共刺激分子B7-H3在乳腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

王利瑞,徐紀(jì)海,高 慶,張維頡,孟 謙,管海方,王維康,張俊宇,馬春玲*

(1山東醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校,山東 臨沂 276000;2臨沂市婦幼保健院)

據(jù)2020年全球癌癥數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),乳腺癌位居癌癥發(fā)病率首位,亦為女性最常見(jiàn)的癌癥[1]。雖然常規(guī)診療體系已日趨成熟,但仍有部分患者因腫瘤異質(zhì)性、耐藥性等問(wèn)題,預(yù)后較差。免疫療法的出現(xiàn)為癌癥治療開(kāi)辟了新方向,免疫檢查點(diǎn)分子因其在免疫過(guò)程中發(fā)揮的重要作用成為近年來(lái)腫瘤免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。B7-H3作為B7家族重要的免疫檢查點(diǎn)分子,其高表達(dá)參與了多種惡性腫瘤的發(fā)展過(guò)程,如增殖、侵襲和遷移等,有望成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)[2]。本研究通過(guò)檢測(cè)B7-H3蛋白在乳腺癌及乳腺良性病變組織中的表達(dá),分析其表達(dá)水平與臨床參數(shù)的關(guān)系,探討其在乳腺癌的發(fā)生、進(jìn)展中的生物學(xué)作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性收集2017年6月—2022年12月就診于臨沂市婦幼保健院行乳腺癌手術(shù)的38例患者臨床資料(病例組)。納入標(biāo)準(zhǔn):均經(jīng)病理診斷為乳腺惡性腫瘤;均為女性;單側(cè);術(shù)前均未行放、化療及其它治療。排除標(biāo)準(zhǔn):伴有其他惡性腫瘤或相關(guān)病史;伴其他乳腺疾病。38例患者中,年齡28～74歲,平均(50.82±11.99)歲;乳腺浸潤(rùn)性癌25例,乳腺原位癌13例。另外同時(shí)收集28例乳腺良性病變患者臨床資料(對(duì)照組),年齡17～56歲,平均(34.18±10.89)歲;均經(jīng)術(shù)后病理確診。

1.2方法

1.2.1材料 免疫組化所用抗體:一抗為B7-H3多克隆抗體、二抗為HRP標(biāo)記山羊抗兔通用型二抗(Boster Biological Technology)。免疫組化常用試劑:PBS緩沖液粉劑、檸檬酸抗原修復(fù)液、蘇木素體細(xì)胞快速染色液、封片用中性樹(shù)膠、多聚賴氨酸玻片(福州邁新),BSA、DAB顯色劑、3%H2O2液,1%鹽酸-酒精分化液。

1.2.2標(biāo)本制備 于65℃烤箱中烘片1 h,二甲苯有序脫蠟,梯度酒精水化,熱修復(fù)抗原,3%H2O2封閉,滴加3%BSA封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,滴加一抗(1∶200)并4℃過(guò)夜孵育,PBS沖洗,加入生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG,37℃孵育30 min,PBS沖洗,滴加SABC,37℃孵育15 min,PBS沖洗,DAB顯色,據(jù)鏡下顏色變化適時(shí)終止反應(yīng),蘇木素染色6 min,分化,反藍(lán),脫水,封片。

1.3指標(biāo)評(píng)定 使用高倍鏡(400×)觀察記錄切片的免疫組化染色強(qiáng)度、染色范圍,評(píng)分、取均值。判定標(biāo)準(zhǔn):出現(xiàn)黃至棕褐色顆粒為陽(yáng)性顯色,B7-H3定位于胞漿、胞膜,半定量結(jié)果判讀:評(píng)分=染色強(qiáng)度×染色范圍。染色強(qiáng)度由淺入深依次為:0分,無(wú)染色;1分,淡黃色;2分,棕黃色;3分,棕褐色。染色范圍:無(wú)腫瘤細(xì)胞著色(-),1%～30%腫瘤細(xì)胞著色(+),30%～60%腫瘤細(xì)胞著色(++),>60%腫瘤細(xì)胞著色(+++);分別對(duì)應(yīng)0、1、2、3分,評(píng)分范圍0～9分,<3分為陰性表達(dá),≥3分為陽(yáng)性表達(dá)組(<6分為低表達(dá),≥6分為高表達(dá))。

2 結(jié)果

2.1B7-H3在乳腺組織中的表達(dá) 病例組:38例患者中,B7-H3陽(yáng)性表達(dá)31例,陰性7例,陽(yáng)性表達(dá)率為81.58%;主要表達(dá)在細(xì)胞漿、胞膜或二者同時(shí)表達(dá),呈彌漫性,見(jiàn)封二圖1、2。對(duì)照組:28例患者中,B7-H3陽(yáng)性表達(dá)7例,陰性21例,陽(yáng)性表達(dá)率為25%,見(jiàn)封二圖3。兩組陽(yáng)性表達(dá)率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.13,P<0.01)。

2.2病例組B7-H3的表達(dá)與相關(guān)指標(biāo) B7-H3的表達(dá)與不同病理類型有關(guān),與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移以及ER、PR、Her-2、Ki67、P53的表達(dá)無(wú)相關(guān)性。見(jiàn)表1。

表1 病例組B7H3的表達(dá)與相關(guān)指標(biāo)

3 討論

大量研究指出,B7-H3 mRNA在人體組織廣泛表達(dá),但得益于嚴(yán)格的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,B7-H3蛋白在正常組織表達(dá)較少,高表達(dá)見(jiàn)于多種惡性腫瘤組織。有研究提示,B7-H3在原發(fā)腫瘤中的表達(dá)與腫瘤大小、淋巴及血管侵犯顯著相關(guān)[3]。本研究利用免疫組化檢測(cè)了B7-H3在乳腺癌組織及乳腺良性病變組織中的表達(dá)情況,結(jié)果表明:B7-H3在乳腺癌組織的表達(dá)顯著高于乳腺良性病變組織,且在乳腺癌腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜中廣泛表達(dá)。提示B7-H3的表達(dá)情況與乳腺癌的發(fā)生有密切關(guān)系,進(jìn)一步印證了B7-H3在腫瘤免疫中的負(fù)性調(diào)節(jié)作用。此外,本研究結(jié)果顯示:B7-H3在浸潤(rùn)性乳腺癌的表達(dá)強(qiáng)度高于原位癌。B7-H3在胃癌、結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌、肝癌、子宮癌、腎癌等組織中均存在過(guò)表達(dá),且敲低前列腺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、大腸癌細(xì)胞和黑素瘤細(xì)胞中B7-H3的表達(dá)可顯著抑制癌細(xì)胞遷移和侵襲[4]。數(shù)據(jù)庫(kù)結(jié)果示:B7-H3mRNA在乳腺癌中高表達(dá),并與患者較差的生存期相關(guān),沉默乳腺癌細(xì)中的B7-H3可抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,抑制其增殖、遷移、侵襲的能力[5],愈加凸顯了B7-H3在乳腺癌中的作用。本研究將B7-H3的表達(dá)與相關(guān)參數(shù)如腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、Her-2、Ki67、P53等進(jìn)行相關(guān)性分析,雖然結(jié)果均顯示無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性受樣本量等多因素影響,且B7-H3已被發(fā)現(xiàn)介導(dǎo)多種信號(hào)通路,在胃癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、膀胱癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤中發(fā)揮促進(jìn)作用,靶向抑制這些通路可干擾B7-H3介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)以減弱癌癥侵襲性[6]。

綜上所述,乳腺癌的發(fā)生和進(jìn)展與多種因素相關(guān),B7-H3的高表達(dá)對(duì)乳腺癌的發(fā)生和進(jìn)展具有重要作用,在乳腺癌的診斷及免疫治療方面具有潛在的臨床價(jià)值,有望成為免疫治療新靶點(diǎn)。