古樹大理茶優(yōu)勢內(nèi)生真菌1個新四氫-β-咔啉二酮哌嗪的分離鑒定

程璐瑤 陳肖學 張穎君 黃永林 朱國磊 李娜 趙平

摘 要：? 為挖掘古樹大理茶優(yōu)勢內(nèi)生真菌間座殼屬菌株Diaporthe tectonigena的化學成分，該研究采用硅膠、大孔吸附樹脂Diaion HP20、葡聚糖凝膠LH-20等柱層析方法，對該菌株的大米固態(tài)發(fā)酵提取物進行分離純化，并通過HRMS、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC和COSY等波譜分析，對所得化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果表明：（1）從該菌株大米固態(tài)發(fā)酵提取物中分離得到4個化合物，其中新化合物1鑒定為四氫-β-咔啉二酮哌嗪類生物堿，命名為tectonicgenazine A。（2）3個已知化合物分別鑒定為trans-cyclo-（D-tryptophanyl-L-tyrosyl）（2）、1H-吲哚-3-羧酸-2，3-二羥基丙酯（3）和N-羥乙基-2-乙酰基吡咯（4），其中化合物3為首次從自然界中分離所得。

關(guān)鍵詞： 大理茶， 內(nèi)生真菌， 間座殼屬， 固態(tài)發(fā)酵， 二酮哌嗪

中圖分類號：? Q946

文獻標識碼：? A

文章編號：? 1000-3142（2023）07-1252-06

收稿日期：? 2022-08-05

基金項目：? 國家自然科學基金（32060107， 32060327）； 云南省教育廳科學研究基金（2021Y215）。

第一作者： 程璐瑤（1999-），碩士研究生，研究方向為天然產(chǎn)物化學，（E-mail）1579193972@qq.com。

通信作者：? 趙平，博士，研究員，研究方向為天然產(chǎn)物化學，（E-mail）hypzhao2022@163.com。

Isolation and identification of a new tetrahydro-β-

carboline diketopiperazine from a predominant

endophytic fungus in ancient Camellia taliensis

CHENG Luyao1， CHEN Xiaoxue1， ZHANG Yingjun2， HUANG Yonglin3，

ZHU Guolei1， LI Na2， ZHAO Ping1*

（ 1. Key Laboratory of State Forestry and Grassland Administration on Highly-Efficient Utilization of Forestry Biomass Resources in Southwest

China， Southwest Forestry University， Kunming 650224， China; 2. State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources in West

China， Kunming Institute of Botany， Chinese Academy of Sciences， Kunming 650201， China; 3. Guangxi Key Laboratory of Functional Phytochemicals

Research and Utilization， Guangxi Institute of Botany， Guangxi Zhuang Autonomous Region and Chinese Academy of Sciences， Guilin 541006， Guangxi， China ）

Abstract：? To investigate the chemical constituents of Diaporthe tectonigena， a predominant endophytic fungus in the ancient tea tree of Camellia taliensis， the rice solid-state fermentation extract was isolated and purified by silica gel， Diaion HP20 and Sephadex LH-20 column chromatographies， and the chemical structures were elucidated by extensive HRMS， 1H-NMR， 13C-NMR， HSQC， HMBC and COSY? spectroscopic analyses. The results were as follows： （1） Four compounds were isolated from the rice solid-state fermentation extract of Diaporthe tectonigena， including a new tetrahydro-β-carboline diketopiperazine alkaloid named tectonicgenazine A （1）. （2） Three known compounds， trans-cyclo-（D-tryptophanyl-L-tyrosyl） （2）， 1H-indole-3-carboxylic acid-2，3-dihydroxypropyl ester （3） and N-hydroxyethyl-2-acetylpyrrole （4） were obtained and identified， and Compound 3 was isolated from nature for the first time.

Key words： Camellia taliensis， endophytic fungus， Diaporthe， solid-state fermentation， diketopiperazine

云南省野生茶樹資源種類繁多，被世界公認為茶樹的原產(chǎn)地和起源中心，其中大理茶（Camellia taliensis）主要分布于云南西部和西南部，是云南省野生茶樹資源中分布最廣、面積最大、適應(yīng)性最強的一個茶樹種群資源（侯寬昭，1998；段志芬等，2019；王新超等，2022；唐小艷等，2022）。作為栽培茶樹的重要野生近緣植物，大理茶具有進化上原始、抗逆性強、含有特異生化成分等特性，是極為寶貴的茶樹遺傳資源，對于茶樹品種的遺傳改良等具有重要意義（楊盛美等，2020；李榮姣等，2020）。云南省鳳慶縣小灣鎮(zhèn)香竹箐1號古茶樹“錦秀茶祖”是優(yōu)質(zhì)的大理茶資源，被認為是世界上現(xiàn)存最古老、最粗大的栽培型古茶樹（楊崇仁等，2021）。“錦秀茶祖”至今常年枝繁葉茂，提示其體內(nèi)可能擁有較為完備的微生態(tài)系統(tǒng)，對增強其環(huán)境適應(yīng)性發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)源自“錦秀茶祖”健康枝葉的內(nèi)生真菌群落表現(xiàn)出較高的物種豐富度、多樣性和均勻度，且大多數(shù)內(nèi)生真菌普遍具有較強的植物病原真菌拮抗活性（陳肖學，2019；Chen et al.， 2019；陳建英等，2020），同時也發(fā)現(xiàn)間座殼菌科（Diaporthaceae）間座殼屬（Diaporthe）真菌D. tectonigena為“錦秀茶祖”枝條中的優(yōu)勢內(nèi)生真菌之一（陳肖學，2019；Chen et al.， 2019）。

已有研究表明，間座殼屬真菌在世界范圍內(nèi)分布廣泛（楊琴，2019；龍慧，2020），從該屬真菌中已發(fā)現(xiàn)有聚酮類、生物堿類、萜類、蒽醌類等結(jié)構(gòu)新穎的次生代謝產(chǎn)物，它們具有顯著的抗腫瘤、抗菌、抗高脂血癥等生物活性（蔡佳等，2021；Nagarajan et al.， 2021；Sun et al.， 2021；Xu et al.， 2021）。此外，該屬真菌還可用于瑞香科（Thymelaeaceae）土沉香（Aquilaria sinensis）木材的菌紋形成（何海珊等，2019）。2017年，Diaporthe tectonigena首次從泰國北部的柚木（Tectona grandis）（Doilom et al.， 2017）中分離得到，并鑒定為新種，隨后高雅慧等（2017）、Zhao等（2022）先后從大豆（Glycine max）及云南產(chǎn)小葉茶（Camellia sinensis var. sinensis）中分離得到。目前為止，關(guān)于該內(nèi)生真菌Diaporthe tectonigena的研究主要集中于種類鑒定，對其次生代謝產(chǎn)物的研究未見報道。本研究采用硅膠、大孔吸附樹脂Diaion HP20、葡聚糖凝膠LH-20等柱層析方法，結(jié)合MS和NMR波譜技術(shù)手段，對香竹箐1號古樹大理茶“錦秀茶祖”健康枝條中優(yōu)勢內(nèi)生真菌D. tectonigena大米固態(tài)發(fā)酵提取物中的次生代謝產(chǎn)物進行分離鑒定，以期為該菌株活性天然產(chǎn)物的進一步挖掘和開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

供試內(nèi)生真菌菌株分離自云南省鳳慶縣小灣鎮(zhèn)香竹箐1號古樹大理茶健康無癥狀的幼嫩枝條，經(jīng)形態(tài)鑒別和分子生物學鑒定為間座殼菌科間座殼屬Diaporthe tectonigena（Chen et al.， 2019），凍存于實驗室-80 ℃超低溫冰箱中。

1.2 實驗試劑和儀器

試劑：甲醇（天津市大茂化學試劑廠，中國）、氯仿（天津市富宇精細化工有限公司，中國）、乙酸乙酯（云南汕滇藥業(yè)有限公司，中國），以上試劑均為化學純；Diaion HP20（Mitsubishi Chemical Corporation）；200～300目柱層析硅膠（青島海洋化工有限公司，中國）；Sephadex LH-20（GE Healthcare，美國）。儀器：Bruker DRX-400和Burker DRX-500超導核磁共振儀（Bruker公司，德國）；API QSTAR Pular-1質(zhì)譜儀（Applied Biosystems，美國）；Agilent G6230 TOF 質(zhì)譜儀（Applied Agilent Technologies，美國）；超凈工作臺（蘇凈集團蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司，中國）；HVE-50KB高壓蒸汽滅菌鍋（華粵行儀器有限公司，中國）；PQX-308D多段可編程人工氣候箱（寧波東南儀器有限公司，中國）；CP224C型電子天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司，中國］；超純水儀（Merck Millipore，德國）；電熱恒溫水浴鍋（山西省水文醫(yī)療器械廠，中國）；N-1001型EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化器械有限公司，日本）。

1.3 實驗方法

將菌株Diaporthe tectonigena接到PDA培養(yǎng)基上進行活化，用滅菌后的打孔器切取菌餅接入100 mL PDB培養(yǎng)基置于搖床上，在27 ℃、140 r·min-1條件下培養(yǎng)7 d。吸取5 mL發(fā)酵液加至250 mL發(fā)酵瓶中，每瓶大米固體培養(yǎng)基（大米30 g，蒸餾水45 mL）合計16 kg于27 ℃條件下靜止培養(yǎng)40 d。將已發(fā)酵的大米發(fā)酵物轉(zhuǎn)移至適當容器中，用適量乙酸乙酯浸泡并超聲輔助提取5次，合并濾液，濃縮得到乙酸乙酯提取物（297.82 g）；濾渣用適量甲醇浸提3次，合并濾液濃縮得到甲醇提取物（2 029.14 g）。

乙酸乙酯部分經(jīng)硅膠柱層析（63 cm×9.5 cm），用石油醚∶乙酸乙酯（80∶1→1∶1）、氯仿∶甲醇（80∶1→0∶1）進行梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測合并相同組分，得到Fr.1～Fr.16。Fr.15（19.87 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱（50 cm×8 cm）層析，以100%甲醇作為洗脫劑進行洗脫，合并后得到3個組分（Fr.15-1～Fr.15-3）。Fr.15-2（15.25 g）經(jīng)硅膠柱（50 cm×4.8 cm）層析，用氯仿∶甲醇∶水（60∶1∶0→8∶2∶0.2）進行洗脫，合并得到8個組分（Fr.15-2-1～Fr.15-2-8）。Fr.15-2-2（2.28 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱（45 cm×4 cm）層析，用100%甲醇洗脫，得到化合物1（9.0 mg）。組分Fr.15-2-4（6.90 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱（55 cm×4 cm）層析，用100%甲醇洗脫，得到化合物2（11.0 mg）和3（13.0 mg）。

甲醇部分經(jīng)Diaion HP20柱（60 cm×7.5 cm）層析，水洗除雜后依次用40%、60%、80%、100%甲醇進行洗脫，合并得到4個組分（Fr.1～Fr.4）。Fr.1經(jīng)Sephadex LH-20柱層析，用100%甲醇洗脫，得到3個組分（Fr.1-1～Fr.1-3）。其中Fr.1-2（9.39 g）經(jīng)硅膠柱（50 cm×4 cm）層析，用氯仿∶甲醇（30∶1、20∶1）和100%甲醇梯度洗脫，得到化合物4（5.0 mg）。

2 結(jié)果與分析

從內(nèi)生真菌Diaporthe tectonigena大米固態(tài)發(fā)酵提取物中分離得到4個化合物，經(jīng)1D-NMR、2D-NMR和HRMS分析，化合物1鑒定為新的四氫-β-咔啉二酮哌嗪，3個已知化合物分別鑒定為trans-cyclo-（D-tryptophanyl-L-tyrosyl）（2）（Ivanova et al.， 2013）、1H-吲哚-3-羧酸-2，3-二羥基丙酯（1H-indole-3-carboxylic acid-2，3-dihydroxypropyl ester）（3）（Suvorov & Golubev， 1967）和N-羥乙基-2-乙?；量∟-hydroxyethyl-2-acetylpyrrole）（4）（Zou et al.， 2013）。

化合物1為無定形白色粉末，ESI+-MS質(zhì)譜顯示其準分子離子峰m/z 382? ［M+Na］+，HR-ESI+-MS質(zhì)譜顯示準分子離子峰m/z 382.152 7? ［M+Na］+ （calcd， 382.152 6）。經(jīng)13C-NMR和 DEPT分析，化合物1中22個碳信號，其中包括1個伯碳（CH3）、2個仲碳（CH2）、12個叔碳（CH）、7個季碳（C），推測化合物1的分子量為359，分子式為C22H21N3O2，不飽和度為14。

1H-NMR譜顯示，化合物1含有1個1，2-二取代苯 ［δ： 7.16（1H，d，J = 7.8 Hz，H-12）， 6.95（1H，t，J = 7.0 Hz，H-13）， 7.08（1H，m，H-14）， 7.25（1H，d，J = 8.1 Hz，H-15）］和1個A2B2偶合系統(tǒng)的單取代苯質(zhì)子信號 ［δ： 7.08（5H，m，H-18，19，20，21，22）］，3個次甲基質(zhì)子信號 ［δ： 5.74（1H，dd，J = 7.0，3.8 Hz，H-3），4.45（1H，t，J = 3.8 Hz，H-6）， 4.11（1H，dd，J = 11.8，4.1 Hz，H-9）］，2個亞甲基質(zhì)子信號 ［δ： 2.70（2H，dd，J = 14.8，4.2 Hz，H-10），2.97（2H，dd，J = 13.9，4.9 Hz，H-16）］，1個與叔碳相連的甲基質(zhì)子信號 ［δ： 1.48（3H，d，J = 6.9 Hz，H-1′）］。13C-NMR譜除顯示除兩組苯環(huán)碳信號外，還顯示有2個羰基季碳 ［δ： 164.5（C-5），167.9（C-8）］，2個雙鍵季碳 ［δ： 132.5（C-2），105.2（C-11）］，3個叔碳 ［δ： 45.8（C-3），56.1（C-6）， 52.2（C-9）］，2個仲碳 ［δ： 25.9（C-10），39.6（C-16）］和1個甲基碳信號δC 17.5（C-1′）。通過HSQC和1H-1H COSY譜分析，將化合物1的質(zhì)子信號與碳信號進行一一歸屬（表1），進一步確定了結(jié)構(gòu)中含有1個1，2-二取代苯環(huán)和1個單取代苯環(huán)，并觀察到δH 4.11/δC 52.2（CH-9）與δH 2.70/δC 25.9（CH2-10）相連， δH 4.45/δC 56.1（CH-6）與δH 2.97/δC 39.6（CH2-16）相連，δH 5.74/δC 45.8（CH-3）與δH 1.48/δC 17.5（CH3-1′）相連（圖2），推測化合物1含有二酮哌嗪結(jié)構(gòu)。

化合物1的HMBC譜顯示δH 1.48（H-1′）與δC 132.5（C-2），δH 5.74（H-3）與δC 132.5（C-2）、δC 164.5（C-5）、δC 52.2（C-9）和δC 105. 2（C-11）之間的相關(guān)，δH 4.45（H-6）與δC 164.5（C-5）、δC 167.9（C-8）之間的相關(guān)，δH 4.11（H-9）與δC 45.8（C-3）、δC 164.5（C-5）、δC 167.9（C-8）和δC 105.2（C-11）之間的相關(guān)，δH 2.70（H-10）與δC 132.5（C-2）、δC 105.2（C-11）和δC 126.0（C-11a）之間的相關(guān)（圖2），進一步證明化合物1具有四氫-β-咔啉二酮哌嗪類的結(jié)構(gòu)單元。δH 2.97（H-16）與δC 56.1（C-6）、δC 134.9（C-17）、δC 130.0（C-18，C-22）之間的HMBC相關(guān)，表明單取代苯通過16位的亞甲基與二酮哌嗪骨架的C-6位相連。ROESY譜進一步顯示δH 5.74（H-3）/δH 4.11（H-9）/δH 2.97（H-16）、δ 1.48（CH3-1′）/δH 4.45（H-6）之間的NOE相關(guān)（圖2），表明H-3、H-9和H-16處于二酮哌嗪環(huán)的同一側(cè)，而CH3-1′和H-6位于該環(huán)的另一側(cè)，由此表明H-3、H-6和H-9的相對構(gòu)型分別為3α、6β和9α。經(jīng)SciFinder數(shù)據(jù)庫檢索，確定化合物1為新化合物，命名為tectonicgenazine A，其化學結(jié)構(gòu)如圖1所示。

3 討論與結(jié)論

本研究從香竹箐1號古樹大理茶“錦秀茶祖”健康枝條中優(yōu)勢內(nèi)生真菌Diaporthe tectonigena的大米固態(tài)發(fā)酵提取物中分離鑒定出1個新四氫-β-咔啉二酮哌嗪類生物堿tectonicgenazine A（1）和trans-cyclo-（D-tryptophanyl-L-tyrosyl）（2）、1H-吲哚-3-羧酸-2，3-二羥基丙酯（3）、N-羥乙基-2-乙?；量?）3個已知化合物，4個化合物均為首次從該菌株中分離得到，為該菌株活性天然產(chǎn)物的進一步挖掘和開發(fā)利用提供了參考?；衔?于2013年首次從玫瑰小雙孢菌青銅亞種（Microbispora rosea subsp. aerata）中分離所得（Ivanova et al.， 2013），隨后，劉震等（2018）從蘿藦科（Asclepiadaceae）娃兒藤屬（Tylophora）植物娃兒藤（T. floribunda）內(nèi)生真菌Diaporthe sp.的乙酸乙酯提取物中亦分離得到。化合物3為首次從自然界中分離所得，是1個新的天然產(chǎn)物，早在1967年其作為合成吲哚甘油酯類化合物的中間體曾被報道過（Suvorov & Golubev， 1967）。化合物4于2013年首次從大戟科（Euphorbiaceae）守宮木屬（Sauropus）植物龍脷葉（S. spatulifolius）中分離得到（Zou et al.， 2013），此前其在一些海洋吡咯的合成中作為中間體曾被報道（Jefford et al.， 1994）。四氫-β-咔啉二酮哌嗪類化合物作為特殊吲哚生物堿廣泛存在于自然界中，具有抗腫瘤、抗菌等多種生物活性，并且β-咔啉類生物堿由于其具有數(shù)量多、結(jié)構(gòu)相對簡單的特點，已然成為咔啉類生物堿中研究最為深入的一類，二酮哌嗪結(jié)構(gòu)則在藥物化學中作為重要的藥效基團而受到廣泛關(guān)注（馬養(yǎng)民等，2012；羅俊，2017；賈斌等，2018；丁娜，2021）。而新化合物tectonicgenazine A（1）是否也具有類似的生物活性還有待進一步證實，且Diaporthe tectonigena菌株中其他未知的二酮哌嗪類似物值得進一步深入挖掘。

參考文獻：

CAI J， ZHOU WY， XU GM， et al.， 2021. Research progress on natural products of fungi of Diaporthe sp.? ［J］. Chin J Chin Mat Med， 46（7）： 1717-1726.? ［蔡佳， 周雯穎， 許光明， 等， 2021. 間座殼屬Diaporthe sp.真菌的天然產(chǎn)物研究進展? ［J］. 中國中藥雜志， 46（7）： 1717-1726.］

CHEN JY， CHEN XX， LUO XL，et al.， 2020. The phytopathogenic antagonistic activity of endophytic fungi from Xiangzhuqing anicent cultivated tea? ［J］. J Yunnan Agric Univ （Nat Sci Ed）， 35（3）： 422-429.? ［陳建英， 陳肖學， 羅旭璐， 等， 2020. 香竹箐栽培古茶樹內(nèi)生真菌對植物病原真菌的拮抗活性? ［J］. 云南農(nóng)業(yè)大學學報（自然科學版）， 35（3）： 422-429.］

CHEN XX， 2019. Screening of endophytic antagonistic fungi of Xiangzhuqing No.1 ancient tea tree and secondary metabolites of the dominant fungus ［D］. Kunming： Southwest Forestry University? ［陳肖學， 2019. 香竹箐1號古茶樹內(nèi)生拮抗真菌篩選及優(yōu)勢菌代謝產(chǎn)物研究? ［D］. 昆明： 西南林業(yè)大學.］

CHEN XX， LUO XL， FAN MM， et al.， 2019. Endophytic fungi from the branches of Camellia taliensis （W. W. Smith） Melchior， a widely distributed wild tea plant? ［J］. World J Microbiol Biotechnol， 35（7）： 113.

DING N， 2021. Synthesis of tetrahydro-β-carboline via metal-free intramolecular cyclization of allenamides and propargyltryptamine ［D］. Chongqing： Southwest University for Nationalities.? ［丁娜， 2021. 非金屬誘導聯(lián)烯胺及炔丙基色胺的分子內(nèi)環(huán)化合成四氫-β-咔啉衍生物的研究? ［D］. 重慶： 西南民族大學.］

DOILOM M， DISSANAYAKE AJ， WANASINGHE DN， et al.， 2017. Microfungi on Tectona grandis （teak） in Northern Thailand ［J］. Fungal Divers， 8（1）： 107-182.

DUAN ZF， YANG SM， TANG YC， et al.， 2019. Genetic diversity analysis of Camellia taliensis from Yunnan Province? ［J］. J Shanxi Agric Sci， 47（12）： 2068-2072.? ［段志芬， 楊盛美， 唐一春， 等， 2019. 云南大理茶遺傳多樣性分析? ［J］. 山西農(nóng)業(yè)科學， 47（12）： 2068-2072.］

GAO YH， LIU F， DUAN WJ， et al.， 2017. Diaporthe is paraphyletic? ［J］. Ima Fungus， 8（1）： 153-187.

HE HS， GAN CT， HAO JQ， et al.， 2019. Study on conditions of cultivation of spalted wood on Aquilaria sinensis by 2 species of Diaporthe spp.? ［J］. J SW For Univ （Nat Sci Ed）， 39（6）： 184-188.? ［何海姍， 甘昌濤， 郝嘉奇， 等， 2019. 2株間座殼屬真菌培育白木香菌紋木的條件篩選實驗? ［J］. 西南林業(yè)大學學報（自然科學版）， 39（6）： 184-188.］

HOU KZ， 1998. Chinese dictionary of seed plant families and genera? ［M］. Beijing： Science Press： 509-510.? ［侯寬昭， 1998. 中國種子植物科屬詞典? ［M］. 北京： 科學出版社：509-510.］

IVANOVA V， LAATSCH H， KOLAROVA M， et al.， 2013. Structure elucidation of a new natural diketopiperazine from a Microbispora aerata strain isolated from Livingston Island， Antarctica? ［J］. Nat Prod Res， 27（2）： 164-170.

JEFFORD CW， SIENKIEWICZ K， THORNTON SR， 1994. A concise synthesis of two pyrroles of marine origin ［J］. Tetrahedron Lett， 35（34）： 6271-6274.

JIA B， MA YM， CHEN Z， et al.， 2018. Studies on structure and biological activity of indole diketopiperazine alkaloids ［J］. Prog Chem， 30（8）： 1067-1081.? ［賈斌， 馬養(yǎng)民， 陳鏑， 等， 2018. 天然產(chǎn)物吲哚二酮哌嗪生物堿的結(jié)構(gòu)及生物活性? ［J］. 化學進展， 30（8）： 1067-1081.］

LI RJ， KUANG XP， LIU DL， et al.， 2020. A review of Camellia taliensis? ［J］. Food Ind， 41（7）： 189-193.? ［李榮姣， 況秀平， 劉冬麗， 等， 2020. 大理茶的研究進展? ［J］. 食品工業(yè)， 41（7）： 189-193.］

LIU Z， ZHAO JY， LI Y， et al.， 2018. Investigations on secondary metabolites of endophyte Diaporthe sp. hosted in Tylophora ovata? ［J］. Chin J Chin Mat Med， 43（14）： 2944-2949.? ［劉震， 趙靜怡， 李勇， 等， 2018. 娃兒藤內(nèi)生真菌Diaporthe sp.次生代謝產(chǎn)物研究? ［J］. 中國中藥雜志， 43（14）： 2944-2949.］

LONG H， 2020. The phylogenetic study of Diaporthe in southwest China? ［D］. Guiyang： Guizhou University.? ［龍慧， 2020. 西南地區(qū)間座殼屬真菌（Diaporthe）的系統(tǒng)學研究? ［D］. 貴陽： 貴州大學.］

LUO J， 2017. Study on synthesis is and bioactivity of tetrahydro-β-carbolines? ［D］. Mianyang： Southwest University of Science and Technology.? ［羅俊， 2017. 四氫-β-咔啉生物堿衍生物的合成與活性研究? ［D］. 綿陽： 西南科技大學.］

MA YM， LI YC， YAN QR， et al.， 2012. A new synthesis method of tetrahydro-β-carboline diketopiperazine ［J］. Chem World， 53（3）： 165-168.? ［馬養(yǎng)民， 李延超， 閆倩茹， 等， 2012. 一種合成四氫-β-咔啉二酮哌嗪化合物的新方法? ［J］. 化學世界， 53（3）： 165-168.］

NAGARAJAN K， TONG WY， LEONG CR， et al.， 2021. Potential of endophytic Diaporthe sp. as a new source of bioactive compounds? ［J］. J Microbiol Biotechnol， 31（4）： 493-500.

SUN XM， LI YY， DUAN ZF， et al.， 2019. National tea tree resource garden research results are plentiful ［J］. Yunnan Agric Sci Technol， （3）： 24-26.? ［孫雪梅， 李友勇， 段志芬， 等， 2019. 國家大葉茶樹資源圃研究成果豐碩? ［J］. 云南農(nóng)業(yè)科技， （3）： 24-26.］

SUN WX， HUANG ST， XIA JW， et al.， 2021. Morphological and molecular identification of Diaporthe species in south-western China， with description of eight new species? ［J］. MycoKeys， 77： 65-95.

SUVOROV NN， GOLUBEV VE， 1967. Derivatives of indole XXXVII. synthesis of glycerides of indolyl-3-alkanoic acid and O-indolyl-3-alkylglycerins? ［J］. Khim-Farm Zh， 1（8）： 13-18.

TANG XY， WU XX， GONG YM， et al.， 2022. Study on the conservation status of ancient tea tree resources in Yunnan ［J］. Tea Fujian， 44（3）： 275-277.? ［唐小艷， 吳興興， 龔雨茂， 等， 2022. 云南古茶樹資源保護現(xiàn)狀研究? ［J］. 福建茶葉， 44（3）： 275-277.］

WANG XC， WANG L， HAO XY， et al.， 2022. Retrospect and prospect of the development and innovation of tea plant genetics and breeding in China? ［J］. J Huazhong Agric Univ， 41（5）： 1-8.? ［王新超， 王璐， 郝心愿， 等， 2022. 中國茶樹遺傳育種發(fā)展、創(chuàng)新之回顧與展望? ［J］. 華中農(nóng)業(yè)大學學報， 41（5）： 1-8.

XU TC， LU YH， WANG JF， et al.， 2021. Bioactive secondary metabolites of the genus Diaporthe and anamorph Phomopsis from terrestrial and marine habitats and endophytes： 2010-2019? ［J］. Microorganisms， 9（2）： 217.

YANG SM， JIANG HB， DUAN ZF， et al.， 2020. Biochemical components of wild tea germplasm resources （Camellia taliensis） in Yunnan： Diversity analysis? ［J］. Chin Agric Sci Bull， 36（35）： 48-54.? ［楊盛美， 蔣會兵， 段志芬， 等， 2020. 云南野生大理茶種質(zhì)資源生化成分多樣性分析? ［J］. 中國農(nóng)學通報， 36（35）： 48-54.］

YANG CR， CHEN KK， ZHANG YJ， 2021. The natural history and culture of Fengqing Jinxiuchazu? ［J］. Tea Fujian， 43（10）： 21-23.? ［楊崇仁， 陳可可， 張穎君， 2021. 鳳慶錦秀茶祖的自然歷史與文化? ［J］. 福建茶葉， 43（10）： 21-23.］

YANG Q， 2019. Taxonomy and phylogeny of Diaporthe in China? ［D］. Beijing： Beijing Forestry University.? ［楊琴， 2019. 中國間座殼屬的分類和系統(tǒng)學研究? ［D］. 北京： 北京林業(yè)大學.］

ZHANG L， HOU R， LUO NX， et al.， 2021.Identification of endophytic fungal diversity and antifungal activity in the young fruit of Vaccinium ashei? ［J］. J SW For Univ （Nat Sci Ed）， 41（1）： 62-69.? ［張林， 侯瑞， 羅妮星， 等， 2021. 兔眼藍莓幼果內(nèi)生真菌多樣性及其抑菌活性鑒定? ［J］. 西南林業(yè)大學學報（自然科學版）， 41（1）： 62-69.］

ZHAO XL， LI KN， ZHENG SJ， et al.， 2022. Diaporthe diversity and pathogenicity revealed from a broad survey of soybean stem blight in China? ［J］. Plant Dis. DOI： 10.1094/PDIS-12-21-2785-RE.

ZOU YS， FOUBERT K， TUENTER E， et al.， 2013. Antiplasmodial and cytotoxic activities of Striga asiatica and Sauropus spatulifolius extracts， and their isolated constituents? ［J］. Phytochem Lett， 6（1）： 53-58.

（責任編輯 周翠鳴 鄧斯麗）