光HRP 底物、PVDF 膜（批號(hào)34863、WBKLS、IPVH00010）購(gòu)自Merck 公司；2-氯-L-苯丙氨酸（批號(hào)B25643）購(gòu)自上海源葉生物科技生物有限公司；BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒（批號(hào)AR1189）購(gòu)自博士德生物工程有限公司；RIPA 強(qiáng)裂解液、SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液（批號(hào)P0013B、P0015L）購(gòu)自江蘇碧云天生物技術(shù)公司；磷酸酶抑制劑（批號(hào)K1015）購(gòu)自APExBio 生物科技有限公司；酪氨酸激酶2（Janus kinase2，JAK2）、p-JAK2、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、JAK1抗體（批號(hào)AF6022、AF3024、DF6087、AF5012）購(gòu)自 Affinity 公司；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體、HRP 標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG 二抗（批號(hào)ABS132004、ABS20163）購(gòu)自北京愛(ài)必信生物技術(shù)有限公司；信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子6（signal transducer and activator of transcription 6，STAT6）、p-STAT6 抗體（批號(hào)ab217998、ab263947）購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司；HRP 標(biāo)記的山羊抗兔IgG 二抗（批號(hào)14786）購(gòu)自美國(guó)CST 公司；Stripping Buffer（批號(hào)CW0056S）購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司；DNA 抽提試劑盒（批號(hào)D6538）購(gòu)自美國(guó)Bio-Tek 公司。

1.3 儀器

MX-F 型渦旋混合器（Servicebio Technology 公司）；JA1003 型千分之一電子天平（上海恒平科技儀器有限公司）；MDF-F-682 型?80 ℃低溫冰箱（Panasonic 電器有限公司）；BCD-256KT 型?20 ℃冰箱（青島海爾股份有限公司）；PL6500 型4 ℃冰箱、Legend Micri17R 型高速冷凍離心機(jī)、EVOS M7000 型細(xì)胞成像系統(tǒng)、UHPLC 液相色譜系統(tǒng)、質(zhì)譜儀、NanoDrop2000 型超微量分光光度計(jì)（美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司）；DK-98-11A 型電熱恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司）；INFINIRE M200型多功能酶標(biāo)儀（Nano Quant公司）；Vevo2100型小動(dòng)物超聲實(shí)時(shí)影像系統(tǒng)（加拿大Visual Sonics公司）；CN6-180 型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技公司）；DNP-9082 型電熱恒溫培養(yǎng)箱（蘇州威爾實(shí)驗(yàn)有限公司）；R500 型動(dòng)物呼吸麻醉機(jī)（瑞沃德生命科技有限公司）；臺(tái)式快速離心濃縮干燥器（太倉(cāng)市華美生化儀器廠）；氮?dú)獯祾邇x（上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司）；ES1000 型熱蓋金屬?。ê贾萑鹫\(chéng)儀器有限公司）；552BR070914 小型垂直電泳槽、基礎(chǔ)電泳儀（美國(guó)Bio-Rad 公司）；組織研磨儀（武漢賽維爾生物科技有限公司）；多功能成像分析系統(tǒng)（美國(guó)GE 公司）；PCR 儀（美國(guó)ABI 公司）；MISEQ測(cè)序儀、HISEQ 測(cè)序儀、Illumina MiSeq Platform（美國(guó)Illumina 公司）；微型熒光計(jì)（美國(guó)Turner Bio Systems 公司）。

2 方法

2.1 黃芪甲苷對(duì)心肌梗死大鼠的量-時(shí)-效關(guān)系考察

2.1.1 心肌梗死大鼠的模型建立及心功能評(píng)價(jià) 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，術(shù)前禁食12 h，根據(jù)體質(zhì)量腹腔麻醉后進(jìn)行手術(shù)，在心臟處從外皮依次分離至胸肌，在左胸第4 肋間處用止血鉗撐開(kāi)胸廓，肉眼可見(jiàn)心臟；將心包膜破開(kāi)，擠壓右胸使心臟暴露于胸壁外；持提前備好浸沒(méi)于生理鹽水的5/0 無(wú)損傷絲線(xiàn)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支。結(jié)扎后再次撐開(kāi)胸廓令心臟跳回胸腔，松開(kāi)止血鉗使胸肌和外皮恢復(fù)閉合，排空空氣后關(guān)閉胸腔，以2/0 無(wú)損傷絲線(xiàn)分別縫合肌層及皮膚。假手術(shù)組采用同樣方法開(kāi)胸腔擠出心臟，以5/0 絲線(xiàn)只穿過(guò)不結(jié)扎，之后進(jìn)行排氣縫皮。手術(shù)操作后將大鼠仰面朝上平躺放至電熱毯，待其蘇醒后放回鼠籠進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)。

傳統(tǒng)的節(jié)日和節(jié)俗歷史悠久，源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，集中體現(xiàn)了中華傳統(tǒng)文化的核心價(jià)值，生動(dòng)展示了中國(guó)人豐富多彩的精神世界，是民族特色和民族個(gè)性的具體反映。 同時(shí)，它們與民眾生活密切相連，深具活力和影響力，是活態(tài)的傳統(tǒng)文化表現(xiàn)形式，并在世代傳承中起到加強(qiáng)血緣和社會(huì)紐帶、促進(jìn)團(tuán)結(jié)與文化認(rèn)同的作用。 它們記錄著中華民族數(shù)千年的歷史，凝聚了民眾的生活和情感，以全民參與的方式傳承文化血脈、提振民族精神、強(qiáng)化歷史記憶，具有深刻的意義和深遠(yuǎn)的影響。 絢麗多彩的節(jié)日，是我國(guó)人民代代傳承的珍貴文化，也是世界文明的瑰寶。 它們照亮了五千年的歷史，也照耀著未來(lái)的天空。

所有大鼠造模1 d 后進(jìn)行心動(dòng)超聲檢測(cè)。運(yùn)用超高分辨率小動(dòng)物超聲實(shí)時(shí)影像儀檢測(cè)大鼠左心室功能，將大鼠放置于小動(dòng)物麻醉盒中進(jìn)行氣體麻醉，麻醉后將大鼠用膠帶綁于操作臺(tái)，操作臺(tái)向右下傾斜30°，調(diào)整探頭，利用B 型超聲切面獲得左心室、主動(dòng)脈和二尖瓣瓣葉圖像，進(jìn)一步切換至M 超聲界面，并調(diào)整取樣線(xiàn)的位置，截取M 界面超聲圖像，通過(guò)對(duì)大鼠收縮期和舒張期進(jìn)行測(cè)量，獲得左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）、左室短軸縮短率（left ventricular fraction shorting，LVFS）、左心室后壁（left ventricular posterior wall，LVPW）等。采用射血分?jǐn)?shù)（ejection fraction，EF）數(shù)值＜55%作為造模成功評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，予以保留分組，不符合條件的大鼠予以剔除。

2.1.2 動(dòng)物分組、給藥及給藥后心功能評(píng)價(jià) 取8只正常SD 大鼠作為空白組，經(jīng)過(guò)假手術(shù)操作的8只大鼠作為假手術(shù)組，將造模成功的大鼠分為模型組及黃芪甲苷低、中、高劑量（10、20、40 mg/kg）組和阿托伐他?。?0 mg/kg）組，每組8 只。各給藥組ig 相應(yīng)藥物（5 mL/kg），對(duì)照組、假手術(shù)組和模型組ig 等體積的水，1 次/d，連續(xù)給藥14、28 d。給藥后心功能評(píng)價(jià)方法同“2.1.1”項(xiàng)。

2.1.3 樣品采集 各組大鼠分別于各組時(shí)間點(diǎn)取材。大鼠麻醉后腹主動(dòng)脈取血，分離血清，放置于?80 ℃冰箱。取血后迅速取下心、肺、肝、脾、腎，每組隨機(jī)取3 只大鼠的心臟放入10%多聚甲醛固定，用于病理染色。其余迅速放入凍存管，置于液氮過(guò)夜，放入?80 ℃冰箱保存。分別于給藥14、28 d 采集各組大鼠糞便樣本，用75%乙醇消毒的鑷子和無(wú)菌EP 管取大鼠新鮮糞便2～3 粒，放于?80 ℃冰箱保存。

2.1.4 ELISA 檢測(cè)血清中CK、CTn-T、LDH 水平根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)各組大鼠血清中CK、CTn-T、LDH 水平。

節(jié)慶型濱水動(dòng)態(tài)人文景觀活動(dòng)主要包括水上飄色、龍舟活動(dòng)、各水神誕、行通濟(jì)、水陸法會(huì)和中秋賞月等等活動(dòng)。其中，（圖3、表2）是對(duì)節(jié)慶型傳統(tǒng)濱水動(dòng)態(tài)人文景觀活動(dòng)的活動(dòng)類(lèi)型、活動(dòng)時(shí)間、主要行為、主要載體及活動(dòng)性質(zhì)的初步總結(jié)。

（1）HE 染色：取病理切片，二甲苯脫蠟2 次，無(wú)水乙醇清洗2 次，梯度乙醇沖洗，自來(lái)水洗，然后用蘇木素染色，10%鹽酸乙醇分化，再用稀氨水返藍(lán)，伊紅染色，脫水，二甲苯處理后封片，于顯微鏡下觀察并拍照。

3.2.2 差異代謝物鑒定與篩選 通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)的對(duì)比與分析，鑒定得到化合物，進(jìn)一步篩選給藥后回調(diào)代謝物。通過(guò)比較篩選找出給藥后回調(diào)的代謝物共有48 個(gè)差異代謝物（表4）。

2.2 黃芪甲苷治療心肌梗死的作用機(jī)制研究

2.2.1 樣品預(yù)處理 根據(jù)結(jié)果，選取給藥28 d 后空白組、模型組、黃芪甲苷中劑量組大鼠血清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。吸取50 μL 血清樣品，加入200 μL 預(yù)冷的色譜純乙腈，4 ℃、13 000 r/min 離心10 min。吸取上清液，真空干燥，用含內(nèi)標(biāo)物（2-氯-L-苯丙氨酸）的100 μL 乙腈-水（3∶1）復(fù)溶后，4 ℃、13 000 r/min 離心15 min，吸取上清液至進(jìn)樣瓶中，上機(jī)并進(jìn)行分析。

2.2.2 LC-MS 檢測(cè)

（1）色譜條件：Waters Acquity UPLC HSS T3 色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），流動(dòng)相A 為95%水＋5%乙腈（含0.1%甲酸），流動(dòng)相B 為47.5%乙腈＋47.5%異丙醇＋5%水（含0.1%甲酸）。正離子梯度洗脫程序：0～3 min，0～20% B；3～4.5 min，20%～35% B；4.5～5 min，35%～100% B；5～6.3 min，100% B；6.3～6.4 min，100% B～100% A；6.4～8 min，100% A。負(fù)離子梯度洗脫程序：0～1.5 min，0～5%B；1.5～2 min，5%～10% B；2～4.5 min，10%～30%B；4.5～5 min，30%～100% B；5～6.3 min，100% B；6.3～6.4 min，100% B～100% A；6.4～8 min，100%A。體積流量0.40 mL/min；進(jìn)樣量4 μL；柱溫40 ℃。

（2）質(zhì)譜條件：樣品質(zhì)譜信號(hào)采集采用正負(fù)離子掃描模式，掃描范圍為m/z70～1 050。鞘氣體積流量為50 arb，輔助氣體積流量為13 arb，輔助氣加熱溫度為425 ℃，正模式離子噴霧電壓設(shè)置為3 500 V，負(fù)模式離子噴霧電壓設(shè)置為?3 500 V，離子傳輸管溫度為325 ℃，歸一化的碰撞能為20、40、60 V 循環(huán)碰撞能。一級(jí)質(zhì)譜分辨率60 000 Hz，二級(jí)質(zhì)譜分辨率7 500 Hz，采用DDA 模式采集數(shù)據(jù)。

2.2.3 數(shù)據(jù)處理 采用代謝組學(xué)軟件Progenesis QI進(jìn)行峰提取、對(duì)齊、鑒定等，最終得到含保留時(shí)間、峰面積、質(zhì)荷比以及鑒定信息的數(shù)據(jù)矩陣。并通過(guò)該軟件特征峰進(jìn)行搜庫(kù)鑒定，將MS 和MS/MS 質(zhì)譜信息與代謝數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行匹配，設(shè)定MS 誤差小于1×10?5，同時(shí)根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜匹配得分鑒定代謝物。所用數(shù)據(jù)庫(kù)包括http://www.hmdb.ca/、https://metlin.scripps.edu/等主流公共數(shù)據(jù)庫(kù)以及平臺(tái)自建的數(shù)據(jù)庫(kù)。將相關(guān)代謝物代入Ingenuity Pathway Analysis 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析。

2.2.4 Western blotting 檢測(cè)心肌組織IL-6、JAK1、JAK2、p-JAK2、STAT6、p-STAT6 蛋白表達(dá) 取給藥28 d各組大鼠左心室樣品加入裂解液破碎，4 ℃、12 000 r/min 離心10 min，吸取上清液進(jìn)行蛋白定量，100 ℃加熱10 min 使蛋白變性。蛋白樣品經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜，于5%脫脂牛奶中封閉90 min，分別加入一抗，4 ℃搖床孵育過(guò)夜，TBST 洗滌3 次，加入二抗孵育2 h，TBST 洗滌3 次，顯色曝光。

2.3 黃芪甲苷對(duì)大鼠腸道微生物多樣性的改善作用研究

2.3.1 DNA 抽提和PCR 擴(kuò)增 根據(jù)結(jié)果，取給藥28 d 后空白組、模型組、黃芪甲苷中劑量組大鼠糞便進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)E.Z.N.A.?soil 試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作提取DNA，對(duì)V3～V4 可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增程序?yàn)?5 ℃、3 min，隨后27 個(gè)循環(huán)（95 ℃、30 s，55 ℃、30 s，72 ℃、30 s），最后72 ℃、10 min。擴(kuò)增體系總體積為20 μL。

轉(zhuǎn)發(fā)錦鯉的背后，是人們對(duì)吉祥歡樂(lè)、好運(yùn)的向往，盡管只有千萬(wàn)分之幾乃至更低的中獎(jiǎng)幾率，這種人性的需求是不會(huì)過(guò)時(shí)的。此外，轉(zhuǎn)發(fā)一條企業(yè)的相關(guān)微博，并不需要很高的成本，也不需要花費(fèi)很多的時(shí)間成本，因此即便是小概率的中獎(jiǎng)幾率，加上錦鯉的寓意以及吸引力極強(qiáng)的禮單，使得人們都抱有試一試的心態(tài)，是一種“高投機(jī)性行為”。

3.1.2 各組大鼠心臟形態(tài)及病理觀察 如圖3、4 所示，給藥14、28 d 的空白組、假手術(shù)組大鼠心臟形態(tài)正常，而模型組大鼠心臟的左前降支冠狀動(dòng)脈區(qū)域明顯有大面積的梗死，心室部位變白梗死，心室壁顯著變薄，心臟結(jié)構(gòu)松散；各給藥組大鼠心臟結(jié)構(gòu)趨近正常，心室壁厚度也有明顯改善。

2.3.3 生物信息學(xué)分析 基于Illumina HiSeq 測(cè)序平臺(tái)對(duì)擴(kuò)增的16S 區(qū)域特點(diǎn)構(gòu)建相對(duì)應(yīng)的小片段文庫(kù)進(jìn)行雙末端測(cè)序。通過(guò)對(duì)Reads 拼接濾過(guò)，使用UPARSE 軟件（ version 7.1 http://drive5.com/uparse/），通過(guò)97%的相似度對(duì)序列進(jìn)行操作分類(lèi)單元（operational taxonomic units，OTU）聚類(lèi)，且在聚類(lèi)的過(guò)程中去除單序列和嵌合體。對(duì)序列進(jìn)行注釋并設(shè)定閾值為70%根據(jù)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)其進(jìn)行比對(duì)，同時(shí)采用α 多樣性分析、β 多樣性分析等比較各組之間的差異，挖掘心梗對(duì)腸道微生物的影響以及黃芪甲苷對(duì)心梗大鼠腸道微生物的改善作用。

2.3.4 益生菌豐度體外驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 黃芪甲苷用MRS 肉湯配制0.500 000、0.250 000、0.125 000、0.062 500、0.031 250、0.015 625 mg/mL 的給藥溶液，在96 孔板中分別加入100 μL 最佳稀釋倍數(shù)的Lactobacillus_johnsonii菌液以及100 μL 藥液，放入酶標(biāo)儀中，設(shè)置25 個(gè)循環(huán)，每循環(huán)2 h，波長(zhǎng)600 nm，溫度37 ℃，測(cè)定吸光度（A）值。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA）。

3 結(jié)果

3.1 黃芪甲苷對(duì)心梗大鼠的量-時(shí)-效關(guān)系

3.1.1 黃芪甲苷對(duì)心肌梗死大鼠心功能的影響 給藥14 d 后，如圖1 所示，與空白組和假手術(shù)組比較，模型組大鼠左心室容積明顯擴(kuò)張，左室壁顯著變窄，收縮能力減弱。如表1 所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠EF、FS 顯著降低（P＜0.001）；與模型組比較，黃芪甲苷中、高劑量組大鼠EF、FS 均顯著改善（P＜0.05、0.01、0.001）。

表1 給藥14 d 各組大鼠EF 和FS (±s )Table 1 EF and FS of rats in each group after 14 d of administration (±s )

表1 給藥14 d 各組大鼠EF 和FS (±s )Table 1 EF and FS of rats in each group after 14 d of administration (±s )

組別 劑量/(mg·kg?1) n/只 EF/% FS/%空白 — 8 79.170±5.705 49.723±5.698假手術(shù) — 8 77.391±4.226 47.730±4.229模型 — 8 35.900±10.519*** 18.121±5.903***黃芪甲苷 10 8 55.030±12.162 30.261±8.179##20 8 60.937±10.254## 34.378±7.619###40 8 58.798±12.352# 32.609±8.427###阿托伐他汀 20 8 63.672±11.047## 36.341±7.842###

與假手術(shù)組比較：**P＜0.01 ***P＜0.001；與模型組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01 ###P＜0.001，下表同。**P < 0.01 ***P < 0.001 vs sham group; #P < 0.05 ##P < 0.01 ###P <0.001 vs model group, same as below tables.

圖1 給藥14 d 各組大鼠超聲M 模式圖Fig.1 Ultrasonic M-mode long axis section of rats in each group after 14 d of administration

給藥28 d 后，如圖2 所示，相比于給藥14 d組，模型組左心室損傷更加嚴(yán)重，且各給藥組可明顯改善。由表2 可知，與假手術(shù)組相比，模型組EF、FS 顯著降低（P＜0.001）；與模型組相比，黃芪甲苷低、中、高劑量組的EF、FS 均顯著改善（P＜0.01、0.001）。

表2 給藥28 d 各組大鼠EF 和FS (±s)Table 2 EF and FS of rats in each group after 28 d of administration (±s)

表2 給藥28 d 各組大鼠EF 和FS (±s)Table 2 EF and FS of rats in each group after 28 d of administration (±s)

組別 劑量/(mg·kg?1) n/只 EF/% FS/%空白 — 8 82.280±4.603 52.947±5.191假手術(shù) — 8 81.628±5.544 52.242±6.262模型 — 8 34.486±7.032*** 17.456±3.941***黃芪甲苷 10 7 51.176±10.003## 27.604±6.153##20 6 58.390±10.871### 32.681±7.613###40 7 52.452±13.357### 29.021±10.069##阿托伐他汀 20 8 50.888±10.315## 27.516±6.677##

圖2 給藥28 d 各組大鼠超聲M 模式圖Fig.2 Ultrasonic M-mode long axis section of rats in each group after 28 d of administration

2.3.2 Illumina Miseq 測(cè)序 PCR 產(chǎn)物利用Axy Prep DNA Gel Extraction Kit 進(jìn)行純化，Tris-HCl 洗脫，2%瓊脂糖電泳檢測(cè)。利用Quanti Fluor?-ST 進(jìn)行檢測(cè)定量。PE 2×300 文庫(kù)為上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司根據(jù)Illumina MiSeq 平臺(tái)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程將純化后的擴(kuò)增片段所構(gòu)建。

2.1.5 心臟病理染色

圖3 給藥14 d 各組大鼠心臟形態(tài) (A)、HE 染色 (B) 和Masson 染色 (C)Fig.3 Cardiac morphology (A), HE staining (B) and Masson staining (C) of rats in each group after 14 d of administration

圖4 給藥28 d 各組大鼠心臟形態(tài) (A)、HE 染色 (B) 和Masson 染色 (C)Fig.4 Cardiac morphology (A), HE staining (B) and Masson staining (C) of rats in each group after 28 d of administration

HE 染色結(jié)果顯示，空白組、假手術(shù)組心臟形態(tài)規(guī)整，心肌細(xì)胞形態(tài)正常，無(wú)嚴(yán)重細(xì)胞破損情況；模型組心室部位有大面積梗死，并有心室腔擴(kuò)大、心室壁變薄的現(xiàn)象，梗死區(qū)域心肌細(xì)胞壞死現(xiàn)象嚴(yán)重，大部分細(xì)胞發(fā)生炎性浸潤(rùn)、水腫，細(xì)胞形態(tài)不整齊；與給藥14 d 模型組比較，給藥28 d 模型組更加嚴(yán)重；給藥14 d 黃芪甲苷低、中劑量組相比模型組改善作用不明顯；給藥14 d 黃芪甲苷高劑量組恢復(fù)較明顯，心室壁變厚，梗死面積縮小，炎性浸潤(rùn)減少；給藥28 d 黃芪甲苷低劑量組改善效果不明顯，而給藥28 d 黃芪甲苷中、高劑量組改善效果較好，炎性浸潤(rùn)明顯減少。

Masson 染色結(jié)果顯示，模型組膠原纖維沉積最嚴(yán)重，且給藥28 d 的模型組更嚴(yán)重。給藥14 d 黃芪甲苷低劑量組膠原纖維沉積略有減少，心室腔以及心室壁有所改善；給藥14 d 黃芪甲苷中、高劑量組和阿托伐他汀組改善效果非常明顯，膠原纖維沉淀明顯減少。與給藥28 d 模型組比較，黃芪甲苷低劑量組和阿托伐他汀組的改善效果并不明顯；而黃芪甲苷中、高劑量組改善明顯。

Graham的本職工作是音樂(lè)制作人，在攝影方面他是個(gè)新手，但這絲毫不會(huì)阻礙他的全情投入。他平時(shí)最常用的一臺(tái)相機(jī)是索尼 Sony A7 II，對(duì)他而言，電子取景器是必不可少的功能之一。倫敦相機(jī)交易所在Bristol的鮑德溫街有一家分店，Graham和Craig都是這家店的客戶(hù)。而這家分店正好有多余的索尼相機(jī)可以提供，趁此便利，Graham在本次拍攝中取來(lái)了一臺(tái)最新的索尼A9，想要感受一下這臺(tái)旗艦級(jí)相機(jī)。

3.1.3 各組大鼠心梗標(biāo)志物水平 如表3 所示，給藥28 d，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清中心梗標(biāo)志物CK、CTn-T、LDH 水平顯著升高（P＜0.01、0.001）；與模型組比較，黃芪甲苷各劑量組心梗標(biāo)志物水平均顯著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。綜合結(jié)果可知，給藥28 d 治療效果優(yōu)于給藥14 d，且給藥28 d 黃芪甲苷中劑量組效果最優(yōu)，因此后續(xù)代謝組學(xué)和腸道菌群研究采用給藥28 d 空白組、模型組、黃芪甲苷中劑量組的樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

實(shí)施創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)戰(zhàn)略，關(guān)乎東營(yíng)市經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展全局和“兩個(gè)率先”進(jìn)程，必須在工作推進(jìn)上有更大力度，在政策支持上有更大舉措，在營(yíng)造環(huán)境上有更大作為。圍繞“黃藍(lán)兩大戰(zhàn)略”和“兩個(gè)率先”目標(biāo)任務(wù)要求，應(yīng)當(dāng)加快探索對(duì)策措施，有效促進(jìn)科技與經(jīng)濟(jì)社會(huì)銜接融合，推動(dòng)區(qū)域發(fā)展向創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)變。

表3 給藥28 d 各組大鼠血清中CK、CTn-T 和LDH 水平 (±s)Table 3 CK, CTn-T and LDH levels in serum of rats in each group after 28 d of administration (±s)

表3 給藥28 d 各組大鼠血清中CK、CTn-T 和LDH 水平 (±s)Table 3 CK, CTn-T and LDH levels in serum of rats in each group after 28 d of administration (±s)

組別 劑量/(mg·kg?1) n/只 CK/(ng·L?1) CTn-T/(ng·L?1) LDH/(ng·L?1)空白 — 8 148.533±8.769 39.434±3.008 26.381±0.306假手術(shù) — 8 157.700±5.602 38.524±1.893 25.153±0.981模型 — 8 170.890±6.211** 47.475±4.482*** 29.296±1.468***黃芪甲苷 10 7 150.895±3.732### 41.229±2.100## 26.788±1.284###20 6 151.295±9.257### 39.032±3.297## 26.495±0.708###40 7 154.723±3.157## 42.188±3.687# 26.474±0.710###阿托伐他汀 20 8 169.804±8.639 46.336±5.329 28.391±0.333

3.2 黃芪甲苷治療心肌梗死的作用機(jī)制研究

3.3.1 物種組成分析 如圖8 所示，與空白組比較，模型組 unclassified_f_Oscillospiraceae、g_Adlercreutzia、g_Papillibacter、g_Rodentibacter屬水平豐度顯著降低（P＜0.05），g_Dubosiella、g_Dorea屬水平豐度顯著上調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，黃芪甲苷中劑量組unclassified_f_Oscillospiraceae、g_Adlercreutzia、g_Papillibacter、g_Rodentibacter屬水平豐度顯著升高（P＜0.05），g_Dubosiella、g_Dorea屬水平豐度顯著下調(diào)（P＜0.05）。

圖5 正 (A)、負(fù) (B) 離子模式下質(zhì)控樣本的總離子流圖Fig.5 Total ion flow of quality control sample under positive (A) and negative (B) ion modes

（2）Masson 染色：與HE 染色操作步驟相同，直至稀氨水返藍(lán)后用麗春紅染色，用冰醋酸水溶液浸洗，用磷鉬酸分化，苯胺藍(lán)染后脫水，二甲苯浸洗后封片，于顯微鏡下觀察并拍照。

表4 黃芪甲苷給藥后回調(diào)差異代謝物Table 4 Callback of differential metabolites after administration of astragaloside IV

3.2.3 差異代謝物影響的相關(guān)基因 利用IPA 對(duì)48個(gè)回調(diào)差異代謝物進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析，構(gòu)建“代謝物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)（圖6），可知代謝物參與的相關(guān)靶點(diǎn)及通路。其中，STAT6 經(jīng)過(guò)磷酸化發(fā)揮調(diào)控免疫、炎癥反應(yīng)的作用，且其他靶點(diǎn)也多與炎癥相關(guān)，如IL-6、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（transforming growth factor-β，TGFβ）等。

圖6 給藥后回調(diào)差異代謝物網(wǎng)絡(luò)分析Fig.6 Network analysis of callback differential metabolites after administration

3.2.4 黃芪甲苷對(duì)心肌梗死大鼠心臟組織中IL-6/JAK/STAT6 通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 如圖7 所示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心臟組織IL-6、p-JAK2/JAK2、p-STAT6/STAT6 和JAK1 蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05、0.001）；與模型組比較，黃芪甲苷中劑量組IL-6 和JAK1 蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），黃芪甲苷低劑量組p-JAK2/JAK2蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），黃芪甲苷低、中劑量組p-STAT6/STAT6 蛋白表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05、0.01）。

圖7 黃芪甲苷對(duì)心肌梗死大鼠心臟組織中IL-6/JAK/STAT6 通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 (±s , n = 3)Fig.7 Effect of astragaloside IV on expressions of IL-6/JAK/STAT6 pathway related-proteins in cardiac tissue of rats with myocardial infarction (±s , n = 3)

3.3 黃芪甲苷對(duì)大鼠腸道微生物多樣性的改善作用

3.2.1 總離子色譜 正、負(fù)離子模式下，質(zhì)控樣品的總離子色譜圖見(jiàn)圖5。表明該檢測(cè)條件下，峰形良好，分布相對(duì)均勻。

圖8 屬 (A)、種 (B) 水平物種組成組間差異Fig.8 Genus (A) and species (B) level differences between groups of species composition

與空白組比較，模型組 unclassified_f_Oscillospiraceae、uncultured_bacterium_g_Adlercreutzia等菌種水平豐度顯著下調(diào)（P＜0.05 ），uncultured_bacterium_g_Dubosiella、uncultured_bacterium_g_Dorea等菌種水平豐度顯著上調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，黃芪甲苷中劑量組unclassified_f_Oscillospiraceae、uncultured_bacterium_g_Adlercreutzia等菌種水平豐度顯著上調(diào)（P＜0.05），uncultured_bacterium_g_Dubosiella、uncultured_bacterium_g_Dorea等菌豐度顯著降低（P＜0.05）。

3.3.2 差異代謝物與腸道菌群結(jié)果聯(lián)合分析 將腸道生物多樣性結(jié)果與48 種代謝物進(jìn)行聯(lián)合分析，屬水平物種g_Dubosiella、g_norank_f_Muribaculaceae與4-乙烯基苯酚硫酸鹽、2-苯乙醇葡萄糖醛酸等代謝物呈正相關(guān)（P＜0.05、0.01）；與3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸、12-羥基十七烷酸等代謝物呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）；屬水平物種g_Intestinimonas、g_Roseburia、Oscillospiraceae與苯甲酸、N-乙?；鶎?duì)氨基苯甲酸、馬尿酸等代謝物呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05，圖9）。

為確認(rèn)SL-ASIA量表測(cè)量的有效性，本文將3個(gè)村寨獲得的樣本按各村寨人數(shù)比例隨機(jī)分成人數(shù)基本相同的兩組（Ecklund，2005；Reynolds，Ecklund &Terrance，2011）。使用一組樣本借助探索性因子分析檢驗(yàn)侗寨原住民的文化適應(yīng)情況及內(nèi)在維度，使用另一組樣本借助驗(yàn)證性因子分析來(lái)交叉驗(yàn)證第一組樣本里提出的維度模型，以觀察和確認(rèn)派生出的各個(gè)維度的內(nèi)部一致性。

圖9 屬水平代謝組學(xué)和微生物組學(xué)聯(lián)合分析Fig.9 Combined analysis of metabolomics and microbiome at genus level

3.3.3 益生菌體外驗(yàn)證 0～12 h，各質(zhì)量濃度的黃芪甲苷可在體外上調(diào)益生菌Lactobacillus_johnsonii種水平豐度，且0.062 500 mg/mL 的黃芪甲苷促進(jìn)益生菌生長(zhǎng)程度最明顯（圖10）。

圖10 0～12 h 內(nèi)Lactobacillus_johnsonii 生長(zhǎng)程度Fig.10 Degree of Lactobacillus_johnsonii growth in 0—12 h

4 討論

目前臨床中治療心肌梗死的常用藥為β 受體阻滯劑[17-18]，可通過(guò)降低心肌細(xì)胞收縮力的負(fù)性肌力等作用，減少心肌耗氧量[19]。但此類(lèi)藥物的臨床治療需要在患者發(fā)病短時(shí)間內(nèi)使用小劑量治療并長(zhǎng)時(shí)期使用才可降低患者發(fā)病率及死亡率[20]，且在停藥之后會(huì)出現(xiàn)心絞痛等嚴(yán)重不良反應(yīng)[21]。中醫(yī)藥治療因具有多成分、多靶點(diǎn)且不良反應(yīng)較小的特點(diǎn)，逐漸得到大眾認(rèn)可。防己黃芪湯是中醫(yī)臨床治療心血管疾病的常用方之一，課題組前期已探討防己黃芪湯加減方對(duì)心血管疾病的治療作用，本研究擬探究其君藥黃芪的主要有效成分的量-時(shí)-效關(guān)系及作用機(jī)制，為新藥開(kāi)發(fā)及組分中藥開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

阿東心里一直都悲傷著。聽(tīng)羅爹爹跟母親嘮叨，像他們活著時(shí)那樣說(shuō)話(huà)，便心生感動(dòng)。再聽(tīng)到后面兩句，他險(xiǎn)些想笑了。

綜上,對(duì)任意的ε>0,存在N,當(dāng)n>N時(shí), ρG(xn,1)

在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)檢測(cè)超聲心動(dòng)圖，發(fā)現(xiàn)相比給藥14 d 模型組，給藥28 d 模型組更嚴(yán)重；且給藥14 d 黃芪甲苷中、高劑量組EF、FS 有明顯改善，給藥28 d 黃芪甲苷各劑量組均可顯著改善EF、FS，由此證明黃芪甲苷可以改善左前降至結(jié)扎手術(shù)所致心肌梗死的心臟收縮能力，且給藥28 d 效果優(yōu)于給藥14 d。根據(jù)病理染色發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠心臟左心室腔明顯擴(kuò)張，炎性浸潤(rùn)嚴(yán)重，正常區(qū)域也伴隨著細(xì)胞水腫的現(xiàn)象，且給藥28 d 模型組比給藥14 d 更嚴(yán)重；給藥14 d 僅黃芪甲苷高劑量組改善較明顯，炎性浸潤(rùn)顯著減少，梗死面積變?。欢o藥28 d 黃芪甲苷中、高劑量組均可明顯改善，梗死面積明顯減少，且心肌纖維化明顯改善。研究表明，心肌梗死過(guò)程中，早期的炎癥是誘導(dǎo)壞死心肌修復(fù)的必然條件，但壞死細(xì)胞誘導(dǎo)的過(guò)度且長(zhǎng)時(shí)間炎癥會(huì)導(dǎo)致不可逆的持續(xù)性損傷和壞死區(qū)域擴(kuò)大，甚至導(dǎo)致心肌纖維化，造成心衰[22]。據(jù)報(bào)道，黃芪甲苷可通過(guò)促進(jìn)損傷細(xì)胞自噬，從而抑制其誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，防止進(jìn)一步加重病情[16]。CK、CTn-T 和LDH 在臨床中通?？勺鳛轭A(yù)測(cè)心肌梗死的指標(biāo)[23-26]。黃芪甲苷可以顯著減少給藥28 d 大鼠血清中心梗標(biāo)志物，且中劑量組效果最優(yōu)。綜合結(jié)果判斷量-時(shí)-效關(guān)系，認(rèn)為給藥28 d 治療效果優(yōu)于給藥14 d。

根據(jù)非靶向代謝組學(xué)結(jié)果可知，黃芪甲苷給藥后可回調(diào)血清內(nèi)48 種回調(diào)代謝物水平，而其中部分代謝物的作用已有文獻(xiàn)記載，例如吉馬酮代謝物在給予黃芪甲苷后相比模型組顯著升高，此類(lèi)代謝物具有抗炎、抗氧化應(yīng)激、抗腫瘤等藥理作用，可以抑制模型大鼠IL-6、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的表達(dá)，并且上調(diào)TGFβ1 和IL-10 水平發(fā)揮抗炎活性[27]。模型組腎上腺素紅代謝物含量顯著升高，給予黃芪甲苷后降低，研究表明腎上腺素紅會(huì)顯著降低大鼠心率和冠狀動(dòng)脈血流量[28]。將48 個(gè)回調(diào)代謝物進(jìn)行京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析，結(jié)果表明主要與苯丙氨酸代謝、抗壞血酸和醛酸代謝等相關(guān)。其中，苯丙氨酸代謝與心血管疾病有密切聯(lián)系。血漿中苯丙氨酸水平升高也是預(yù)測(cè)臨床心衰患者死亡率的重要標(biāo)準(zhǔn)之一[29]。通過(guò)IPA 數(shù)據(jù)庫(kù)分析出的靶點(diǎn)圖發(fā)現(xiàn)，STAT6、整合素αM（integrin alpha M，ITGAM）、IL-6、IL-1β 等靶點(diǎn)多與炎癥相關(guān)。且據(jù)報(bào)道，重要代謝物吉馬酮可以通過(guò)調(diào)控JAK/STAT 通路誘導(dǎo)人肝癌HepG2 細(xì)胞凋亡[30]，而且還可以通過(guò)抑制IL-6、NF-κB 等通路上游細(xì)胞因子發(fā)揮抗炎作用[27,31]。此外，JAK/STAT 通路與苯丙氨酸代謝密切相關(guān)[32]，可通過(guò)STAT 酪氨酸突變?yōu)楸奖彼醽?lái)抑制IL-6 的信號(hào)傳導(dǎo)，密切參與炎癥反應(yīng)[33]。因此，下一階段實(shí)驗(yàn)針對(duì)IL-6/JAK/STAT6 這一通路進(jìn)行驗(yàn)證。Western blotting 結(jié)果顯示，黃芪甲苷可以顯著抑制心臟組織IL-6 表達(dá)，進(jìn)而導(dǎo)致抑制JAK2 和STAT6的磷酸化。在篩選JAK 其他亞型時(shí)，發(fā)現(xiàn)心臟組織中JAK1 表達(dá)有顯著的變化趨勢(shì)。與假手術(shù)組比較，模型組JAK1 蛋白表達(dá)水平顯著升高，黃芪甲苷中劑量組JAK1 蛋白表達(dá)水平顯著降低。研究表明，JAK1 總蛋白的激活會(huì)誘導(dǎo)JAK2 的磷酸化[34-35]。此外，Chen 等[36]研究發(fā)現(xiàn)，JAK1 總蛋白表達(dá)量與細(xì)胞自噬程度呈正相關(guān)，而黃芪甲苷具有調(diào)控自噬作用，可以通過(guò)抑制過(guò)度自噬，從而達(dá)到減少損傷的效果[37-39]。推測(cè)黃芪甲苷不僅通過(guò) IL-6/JAK2/STAT6 信號(hào)通路抑制心梗炎癥反應(yīng)，還可通過(guò)抑制JAK1 總蛋白表達(dá)，抑制對(duì)JAK2 蛋白的促磷酸化作用，并且調(diào)控細(xì)胞自噬，減緩病情加重。

由表1及表2可知,所測(cè)CO2濃度誤差百分比控制在2%以?xún)?nèi),溫度的誤差百分比在4%以?xún)?nèi),可以滿(mǎn)足航站樓環(huán)境參數(shù)采集要求。

腸道菌群與心血管疾病之間有密切聯(lián)系，心肌梗死的發(fā)生會(huì)導(dǎo)致腸道菌群組成改變，而菌群多樣性的改善也會(huì)調(diào)節(jié)體內(nèi)代謝物水平，輔助治療心肌梗死[40]。結(jié)果表明，黃芪甲苷可以回調(diào)部分菌群豐度，且文獻(xiàn)記載部分屬水平菌群有明確作用。研究表明，在給予預(yù)防肥胖的藥物后小鼠腸道微生物菌群中unclassified_f_Oscillospiraceae 豐度顯著上調(diào)[41]。并且在谷維素緩解高脂肪高膽固醇飲食導(dǎo)致的高膽固醇脂血癥實(shí)驗(yàn)中，unclassified_f_ Oscillospiraceae 的豐度也會(huì)因高脂血癥減輕而上調(diào)[42]，而高脂肪飲食是導(dǎo)致心肌梗死、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的重要因素[43]，由此預(yù)測(cè)此屬菌群的上調(diào)會(huì)發(fā)揮預(yù)防肥胖的作用。g_Adlercreutzia可化學(xué)吸收IL-1β、IL-6，證明g_Adlercreutzia菌屬水平增加可以減輕機(jī)體的炎癥，緩解病情[44-46]。表明黃芪甲苷通過(guò)上調(diào)g_Adlercreutzia豐度發(fā)揮抗炎作用，改善心肌梗死。丁酸鹽是g_Papillibacter的代謝產(chǎn)物[47]，而丁酸鹽可以抑制機(jī)體炎癥和氧化應(yīng)激[48]。表明黃芪甲苷通過(guò)上調(diào)g_Papillibacter豐度增加代謝產(chǎn)物丁酸鹽，從而抑制心肌梗死炎癥及氧化應(yīng)激。g_Dubosiella屬豐度上升通常伴隨著腸道炎癥[49]，抑制產(chǎn)生短鏈脂肪酸的細(xì)菌生長(zhǎng)，短鏈脂肪酸可維持腸道穩(wěn)態(tài)和緩解炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)腸道屏障完整性[50]，因此抑制這類(lèi)細(xì)菌生長(zhǎng)可發(fā)揮抗炎反應(yīng)。g_Dorea的豐度與肥胖程度呈正相關(guān)[51]，而肥胖是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的重要因素之一。此外，將這48 種回調(diào)代謝物與腸道菌群屬水平結(jié)果進(jìn)行聯(lián)合分析，發(fā)現(xiàn)unclassified_f_Oscillospiraceae 和g_Dubosiella菌群不僅與部分回調(diào)代謝物呈相關(guān)性，而且在給與黃芪甲苷后屬水平豐度有明顯改善。因此推測(cè)黃芪甲苷可通過(guò)改善腸道菌群，調(diào)節(jié)體內(nèi)代謝物水平。在種水平菌群結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷組體內(nèi)Lactobacillus_johnsonii水平豐度有上調(diào)趨勢(shì)，而Lactobacillus_johnsonii在體內(nèi)具有抗炎、抗菌作用[52]。體外驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪甲苷可以顯著促進(jìn)Lactobacillus_johnsonii生長(zhǎng)。綜合量-時(shí)-效關(guān)系、作用機(jī)制以及腸道菌群結(jié)果推測(cè)，黃芪甲苷具有促進(jìn)部分益生菌生長(zhǎng)、改善腸道菌群的作用，回調(diào)體內(nèi)代謝物水平，通過(guò)調(diào)控心肌IL-6/JAK/STAT6 信號(hào)通路，發(fā)揮抗炎以及調(diào)控自噬作用，從而改善心功能。

本研究探究了黃芪甲苷對(duì)心肌梗死大鼠的量-時(shí)-效關(guān)系，利用非靶向代謝組學(xué)和IPA 數(shù)據(jù)庫(kù)分析其作用靶點(diǎn)，采用Western blotting 方法進(jìn)行IL-6/JAK/STAT6 通路驗(yàn)證，并且探究黃芪甲苷對(duì)心梗大鼠腸道菌群的改善作用，為黃芪治療心血管疾病提供理論依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突