基于膠體金免疫層析技術(shù)的乙肝和梅毒快速初篩效果評價及影響因素分析*

孫海英 范恩勇 焦玉東 許守廣 沈楚銘(揚州市中心血站 揚州市輸血研究所，江蘇 揚州 225007)

膠體金免疫層析技術(shù)是1 種基于抗原與抗體特異性結(jié)合反應(yīng)的快速檢測方法，利用膠體金顆粒的特殊性和抗體的高度特異性，從而對待檢標本中的目標分子進行定性或定量分析，因其具有操作簡便、快速、靈敏度高、成本低等優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、流行病學(xué)調(diào)查以及獻血前的血液初篩中[1-2]，以快速檢測標本中的病毒標志物。 乙型肝炎和梅毒作為我國目前常見的2 種傳染病，也是經(jīng)輸血傳播性疾病，為提高初篩檢測的效率和準確性，降低檢測成本和時間，大多數(shù)采供血機構(gòu)普遍將乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B virus surface antigen，HBsAg)、梅毒螺旋體抗體(treponema pallidum antibody，抗-TP)列為初篩常規(guī)項目[3-4]，利用膠體金免疫層析技術(shù)進行快速初篩，對于保障獻血者身體健康和控制經(jīng)血傳播疾病感染的風(fēng)險具有重要意義。 本研究旨在對膠體金免疫層析法HBsAg 和抗-TP 項目用于獻血者獻血前快速初篩效果進行評價，并對ELISA 法HBsAg、抗-TP 反應(yīng)性標本再次利用初篩試劑進行復(fù)檢，然后對結(jié)果比對分析，從而切實提高初篩檢測的效率和準確性，降低血液采集后的不合格率，確保血液質(zhì)量和輸血安全。

1 材料與方法

1.1 標本來源 2020 年1 月1 日—2023 年6 月30 日在揚州市中心血站參加無償獻血的獻血者血液標本，所有獻血者均符合《血站技術(shù)操作規(guī)程》獻血者健康檢查中健康征詢和體檢的要求，年齡18～55 周歲，至少獻血3 次以上，年齡可延長至60 周歲。 獻血者相關(guān)信息采集自穿越安全輸血標準化系統(tǒng)(Spring 2017，廣東穿越醫(yī)療科技有限公司)和Liswell 實驗室質(zhì)量管理與控制系統(tǒng)(版本5.29，煙臺海深威軟件有限公司)。

1.2 試劑與儀器 HBsAg、抗-TP(膠體金免疫層析法)檢測:HBsAg 試劑(艾博生物醫(yī)藥公司，批號:2022060042)，抗-TP試劑(英科新創(chuàng)公司，批號:202203A920)；HBsAg、抗-TP 檢測(ELISA 法): HBsAg 試 劑 一(北 京 萬 泰 公 司， 批 號:B20221045)， HBsAg 試 劑 二(英 科 新 創(chuàng) 公 司， 批 號:2022105130)， 抗-TP 劑 一( 北 京 萬 泰 公 司， 批 號:N20221039)， 抗-TP 試 劑 二( 英 科 新 創(chuàng) 公 司， 批 號:2022107531)。 STAR 8CH 全自動加樣儀、FAME24/20 全自動酶免分析儀(瑞士HAMILTON 公司)。

1.3 方法 獻血前初篩使用膠體金免疫層析法，獻血后檢測使用ELISA 法，當(dāng)日ELISA 法HBsAg 和抗-TP 檢測為反應(yīng)性的標本，在4h 內(nèi)用與該反應(yīng)性標本獻血前初篩時同廠家、同批號的初篩試劑進行再次復(fù)檢，用線性回歸的方法計算ELISA 檢測反應(yīng)強度(S/CO 值)與初篩反應(yīng)性判讀時間(min)的回歸方程。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用Excel 2010 軟件整理數(shù)據(jù)和繪圖，使用SPSS 22.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，相關(guān)性采用線性回歸分析，計數(shù)資料用百分率(%)表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 獻血前血液標本初篩結(jié)果 見表1。

表1 無償獻血者標本獻血前膠體金法HBsAg、抗-TP 初篩結(jié)果(n，%)

2.2 獻血后血液標本檢測結(jié)果 見表2。

表2 無償獻血者標本獻血后ELSIA 法HBsAg、抗-TP 檢測結(jié)果(n，%)

2.3 ELISA 法HBsAg 反應(yīng)性標本用初篩試劑的復(fù)檢結(jié)果隨著ELISA 法S/CO 值的升高，膠體金法復(fù)檢為反應(yīng)性的比例也逐漸升高，見表3。

表3 HBsAg ELISA 法檢測不合格S/CO 值結(jié)果分布及再次膠體金法復(fù)檢結(jié)果 (n，%)

2.4 ELISA 法抗-TP 反應(yīng)性標本用初篩試劑的復(fù)檢結(jié)果見表4。2.5

表4 抗-TP ELISA 法檢測不合格S/CO 值結(jié)果分布及再次膠體金法復(fù)檢結(jié)果 (n，%)

ELISA 法反應(yīng)強度(S/CO 值)與膠體金法反應(yīng)性判讀時間的關(guān)系 對24 份HBsAg 與26 份TP 初篩試劑復(fù)檢反應(yīng)性標本，以結(jié)果判讀時間(min)為橫坐標，以其相對應(yīng)ELISA法檢測S/CO 值為縱坐標作圖，經(jīng)線性回歸分析，HBsAg、TP膠體金反應(yīng)性判讀時間與ELISA 法S/CO 值的回歸方程分別為:YHBsAg＝-0.904X＋34.508(R2＝0.9765)和YTP＝-1.1023X＋25.875(R2＝0.9825)，ELISA 法HBsAg、TP 檢測S/CO 值反應(yīng)強度與初篩反應(yīng)性判讀時間相關(guān)性見圖1。

圖1 ELISA 法HBsAg、TP 檢測S/CO 值反應(yīng)強度與初篩反應(yīng)性判讀時間相關(guān)性

3 討論

近年來快速初篩檢測技術(shù)因快速、準確、簡便等優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于臨床診斷的各個領(lǐng)域[5-6]，基于膠體金免疫層析技術(shù)、磁性免疫層析技術(shù)、微流控技術(shù)、光學(xué)技術(shù)和電化學(xué)技術(shù)的初篩檢測方法得到了更深入的研究[2，5]，采供血機構(gòu)目前在獻血人群中開展HBsAg 和TP 項目快速初篩檢測，主要還是基于膠體金免疫層析技術(shù)[1，3]。

對獻血者獻血前初篩可以提高血液質(zhì)量和采集后血液合格率，降低后續(xù)因不合格血液帶來的采集、檢測、成分制備、血液報廢、血液報銷等綜合成本[7]。 本文結(jié)果顯示獻血前膠體金法初篩不合格占0.39%，獻血后ELISA 檢測不合格占0.51%。 盡管經(jīng)過初篩，獻血后HBsAg、TP 檢測項目不合格占比仍然較高，主要與初篩所用試劑方法學(xué)、人員操作、環(huán)境溫濕度、標本的溶血、脂血以及室內(nèi)質(zhì)量控制等因素有關(guān)[9-12]，這也是大多數(shù)采供血機構(gòu)將HBsAg、TP 項目作為常規(guī)快速初篩的主要原因[8，13]。

ELISA 法檢測反應(yīng)性標本中，2/3 以上HBsAg 和TP 標本為雙試劑反應(yīng)性，假陽性的可能性較小[14-16]，ELISA 法HBsAg、TP 二檢單試劑均較一檢單試劑反應(yīng)性率低(P＜0.05)，與不同廠家試劑靈敏度、特異性等有關(guān)[14]。 利用初篩試劑再次對62 份HBsAg 和61 份TP ELISA 法檢測反應(yīng)性標本進行復(fù)檢，HBsAg 復(fù)檢反應(yīng)性仍有38.71%，TP 復(fù)檢反應(yīng)性仍有42.62%，說明在初篩檢測中存在漏檢現(xiàn)象，可能與初篩檢測時的季節(jié)、環(huán)境、溫濕度，觀察時長、光線強弱、人員操作水平、緩沖液的有效使用以及標本的處理等多種因素[17-18]有關(guān)，特別是在ELISA 法S/CO 值(HBsAg)＜20.0、(TP)＜5.0時，再次復(fù)檢觀察時間均在18 min 以上才出現(xiàn)反應(yīng)性。 實際團體采血工作中，由于獻血人數(shù)較多，初篩工作人員結(jié)果判讀時間可能會縮短，從而導(dǎo)致低濃度病毒標志物水平的標本初篩漏檢。 HBsAg、TP 反應(yīng)性標本ELISA 法反應(yīng)強度(S/CO值)與初篩反應(yīng)性判讀時間呈負相關(guān)，S/CO 值越低初篩反應(yīng)性判讀時間越長，因此，通過有針對性的加強初篩工作人員培訓(xùn)和開展全面質(zhì)量控制等措施，對于提高初篩檢測的質(zhì)量，降低漏檢率，節(jié)約成本，有效提升血液采集后的合格率，還是能有一定比例的上升空間。

為能有效提高初篩HBsAg、Tp 試劑的檢測效率和準確性，應(yīng)嚴格按照試劑說明書要求條件進行試劑儲存，初篩檢測過程中，嚴格控制環(huán)境溫濕度，溫度較高、濕度較大的季節(jié)，盡可能即開即用，過多或過少的標本加樣量均會導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差，全血標本需加緩沖液進行緩沖。 結(jié)果判讀必須在規(guī)定時間內(nèi)選擇光線明亮處進行，時間太短，可能出現(xiàn)漏檢，時間太長，超過規(guī)定時間，結(jié)果無效。 當(dāng)團體采血時，初篩工作人員可根據(jù)當(dāng)日采血計劃，提前半小時做好初篩準備工作，如試劑準備、編號、試紙條粘貼、批號記錄等，盡可能減少初篩前的準備工作時間，為保證初篩結(jié)果觀察爭取時間。目前，采供血機構(gòu)尚缺乏對初篩試劑質(zhì)量抽檢與確認的統(tǒng)一評價標準，選擇試劑廠家時，最好能提前對不同廠家試劑靈敏度、特異性和最低檢出限等指標進行驗證[1]，以達到最佳檢測效果。

綜合上述，在獻血人群中開展膠體金免疫層析技術(shù)的乙肝和梅毒快速初篩項目，可有效提高血液質(zhì)量和采集后血液合格率，工作人員的操作水平和檢測質(zhì)量直接關(guān)系到初篩檢測效率和結(jié)果準確性，通過有針對性的加強初篩工作人員培訓(xùn)，可進一步提高初篩檢測的質(zhì)量，降低漏檢率，節(jié)約成本，從而減少經(jīng)血傳播疾病感染的風(fēng)險和保障獻血者身體健康。

利益沖突:所有作者均聲明不存在利益沖突。