新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害患兒血清miR-16、CF-6、Copeptin水平變化意義*

楊慧潔,劉定遠(yuǎn),黃久浪,彭 好,羅曉斌

遂寧市中心醫(yī)院兒科,四川遂寧 629000

新生兒敗血癥是由多種微生物感染所致的全身感染性疾病,病情危重者28 d死亡率高達(dá)33.2%左右,其中心肌損害發(fā)生率約13.8%,會(huì)導(dǎo)致病死率上升至70%～90%,防治形勢(shì)極為嚴(yán)峻[1-2]。既往臨床多選擇經(jīng)典的心肌損害標(biāo)志物,如心肌肌鈣蛋白I(cTnI)、心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)進(jìn)行早期診斷,但由于新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害的機(jī)制較為復(fù)雜,單純依靠上述標(biāo)志物難以準(zhǔn)確反映心肌損害發(fā)生發(fā)展機(jī)制和具體病情,需尋找更多相關(guān)標(biāo)志因子[3]。有研究表明,微小RNA-16(miR-16)在炎癥反應(yīng)病理機(jī)制中發(fā)揮重要作用,參與心肌炎癥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展過(guò)程[4]。線(xiàn)粒體偶聯(lián)因子-6(CF-6)屬于線(xiàn)粒體三磷酸腺苷(ATP)合酶的主要組成部分,在炎癥、心肌損害中呈異常升高狀態(tài)[5]。和肽素(Copeptin)作為精氨酸加壓素(AVP)原羧基末端的一部分,具有加快炎癥介質(zhì)釋放、誘發(fā)過(guò)度炎癥反應(yīng)作用,異常表達(dá)會(huì)損害心肌細(xì)胞[6]。目前,三者在新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害患兒中的檢測(cè)價(jià)值仍有待驗(yàn)證。為此,本研究嘗試探討新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害患兒miR-16、CF-6、Copeptin的水平變化及檢測(cè)價(jià)值,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2020年1月至2022年9月收治的105例新生兒敗血癥患兒作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)均經(jīng)血培養(yǎng)證實(shí)細(xì)菌或病毒陽(yáng)性;(2)實(shí)驗(yàn)室檢查顯示白細(xì)胞計(jì)數(shù)>20×109/L或<5×109/L,C反應(yīng)蛋白>100 mg/L,血小板計(jì)數(shù)<100×109/L;(3)符合《新生兒敗血癥診斷及治療專(zhuān)家共識(shí)(2019年版)》中新生兒敗血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并先天性心臟病、支氣管肺發(fā)育不良及其他臟器結(jié)構(gòu)畸形等先天性疾病;(2)伴有凝血功能障礙、血液疾病、窒息;(3)存在免疫缺陷疾病、遺傳代謝性疾病、染色體疾病;(4)入院前接受抗感染治療。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò),患兒監(jiān)護(hù)人均知情本研究,自愿簽訂知情同意書(shū)。根據(jù)105例新生兒敗血癥患兒是否并發(fā)心肌損害分為心肌損害組(43例)與無(wú)心肌損害組(62例)。判定標(biāo)準(zhǔn)[8]:心肌損害標(biāo)志物血清cTnI>0.1 ng/mL、H-FABP>10.0 ng/mL即可判定為并發(fā)心肌損害。

1.2方法 于所有患兒入院次日清晨采集空腹外周靜脈血3 mL,采用日本久保田KA-220型血清離心機(jī)進(jìn)行離心處理,離心半徑為10 cm,離心速率為3 000 r/min,離心時(shí)間為10 min,取上清液,保存于-80 ℃條件下,備用。

1.2.1血清miR-16水平檢測(cè) 按照德國(guó)Qiagen公司miRNeasy Serum/Plasma Kit試劑盒說(shuō)明書(shū)提取mRNA,采用中國(guó)TianGen公司FastQuant RT試劑盒將mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,使用美國(guó)Applied Biosystems公司Sequence Detection系統(tǒng)及中國(guó)TianGen公司SYBR Green PCR試劑盒進(jìn)行熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR),擴(kuò)增條件:95 ℃預(yù)變性10 min,95 ℃ 30 s,58 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,共40個(gè)循環(huán)。采用U6基因作為內(nèi)參基因。引物序列:miR-16正向引物為5′-TCGGCGTAGCAGCACGTAAAT-3′,反向引物為5′-GTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3′;U6正向引物為5′-GCAACTAGGATGGTGTGGCT-3′,反向引物為5′-TCCCATTCCCCAGCTCTCATA-3′。采用2-ΔΔCt計(jì)算血清miR-16的相對(duì)表達(dá)水平。

1.2.2血清cTnI、H-FABP、CF-6、Copeptin水平檢測(cè) 檢測(cè)儀器為購(gòu)自武漢明德生物科技股份有限公司的QMT 8000免疫定量分析儀及配套試劑盒,采用快速固相免疫層析法檢測(cè)血清cTnI、H-FABP水平,放射免疫固相法檢測(cè)血清CF-6水平,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清Copeptin水平,實(shí)驗(yàn)過(guò)程由專(zhuān)業(yè)人員嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。

1.2.3病情判定 (1)敗血癥病情程度判定:參考文獻(xiàn)[9]根據(jù)新生兒危重病例評(píng)分(NCIS)將所有患兒分為非危重(>72分)、危重(56～72分)、極危重(<56分)。(2)心肌損害組病情判定:心功能采用紐約心臟協(xié)會(huì)(NYHA)心功能分級(jí)[10]判定,分級(jí)越高,提示心功能越差;心臟收縮功能障礙參考文獻(xiàn)[11]將左心射血分?jǐn)?shù)(LVEF)<50%判定為心臟收縮功能障礙,LVEF≥50%判定為無(wú)心臟收縮功能障礙。

1.3觀察指標(biāo) (1)兩組一般資料、心肌損害標(biāo)志物水平,一般資料包括胎齡、性別、出生體重、敗血癥類(lèi)型、感染類(lèi)型、敗血癥病情程度等資料;(2)兩組血清miR-16、CF-6、Copeptin水平;(3)心肌損害組血清miR-16、CF-6、Copeptin與心肌損害標(biāo)志物相關(guān)性;(4)血清miR-16、CF-6、Copeptin對(duì)新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害的診斷價(jià)值;(5)心肌損害組不同病情患兒血清miR-16、CF-6、Copeptin水平;(6)血清miR-16、CF-6、Copeptin與新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害患兒病情的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般資料、心肌損害標(biāo)志物水平 兩組胎齡、性別、出生體重、敗血癥類(lèi)型、感染類(lèi)型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),心肌損害組敗血癥病情嚴(yán)重程度及血清cTnI、H-FABP水平高于無(wú)心肌損害組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料、心肌損害標(biāo)志物水平比較[n(%)或

2.2兩組血清miR-16、CF-6、Copeptin水平 心肌損害組血清miR-16、CF-6、Copeptin水平高于無(wú)心肌損害組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組血清miR-16、CF-6、Copeptin水平比較

2.3心肌損害組血清miR-16、CF-6、Copeptin與心肌損害標(biāo)志物相關(guān)性 Pearson相關(guān)性分析顯示,心肌損害組血清miR-16、CF-6、Copeptin與cTnI(r=0.702、0.536、0.524)、H-FABP(r=0.683、0.609、0.558)均呈正相關(guān)(均P<0.001)。

2.4血清miR-16、CF-6、Copeptin對(duì)新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害的診斷價(jià)值 ROC曲線(xiàn)分析顯示,血清miR-16、CF-6、Copeptin診斷新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害的曲線(xiàn)下面積(AUC)分別為0.726(95%CI:0.630～0.808)、0.743(95%CI:0.649～0.824)、0.846(95%CI:0.762～0.909),三者聯(lián)合診斷新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害的AUC為0.913(95%CI:0.842～0.959),優(yōu)于三者單一指標(biāo)診斷。見(jiàn)圖1。

圖1 血清miR-16、CF-6、Copeptin對(duì)新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害的診斷價(jià)值

2.5心肌損害組不同病情患兒血清miR-16、CF-6、Copeptin水平 心肌損害組心功能分級(jí)為Ⅲ～Ⅳ級(jí)患兒血清miR-16、CF-6、Copeptin水平高于Ⅱ級(jí)患兒及Ⅰ級(jí)患兒,Ⅱ級(jí)患兒高于Ⅰ級(jí)患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);心肌損害組有心臟收縮功能障礙患兒血清miR-16、CF-6、Copeptin水平高于無(wú)心臟收縮功能障礙患兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 心肌損害組不同病情患兒血清miR-16、CF-6、Copeptin水平比較

2.6血清miR-16、CF-6、Copeptin水平與新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害患兒病情的關(guān)系 Spearman相關(guān)性分析,血清miR-16、CF-6、Copeptin水平與新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害患兒心功能分級(jí)(r=0.622、0.605、0.581)、心臟收縮功能障礙(r=0.613、0.630、0.596)呈正相關(guān)(均P<0.001)。

3 討 論

新生兒敗血癥是一個(gè)復(fù)雜的、多系統(tǒng)損傷的病理生理學(xué)改變過(guò)程,心臟被認(rèn)為是其病情進(jìn)展過(guò)程中累及最嚴(yán)重的臟器,通常表現(xiàn)為心肌損害、左心收縮功能下降,一旦累及心臟,則極易導(dǎo)致病死風(fēng)險(xiǎn)顯著增加,是臨床診治新生兒敗血癥的重要關(guān)注點(diǎn)。

miR-16是一種參與炎癥反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)的miRNA因子,祁宏亮等[12]研究表明,與健康新生兒比較,新生兒敗血癥患兒miR-16表達(dá)顯著上調(diào),與新生兒敗血癥炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。本研究嘗試探討miR-16在新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害患兒中的水平變化,結(jié)果顯示,心肌損害組血清miR-16水平高于無(wú)心肌損害組,與心肌損害標(biāo)志物cTnI、H-FABP呈正相關(guān)?？紤]為以下幾點(diǎn)原因:miR-16能通過(guò)抑制Toll樣受體4、白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶1的表達(dá)促進(jìn)炎癥反應(yīng)進(jìn)展,從而增加累及心臟風(fēng)險(xiǎn)[13];動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示,miR-16過(guò)度表達(dá)會(huì)降低心肌細(xì)胞活力,加快心肌細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致心功能不全加重,而敲除miR-16基因能夠逆轉(zhuǎn)上述變化,減輕心肌損害[14]。此外,miR-16相關(guān)信號(hào)通路改變是心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的重要機(jī)制之一[15]。由此可知,miR-16在新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本研究進(jìn)一步研究證實(shí),血清miR-16診斷新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害的價(jià)值良好,且miR-16水平與心功能分級(jí)、心臟收縮功能障礙顯著相關(guān),能為臨床早期診斷、心肌損害程度評(píng)估提供數(shù)據(jù)支持。

CF-6主要依賴(lài)線(xiàn)粒體存在于人體血管內(nèi)皮細(xì)胞膜、心肌組織等多種組織中,一旦線(xiàn)粒體發(fā)生損傷,CF-6便會(huì)釋放入血,并隨著線(xiàn)粒體損傷加重不斷釋放,導(dǎo)致其在血液循環(huán)中的含量明顯升高[16]。線(xiàn)粒體作為全身性感染的主要靶器官,在新生兒敗血癥發(fā)生早期就出現(xiàn)損傷,這與劉雨等[17]報(bào)道中血清CF-6水平在新生兒敗血癥早期呈明顯上升趨勢(shì)的結(jié)果相符。在此基礎(chǔ)上,本研究結(jié)果表明,心肌損害組血清CF-6水平高于無(wú)心肌損害組,與cTnI、H-FABP水平呈正相關(guān),可見(jiàn)CF-6參與新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害的過(guò)程。有研究顯示,新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、內(nèi)皮功能改變,導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上的CF-6迅速釋放入血,致使炎性細(xì)胞活化,釋放出大量炎癥介質(zhì),介導(dǎo)心肌損害,并經(jīng)氧化應(yīng)激、炎癥應(yīng)答等途徑明顯增加線(xiàn)粒體膜通透性,進(jìn)一步促使CF-6過(guò)多釋放,形成惡性循環(huán)[18-19]。同時(shí),本研究發(fā)現(xiàn),血清CF-6可作為臨床診斷新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害的重要輔助指標(biāo),且其水平變化與心功能分級(jí)、心臟收縮功能障礙聯(lián)系緊密,有助于臨床準(zhǔn)確評(píng)估病情進(jìn)展。

Copeptin是AVP前體的一個(gè)穩(wěn)定片段,在AVP的成熟與轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色,且與AVP相比,在機(jī)體代謝中具有穩(wěn)定性好、易檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn),故臨床通常選擇Copeptin來(lái)取代AVP檢測(cè)[20]。本研究結(jié)果表明,新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害患兒血清Copeptin水平高于無(wú)心肌損害患兒,與孫瑞雪等[21]報(bào)道的結(jié)果一致。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn),Copeptin水平與cTnI、H-FABP水平呈正相關(guān),提示血清Copeptin水平變化與新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害有關(guān)。原因可能在于:AVP是一種下丘腦-垂體-腎上腺軸的重要激素,在促腎上腺皮質(zhì)激素分泌的內(nèi)分泌應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮重要作用,能夠加快皮質(zhì)醇、促腎上腺皮質(zhì)激素的釋放,從而介導(dǎo)多種炎癥介質(zhì)過(guò)度表達(dá),誘發(fā)并加重機(jī)體內(nèi)炎癥反應(yīng),間接損傷心肌組織[22]。Copeptin本身也是心肌損害的危險(xiǎn)因素之一,其表達(dá)異常升高會(huì)增加心肌細(xì)胞壞死、心功能不全風(fēng)險(xiǎn)[23]。本研究結(jié)果還證實(shí),血清Copeptin不僅在新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害診斷中有較高的價(jià)值,還與心功能分級(jí)、心臟收縮功能障礙密切相關(guān),可作為其診治的重要參考指標(biāo)。

此外,單一指標(biāo)在檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的偏差及臨床實(shí)際中多種因素的干擾會(huì)影響指標(biāo)檢測(cè)效能,因此本研究嘗試探討血清miR-16、CF-6、Copeptin聯(lián)合檢測(cè)價(jià)值,結(jié)果發(fā)現(xiàn)三者聯(lián)合診斷新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害價(jià)值明顯優(yōu)于單一診斷,三者聯(lián)合不僅能提高診斷準(zhǔn)確性,還有利于準(zhǔn)確評(píng)估心肌損害改變情況,為臨床提供更可靠的參考依據(jù)。本研究的不足之處在于未詳細(xì)探討血清miR-16、CF-6、Copeptin水平變化對(duì)新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害患兒預(yù)后情況的影響,今后需做進(jìn)一步探討與分析。

綜上所述,血清miR-16、CF-6、Copeptin聯(lián)合檢測(cè)可作為新生兒敗血癥并發(fā)心肌損害的重要輔助診斷途徑,且三者水平變化與病情顯著相關(guān),可為臨床早期診斷、病情評(píng)估提供參考依據(jù)。