動物檢疫中的樣品采集與檢疫技術(shù)

劉志強

（蕪湖市灣沚區(qū)鄉(xiāng)村振興促進中心 241100）

隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展與逐步成熟，動物檢疫工作的重要性日益突出，為保證養(yǎng)殖戶能夠回收前期投資，擴大養(yǎng)殖規(guī)模與增加畜禽類產(chǎn)品經(jīng)濟收益，必須按照衛(wèi)生防疫規(guī)則進行科學檢疫，讓地方衛(wèi)生機構(gòu)根據(jù)國家法律規(guī)定，定期使用專業(yè)技術(shù)設(shè)備進行動物流行病學調(diào)查，采集多種樣品進行化驗與血清檢測分析，實現(xiàn)規(guī)范化樣品采集，避免出現(xiàn)病原菌外泄、病毒感染風險被忽視等問題，保證衛(wèi)生防疫機構(gòu)在短時間內(nèi)獲得具備代表性的檢測樣本，克服人為因素與環(huán)境因素干擾。

1 動物檢疫工作的重要性與核心內(nèi)容

動物檢疫工作是現(xiàn)代禽畜類養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)實踐中的重要內(nèi)容，可起到及時發(fā)現(xiàn)惡性傳染病與致病菌、降低動物感染率的特殊作用，現(xiàn)階段我國針對畜牧養(yǎng)殖業(yè)的衛(wèi)生檢疫制度較為完善，檢測方式主要以小規(guī)模樣品檢測與個體隔離取樣檢測為主，檢疫標準較為明確，必須同時對多份樣品進行病毒學、血清學、化學檢測，保證樣本檢測結(jié)果的多元性與合理性。我國每年都會發(fā)生影響范圍較大的動物疫情，口蹄疫、禽流感等疫病會導致大量畜禽死亡或停止生長，嚴重影響了養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)正常發(fā)展，衛(wèi)生防疫人員應(yīng)配合畜禽類產(chǎn)品經(jīng)營企業(yè)，組織開展有計劃、有明確目標的檢疫活動，快速發(fā)現(xiàn)生物入侵與病毒感染傳播路徑，規(guī)范養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)營方式，在保證畜禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的同時，維護生態(tài)環(huán)境穩(wěn)定，避免致病菌在自然環(huán)境中傳播繁殖。

2 動物檢疫工作中樣品采集的基本原則分析

2.1 控制采樣時間

在組織開展檢疫工作之前，必須根據(jù)養(yǎng)殖場規(guī)模、經(jīng)營方式、采樣頻率等因素，選擇較為合理的采樣時間點，調(diào)整兩次采樣活動的間隔期，避免出現(xiàn)采樣密度過大、樣品代表性較低等問題。衛(wèi)生防疫人員應(yīng)在組織采樣活動之前，提前處理好受到病菌感染、出現(xiàn)患病癥狀的死亡動物或瀕死動物，在動物死亡后4～5 h 以內(nèi)，組織抽血采樣與動物組織切割采樣等工作，多數(shù)患病畜禽會在死亡后傳播病菌，尸體會腐敗，導致采樣難度提升，因此養(yǎng)殖人員可使用小型冷凍隔離設(shè)備對畜禽動物進行冷藏處理，避免病毒通過尸體傳播，衛(wèi)生防疫人員還可對靠近死亡動物的其他動物進行檢疫采樣，避免病毒通過身體接觸傳播。針對未死亡的患病畜禽，必須在患病癥狀加劇之前，及時進行檢疫樣品采集，控制采集時間與頻率，例如在流行病多發(fā)的夏秋季節(jié)，畜禽在患病后容易快速死亡，存留在臟器與血管中的病毒會在發(fā)病后消失或經(jīng)過新陳代謝排出體外，一旦錯開急性期與發(fā)熱期，則會導致采樣效果下降，樣品可信度不足，動物組織中含有的病毒量會減少，難以通過專業(yè)醫(yī)學設(shè)備檢測發(fā)現(xiàn)，導致病毒檢疫工作無法達成目標。

2.2 典型性原則

在組織動物檢疫活動時，衛(wèi)生人員應(yīng)保證采集到的樣品具備典型性與代表性，采集范圍涵蓋整個流行病傳播范圍與飼養(yǎng)場全部動物，必須首先選擇具備一定典型性的患病動物，如處于急性發(fā)熱期或初步感染疾病、未出現(xiàn)明顯癥狀的動物，這一階段動物體內(nèi)病毒大量繁殖，逐步進入動物的內(nèi)臟器官與血管血液系統(tǒng)中，采樣難度下降，病理學識別精確度提升。衛(wèi)生人員應(yīng)和養(yǎng)殖人員聯(lián)系，提出明確要求，找出未經(jīng)藥物治療、患病較早的動物，并停止向患病動物與未患病動物投喂帶有抗生素或化學制劑的飼料，避免外來化學物質(zhì)進入動物體內(nèi)，導致采集樣品中的各項物質(zhì)數(shù)值發(fā)生變化?？蛇x擇采集帶有較多病原體、癥狀最明顯的動物的樣品，在組織檢疫采樣活動之前，應(yīng)根據(jù)外部癥狀與流行病學調(diào)查，對疫病的基本類型、傳播途徑、危害性進行系統(tǒng)性評估，做出較為合理的初步診斷，并根據(jù)醫(yī)學原理，在病原體容易感染或形成病灶的身體部位進行高密度取樣檢測，以此保證樣品采集效率與代表性達到標準，例如針對通過細菌感染產(chǎn)生的流行疾病，可組織小規(guī)模的患病動物血液抽樣檢測、乳汁與體內(nèi)膿汁檢測，精確測定患病動物身體滲出液的化學性質(zhì)，獲取典型的病原菌樣本。衛(wèi)生人員應(yīng)嚴格遵循無菌標準，在帶有負壓密封屬性的實驗室中采集樣本，使用工具切除患病組織與出現(xiàn)病變較為明顯的部位組織，保證采集到的病料中帶有相對數(shù)量較多的微生物與細菌，還可同步提取病變部位周邊健康器官的動物組織樣本，進行對比檢測，評估二者檢測結(jié)果的差異，可針對患病動物的腎臟、肝臟、脾臟等內(nèi)臟器官與淋巴結(jié)、心臟、動脈組織等部位進行采樣。

2.3 安全性原則

衛(wèi)生人員應(yīng)秉承安全性原則，參與檢疫活動之前，清洗身體并穿上密封防護服，在進出疫區(qū)時接受消毒噴淋處理，以維護養(yǎng)殖人員與專家的健康，做好衛(wèi)生防護工作，避免部分人畜共患傳染病通過接觸人體傳播。針對部分烈性傳染病，如布魯氏菌病、沙門氏菌病等，可在無法解剖患病動物時，利用真空負壓設(shè)備，采集動物靜脈中的血樣，將其制作為血清樣品，送往實驗室進行檢測。在采樣過程中，應(yīng)控制動物樣本數(shù)量，同步采集超過5 個患病動物的組織樣本，滿足實驗用量與科學備份要求，還要對盛裝各類樣品的容器與采樣設(shè)備進行消毒殺菌處理，及時消除潛在污染源與殘留的細菌，避免病毒通過未消毒器具感染人類與其他動物。在樣品保存運送過程中，應(yīng)將經(jīng)過密封的容器進行冷凍保存，存放在小型冷凍機中，針對病毒學樣本，可使用甘油與PBS 溶液進行保存，將動物組織樣本經(jīng)過切片后，放入防腐制劑中，在冷凍室中-50℃的環(huán)境中保存，避免進行多次凍融循環(huán)導致病毒擴散。衛(wèi)生人員可使用無菌試管與真空加壓設(shè)備制作出負壓環(huán)境，將血液樣本、空氣樣品放入其中，在遠距離運輸?shù)那闆r下，可在血液樣本中添加青霉素，使之發(fā)揮防腐作用，實現(xiàn)平穩(wěn)化運輸[1]。

3 現(xiàn)代化動物檢疫工作中常用檢疫技術(shù)類型

3.1 病原學檢測技術(shù)

病原學檢測技術(shù)是現(xiàn)代化動物檢疫中常用的檢測手段，其基本應(yīng)用方式為衛(wèi)生人員精確判定樣品中含有病菌的基本屬性，精確區(qū)分病毒與常見病菌，根據(jù)病原學原理，分析樣本中細菌、病毒的繁殖鏈與迭代速度，對多種病理學樣本進行隔離檢測，提升惡性傳染病的檢測效率。例如針對常見的寄生蟲病，可通過樣品提純與添加同類型病菌的方式，進行檢查與培育實驗，發(fā)現(xiàn)樣本中含有的蟲卵與幼蟲，延長檢測周期，以評估寄生蟲成蟲的生物屬性與繁殖規(guī)律，精確判定寄生蟲的種類與感染方式，了解其性狀[2]。衛(wèi)生人員應(yīng)發(fā)揮檢疫工具如顯微鏡、精密化篩查設(shè)備等裝置的優(yōu)勢，統(tǒng)計樣本中病原體密度與分布范圍，給予傳染性較強的病原體以生化實驗檢測，運用新型PCR 技術(shù)，對不存在活性致病菌的樣本進行溯源檢測，突出檢測活動科學、合理的基本特點。國內(nèi)常用動物檢疫技術(shù)基本特點如表1所示。

表1 國內(nèi)常用動物檢疫技術(shù)的特性與優(yōu)點

3.2 病理學檢測技術(shù)

病理學檢疫技術(shù)可被概括為檢疫人員基于醫(yī)學原理，對患病動物體征與習性進行精確判斷，向養(yǎng)殖人員詢問相關(guān)情況，如畜禽在生長過程中出現(xiàn)的染病癥狀，包括停止飲水、倒臥不動等，并檢查死亡動物的體內(nèi)器官與神經(jīng)、血液系統(tǒng)，進行小規(guī)模采樣，評估動物死亡前新陳代謝速度與腸道病菌繁殖量。衛(wèi)生檢疫人員應(yīng)按照要求，在無菌室內(nèi)組織死亡動物尸體剖檢活動，保證樣本采集組織的完整性，將動物體內(nèi)含有大量病菌、具備典型性的器官切割一部分，進行組織學、醫(yī)學檢測，使用專業(yè)科學儀器，將其放入培養(yǎng)皿中，進行持續(xù)性觀測檢驗，發(fā)現(xiàn)動物疫病的性質(zhì)與種類，保證檢疫精確度。例如針對萎縮性胃炎、急性腸胃炎等病癥，可重點檢查臟器與腸胃的病變情況，發(fā)現(xiàn)可能存在的病菌感染與穿孔、腐爛現(xiàn)象，及時發(fā)現(xiàn)惡性傳染病并停止解剖。還可觀測死亡動物表皮毛細血管中是否含有瘀血或有毒汗液，評估動物死亡前皮膚顏色與營養(yǎng)狀況，采集死亡動物曾經(jīng)排泄的糞便與尿液，并進行較為細致的口腔、腸道、鼻腔、頸部、腹腔的檢查，找到動物體內(nèi)腫瘤與腦組織、腸組織病變，對采集的動物組織樣本使用著色劑進行染色處理。在檢疫方法不能確診或動物出現(xiàn)死亡時，應(yīng)及時利用病理學方法進行檢查[3]。如支氣管敗血巴氏桿菌是引起豬萎縮性鼻炎的病原之一，在該病檢疫中，應(yīng)充分利用病理組織進行檢疫，有效彌補傳統(tǒng)檢疫技術(shù)的不足，有效確診，明確動物病變性質(zhì)。

3.3 臨床隔離檢疫與免疫學檢疫

臨床檢疫包含常見的聽診、觸診等，可判別患病動物健康情況，發(fā)現(xiàn)較為明顯的患病癥狀，如心臟跳動速度加快、腹腔擴張、瞳孔放大等，根據(jù)流行病學防疫原理，及時將出現(xiàn)明顯癥狀的動物送往醫(yī)學實驗室進行長期隔離觀測。群體性隔離檢疫的持續(xù)時間不定，長期約為30 d 左右，針對無癥狀動物的短期隔離檢疫可持續(xù)約10 d[4]。在隔離檢疫過程中，應(yīng)避免為隔離動物喂食帶有化學物質(zhì)或高劑量抗生素藥物的食物或水，以免影響檢疫采樣結(jié)果判定精確性。免疫學檢疫是新出現(xiàn)的現(xiàn)代化檢疫技術(shù)，是基于病理學原理構(gòu)建的，可針對新出現(xiàn)的烈性傳染病進行精確檢測，由于部分畜禽類傳染病病毒分離難度較大，采集窗口期較短，可采用這一技術(shù)，通過初步采集患病動物的血液樣本，將其加工為血清樣本，使用免疫學試劑，檢測血樣的血型、病毒含量、繁殖速度等信息，在短時間內(nèi)判定患病動物的病情與血液感染情況。免疫學血清檢測技術(shù)具備檢測時間較短、可靠性較高等優(yōu)點。

4 動物檢疫技術(shù)改進措施分析

衛(wèi)生檢疫人員可采用個體檢疫方法，針對養(yǎng)殖場中單一患有病癥、出現(xiàn)明顯患病情況的動物，進行系統(tǒng)性的個體檢查，組織病毒基因?qū)W檢測與生物學觀察等活動，判斷動物所患疾病的癥狀與傳播方式，還可與其他健康動物在特殊場所中進行集中飼養(yǎng)，定期評估共同飼養(yǎng)動物是否患上同類型疾病，以此發(fā)現(xiàn)疾病的傳播方式與傳播速度，提升檢疫效果?？芍攸c觀察動物的精神狀況、生活習性等外在情況，分析動物心臟跳動速度、脈搏波動頻率是否合理，一旦確診烈性傳染病或其他病癥，則立刻將作為單一樣品的動物進行隔離或撲殺處理，同步采集動物內(nèi)臟樣品進行檢測。在輸送樣品過程中，可采用整體濃度超過10%福爾馬林液（市售甲醛溶液1 份加蒸餾水9 份）或95%濃度的酒精等物質(zhì)保存病理組織學樣品，固定液體積應(yīng)為病料的10 倍。如用10%福爾馬林固定組織，經(jīng)24 h 必須更換一次新鮮溶液；神經(jīng)系統(tǒng)組織需使用10%福爾馬林[5]。

5 結(jié)語

在現(xiàn)代動物檢疫工作中，衛(wèi)生防疫人員應(yīng)根據(jù)實際情況，調(diào)整樣本采集方式與樣本量，組織小規(guī)模個體檢疫與間隔時間較長的分段式檢疫，將有幾率患上畜禽類流行病的動物隔離在封閉空間中，定時定點采集檢疫樣本，將其送往本地實驗室進行檢測，基于病理學原則進行深入分析，結(jié)合動物習性與外部癥狀，組織活體解剖或尸體解剖，及時發(fā)現(xiàn)畜禽感染的惡性傳染病，在負壓密封實驗室中完成檢測，保證檢測環(huán)境中不存在雜質(zhì)與其他干擾因素。