針灸調(diào)節(jié)miR-221-3p/CCR5軸對(duì)缺血性腦卒中大鼠神經(jīng)炎癥的影響

盧 菁,王 非,張京蘭

缺血性腦卒中早期起病隱匿,發(fā)病時(shí)病情進(jìn)展迅速,多數(shù)病人遺留偏癱、認(rèn)知障礙等,影響病人身心健康[1-2]。神經(jīng)炎癥認(rèn)為是缺血性腦卒中發(fā)生及病情進(jìn)展過(guò)程中的關(guān)鍵病理因素,調(diào)控過(guò)度活躍的神經(jīng)炎癥是改善缺血性腦卒中神經(jīng)損傷的有效手段[3-4]。有研究表明,針灸可降低促炎細(xì)胞因子表達(dá),抑制炎癥細(xì)胞激活和浸潤(rùn),減輕腦缺血/再灌注后的炎癥,促使受損神經(jīng)系統(tǒng)修復(fù)[5]。針刺腦卒中大鼠陽(yáng)陵泉+配穴、關(guān)元、照海+申脈穴位,均可抑制炎癥及凋亡信號(hào)激活,減少神經(jīng)元凋亡數(shù)量[6]。針灸在缺血性腦卒中的臨床治療中亦具有明顯療效[7],但其分子機(jī)制尚未明確。有研究顯示,缺血性腦卒中病人血清miRNA-221-3p水平降低[8],上調(diào)miRNA-221-3p可抑制氧化應(yīng)激和神經(jīng)元凋亡,減輕帕金森病小鼠神經(jīng)元損傷[9]。C-C趨化因子受體5(C-C chemokine receptor 5,CCR5)是一種關(guān)鍵的神經(jīng)炎癥調(diào)控因子,其表達(dá)上調(diào)導(dǎo)致并維持持續(xù)的神經(jīng)炎癥,促使各種炎癥相關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)疾病進(jìn)展。通過(guò)TargetScanHuman 7.2數(shù)據(jù)庫(kù)可見miR-221-3p與CCR5之間有結(jié)合位點(diǎn),因此miR-221-3p/CCR5可作為缺血性腦卒中的潛在治療靶點(diǎn)[10]。本研究通過(guò)構(gòu)建缺血性腦卒中大鼠模型,觀察針灸調(diào)節(jié)miR-221-3p/CCR5軸對(duì)缺血性腦卒中大鼠神經(jīng)炎癥的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD雄性大鼠,約6周齡,購(gòu)自廈門萬(wàn)泰滄海生物技術(shù)有限公司[許可證號(hào):SCXK(閩)2018-0002],無(wú)特定病原體(SPF)級(jí),體質(zhì)量為(195±15)g,均喂養(yǎng)在本院動(dòng)物房的飼養(yǎng)籠中,動(dòng)物房條件:12 h/12 h(明/暗)交替、溫度(24.5±1.5)℃、濕度(55±5)%、噪聲≤80 dB,大鼠適應(yīng)飼養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn),并遵照3R原則給予人道關(guān)懷。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 miR-221-3p antagomir、miR-221-3p antagomir陰性對(duì)照、野生型CCR5 3′-UTR報(bào)告質(zhì)粒、miR-221-3p mimic、miR-221-3p mimic陰性對(duì)照、突變型CCR5 3′-UTR報(bào)告質(zhì)粒、miR-221-3p及U6、CCR5、GAPDH引物均購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司;三苯基氯化四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC,貨號(hào)T8170)、總RNA提取試劑盒(貨號(hào)R1200)、LipofectamineTM2000(貨號(hào)11668)、一步法實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)試劑盒(貨號(hào)T2210)、雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(貨號(hào)D0010)購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司;蘇木精-伊紅(HE)染色試劑盒(貨號(hào)ab245880)、大鼠白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-10酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒(貨號(hào)ab214566)、大鼠IL-17 ELISA試劑盒(貨號(hào)ab214028)、大鼠IL-18 ELISA試劑盒(貨號(hào)ab213909)均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司;大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞(貨號(hào)CP-R107)、大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞完全培養(yǎng)基(貨號(hào)CM-R107)購(gòu)自武漢普諾賽生命科技有限公司。

6805-D型電針儀購(gòu)自四川科儀誠(chéng)科技有限公司;XR-XY1032型大鼠Y迷宮購(gòu)自上海欣軟信息科技有限公司;HB-800S型大鼠跳臺(tái)箱及記錄儀購(gòu)自淮北軟隆生物科技公司;CM1950型冰凍切片機(jī)購(gòu)自德國(guó)Leica公司;BD-SW50型生物光學(xué)顯微鏡購(gòu)自深圳市博視達(dá)光學(xué)儀器有限公司;ND1000型酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)NanoDrop公司;CFX96 Touch Deep Well型熒光定量PCR儀購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司等。

1.3 方法

1.3.1 制備缺血性腦卒中大鼠模型及分組給藥 參照相關(guān)文獻(xiàn)[11]分離頸外動(dòng)脈和頸總動(dòng)脈后通過(guò)改良線栓法制備缺血性腦卒中大鼠模型,24 h后以Zea Longa分級(jí)法[12]對(duì)造模大鼠做神經(jīng)功能缺損評(píng)分,剔除評(píng)分為0分和4分的大鼠,將評(píng)分為1～3分的大鼠隨機(jī)分為模型組、針灸組、miR-221-3p antagomir組、miR-221-3p antagomir陰性對(duì)照組、針灸+miR-221-3p antagomir組,每組12只;另取12只SD大鼠只分離頸動(dòng)脈,不結(jié)扎、不插線,作為假手術(shù)組。

miR-221-3p antagomir組、miR-221-3p antagomir陰性對(duì)照組、針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠尾靜脈注射miR-221-3p antagomir及其陰性對(duì)照(劑量參照說(shuō)明書設(shè)定),每周1次,共注射2次;假手術(shù)組、模型組和針灸組大鼠尾靜脈注射等劑量生理鹽水,每周1次,共注射2次;針灸組、針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》定位關(guān)元穴,設(shè)定電針儀電壓為2～4 V,脈沖寬度0.5 ms,頻率2/100 Hz,舒波4 Hz,行針以大鼠出現(xiàn)輕微顫抖為宜,留針30 min,每日針灸1次,連續(xù)針灸14 d[6]。

1.3.2 大鼠神經(jīng)功能損傷 各組大鼠在最后1次針灸治療后24 h進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分。

1.3.3 大鼠學(xué)習(xí)記憶能力 各組大鼠在神經(jīng)功能損傷后,以Y迷宮實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。Y迷宮實(shí)驗(yàn):將Y迷宮的新異臂以隔板遮擋,將大鼠自起始臂放入,訓(xùn)練其在Y迷宮中自由探索活動(dòng)10 min,之后間隔4 h取下新異臂的隔板,將大鼠自起始臂放入Y迷宮,讓其在各個(gè)臂中自由探索活動(dòng),將大鼠5 min內(nèi)在各個(gè)臂中停留的時(shí)間及進(jìn)入次數(shù)。跳臺(tái)實(shí)驗(yàn):跳臺(tái)裝置接通電源,將大鼠置于反應(yīng)箱中適應(yīng)訓(xùn)練5 min,間隔4 h后再次將大鼠放入接通電源的跳臺(tái)裝置反應(yīng)箱中,將首次錯(cuò)誤跳臺(tái)的時(shí)間作為其潛伏期,之后記錄大鼠5 min內(nèi)犯錯(cuò)次數(shù)。

1.3.4 大鼠腦梗死情況及標(biāo)本采集 各組大鼠在學(xué)習(xí)記憶能力測(cè)定結(jié)束后進(jìn)行乙醚麻醉,斷頭處死,解剖取出大腦,每組隨機(jī)選出6只大鼠的大腦進(jìn)行冠狀面切片,切為大約等厚的5片,以TTC染液孵育后,拍照并采用Image J軟件對(duì)圖片分析得到腦梗死面積。每組剩余6只大鼠的大腦剪下約0.6 g存在液氮中備用;再次剪下約0.4 g加入生理鹽水研磨勻漿后離心,吸出上清后采用二喹啉甲酸法(BCA)試劑盒并參照說(shuō)明書測(cè)定總蛋白濃度,分組標(biāo)記好后保存于-80 ℃?zhèn)溆?剩余腦組織漂洗后以液氮冷凍,將凍好的組織塊置于冰凍切片機(jī)中進(jìn)行常規(guī)病理切片備用。

1.3.5 大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài) 取出腦組織切片,每只大鼠選出有典型海馬結(jié)構(gòu)的3張復(fù)溫、固定后,以HE試劑盒并參照其說(shuō)明書進(jìn)行染色,采用光學(xué)顯微鏡觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)并隨機(jī)采集每張切片上3個(gè)視野。

1.3.6 大鼠腦組織IL-17、IL-18、IL-10水平 取出腦組織樣品液置于4 ℃冰箱中,提前緩慢解凍,采用大鼠ELISA試劑盒并參照說(shuō)明書檢測(cè)IL-17、IL-18、IL-10水平。

1.3.7 大鼠腦組織miR-221-3p、CCR5 mRNA表達(dá) 取出保存于液氮中的腦組織,置于研缽中,加入總RNA提取試劑盒中的提取試劑,研磨后參照試劑盒說(shuō)明書提取出各組大鼠腦組織中總RNA,之后使用一步法RT-PCR試劑盒并參照說(shuō)明書進(jìn)行擴(kuò)增,miR-221-3p的內(nèi)參選用U6,CCR5的內(nèi)參選用GADPH,實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)經(jīng)2-ΔΔCt法分析計(jì)算后得到miR-221-3p及CCR5 mRNA相對(duì)表達(dá)量,引物序列見表1。

表1 引物序列

1.3.8 大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞中miR-221-3p對(duì)CCR5的靶向調(diào)控 解凍復(fù)蘇大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞,隨機(jī)分為野生型CCR5+miR-221-3p mimic組、野生型CCR5+miR-221-3p mimic陰性對(duì)照組、突變型CCR5+miR-221-3p mimic組、突變型CCR5+miR-221-3p mimic陰性對(duì)照組,采用LipofectamineTM2000并按照說(shuō)明書步驟,以野生型CCR5 3′-UTR報(bào)告質(zhì)粒、突變型CCR5 3′-UTR報(bào)告質(zhì)粒、miR-221-3p mimic、miR-221-3p mimic陰性對(duì)照分組轉(zhuǎn)染細(xì)胞,各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后24 h,將其消化后分組收集,以雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒且參照說(shuō)明書檢測(cè)各組細(xì)胞的雙熒光素酶相對(duì)活性[9]。

2 結(jié) 果

2.1 針灸對(duì)缺血性腦卒中大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠新異臂進(jìn)入次數(shù)減少,新異臂停留時(shí)間比及跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期縮短(P<0.05),跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)犯錯(cuò)次數(shù)增加(P<0.05)。與模型組比較,針灸組大鼠新異臂進(jìn)入次數(shù)、新異臂停留時(shí)間比及跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期延長(zhǎng)(P<0.05),跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)犯錯(cuò)次數(shù)減少(P<0.05);miR-221-3p antagomir組大鼠新異臂進(jìn)入次數(shù)、新異臂停留時(shí)間比及跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期減少(P<0.05),跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)犯錯(cuò)次數(shù)增加(P<0.05)。與針灸組比較,針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠新異臂進(jìn)入次數(shù)、新異臂停留時(shí)間比及跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期減少(P<0.05),跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)犯錯(cuò)次數(shù)增多(P<0.05);與miR-221-3p antagomir組比較,針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠新異臂進(jìn)入次數(shù)、新異臂停留時(shí)間比及跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期增多(P<0.05),跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)犯錯(cuò)次數(shù)減少(P<0.05)。詳見表2。

表2 各組大鼠Y迷宮實(shí)驗(yàn)及跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較(±s)

2.2 針灸對(duì)缺血性腦卒中大鼠腦梗死的影響 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠腦梗死面積增加(P<0.05)。與模型組比較,針灸組大鼠腦梗死面積減小(P<0.05);miR-221-3p antagomir組大鼠腦梗死面積增加(P<0.05)。與針灸組比較,針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠腦梗死面積增加(P<0.05)。與miR-221-3p antagomir組比較,針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠腦梗死面積減小(P<0.05)。詳見圖1、表3。

圖1 各組大鼠腦梗死情況(TTC)

表3 各組大鼠腦梗死面積比較(±s) 單位:%

2.3 針灸對(duì)缺血性腦卒中大鼠神經(jīng)損傷的影響 假手術(shù)組大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)完好圓潤(rùn),排列規(guī)則,神經(jīng)功能缺損評(píng)分為0分。與假手術(shù)組比較,模型組大鼠海馬神經(jīng)元發(fā)生明顯病理?yè)p傷,細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎,形態(tài)萎縮,排列紊亂,數(shù)量減少,神經(jīng)功能缺損評(píng)分升高(P<0.05)。與模型組比較,針灸組大鼠海馬神經(jīng)元病理?yè)p傷減輕,神經(jīng)功能缺損評(píng)分降低(P<0.05);miR-221-3p antagomir組大鼠海馬神經(jīng)元病理?yè)p傷加重,神經(jīng)功能缺損評(píng)分升高(P<0.05);與針灸組比較,針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠海馬神經(jīng)元病理?yè)p傷加重,神經(jīng)功能缺損評(píng)分升高(P<0.05)。與miR-221-3p antagomir組比較,針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠海馬神經(jīng)元病理?yè)p傷減輕,神經(jīng)功能缺損評(píng)分降低(P<0.05)。詳見圖2、表4。

圖2 各組大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)變化(HE,×200)

表4 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分比較(±s) 單位:分

2.4 針灸對(duì)缺血性腦卒中大鼠神經(jīng)炎癥的影響 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠腦組織抑炎因子IL-10水平降低(P<0.05),促炎因子IL-17、IL-18水平升高(P<0.05)。與模型組比較,針灸組大鼠腦組織抑炎因子IL-10水平升高(P<0.05),促炎因子IL-17、IL-18水平降低(P<0.05);miR-221-3p antagomir組大鼠腦組織抑炎因子IL-10水平降低(P<0.05),促炎因子IL-17、IL-18水平升高(P<0.05)。與針灸組比較,針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠腦組織抑炎因子IL-10水平降低(P<0.05),促炎因子IL-17、IL-18水平升高(P<0.05)。與miR-221-3p antagomir組比較,針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠腦組織抑炎因子IL-10水平升高(P<0.05),促炎因子IL-17、IL-18水平降低(P<0.05)。詳見表5。

表5 各組大鼠腦組織促炎因子IL-17、IL-18及抑炎因子IL-10水平比較(±s) 單位:pg/g prot

2.5 針灸對(duì)缺血性腦卒中大鼠腦組織miR-221-3p/CCR5軸表達(dá)的影響 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠腦組織miR-221-3p mRNA表達(dá)水平降低(P<0.05),CCR5 mRNA表達(dá)水平升高(P<0.05)。與模型組比較,針灸組大鼠腦組織miR-221-3p mRNA表達(dá)水平升高(P<0.05),CCR5mRNA表達(dá)水平降低(P<0.05);miR-221-3p antagomir組大鼠腦組織miR-221-3p mRNA表達(dá)水平降低(P<0.05),CCR5 mRNA表達(dá)水平升高(P<0.05)。與針灸組比較,針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠腦組織miR-221-3p mRNA表達(dá)水平降低(P<0.05),CCR5 mRNA表達(dá)水平升高(P<0.05)。與miR-221-3p antagomir組比較,針灸+miR-221-3p antagomir組大鼠腦組織miR-221-3p mRNA表達(dá)水平升高(P<0.05),CCR5 mRNA表達(dá)水平降低(P<0.05)。詳見表6。

表6 各組大鼠腦組織miR-221-3p、CCR5 mRNA表達(dá)水平比較(±s)

2.6 大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞中miR-221-3p對(duì)CCR5的靶向調(diào)節(jié)情況 通過(guò)TargetScanHuman 7.2數(shù)據(jù)庫(kù)查詢到miR-221-3p與CCR5之間有結(jié)合位點(diǎn),詳見圖3。與野生型CCR5+miR-221-3p mimic陰性對(duì)照組比較,野生型CCR5+miR-221-3p mimic組相對(duì)熒光素酶活性降低(P<0.05);突變型CCR5+miR-221-3p mimic陰性對(duì)照組與突變型CCR5+miR-221-3p mimic組相對(duì)熒光素酶活性比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表7。

圖3 miR-221-3p與CCR5的結(jié)合位點(diǎn)圖

表7 各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞相對(duì)熒光素酶活性比較(±s)

3 討 論

本研究采用改良線栓法構(gòu)建缺血性腦卒中大鼠模型,結(jié)果顯示,造模大鼠腦部大面積梗死,腦組織抑炎因子IL-10水平降低,促炎因子IL-17、IL-18水平升高,引發(fā)嚴(yán)重的神經(jīng)炎癥,造成大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎,形態(tài)萎縮,排列紊亂,數(shù)量減少,發(fā)生病理?yè)p傷,大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)犯錯(cuò)次數(shù)增加,新異臂進(jìn)入次數(shù)、新異臂停留時(shí)間比及跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期減少,表明大鼠學(xué)習(xí)記憶能力降低,神經(jīng)功能發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷。大腦缺血時(shí),炎性因子、活性氧等致炎因子大量釋放,觸發(fā)神經(jīng)炎癥反應(yīng),最終損傷神經(jīng)功能,控制并減弱腦內(nèi)神經(jīng)炎癥,可減輕缺血性腦卒中小鼠腦損傷[13-14]。中醫(yī)學(xué)將腦卒中歸屬于“中風(fēng)”范疇,氣血運(yùn)行不順、陰陽(yáng)失調(diào)是主要病機(jī),針灸作為一種施加于特定穴位的非特異性刺激,可調(diào)動(dòng)機(jī)體調(diào)節(jié)機(jī)制,改變組織器官病理狀態(tài),減輕機(jī)體氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng),使其恢復(fù)穩(wěn)態(tài),緩解缺血性腦卒中引發(fā)的神經(jīng)損傷,治療缺血性腦卒中時(shí)顯示出較好的臨床療效[5,15-16]。督脈針刺與常規(guī)治療結(jié)合可提高對(duì)急性缺血性腦卒中病人的療效,改善神經(jīng)功能受損癥狀[17]。本研究以針灸干預(yù)治療缺血性腦卒中大鼠,可減小大鼠腦部梗死面積,降低腦組織促炎因子IL-17、IL-18水平,升高抑炎因子IL-10水平,減輕神經(jīng)炎癥,恢復(fù)大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài),緩解病理?yè)p傷,降低大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分及跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)犯錯(cuò)次數(shù),增加新異臂進(jìn)入次數(shù)、新異臂停留時(shí)間比,延長(zhǎng)跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期,提高大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,改善神經(jīng)功能損傷,表明針灸治療通過(guò)抑制神經(jīng)炎癥減輕缺血性腦卒中大鼠腦損傷,保護(hù)神經(jīng)功能。

相關(guān)研究顯示,miRNA-221-3p可調(diào)控細(xì)胞凋亡及炎癥等病理過(guò)程,過(guò)表達(dá)miR-221-3p可抑制香煙煙霧提取物引發(fā)的肺組織炎癥反應(yīng),減輕支氣管上皮細(xì)胞凋亡水平,改善慢性阻塞性肺病癥狀[18]。miRNA-221-3p作為診斷缺血性腦卒中的潛在生物標(biāo)志物,在缺血性腦卒中病人體內(nèi)低表達(dá)[8],促進(jìn)其表達(dá)可抑制神經(jīng)元凋亡[9]。CCR5與神經(jīng)炎癥的發(fā)生及進(jìn)展密切相關(guān),鞘內(nèi)注射CCR5拮抗劑可抑制坐骨神經(jīng)損傷大鼠神經(jīng)炎癥,減輕神經(jīng)病理性疼痛[19]。CCR5通過(guò)介導(dǎo)炎癥,參與各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過(guò)程,抑制CCR5可減弱促炎信號(hào)觸發(fā)的神經(jīng)元熱下垂,減輕神經(jīng)元死亡和神經(jīng)功能缺損[20]。本研究結(jié)果顯示,針灸可上調(diào)miR-221-3p表達(dá),下調(diào)CCR5表達(dá),以miR-221-3p antagomir干預(yù)處理缺血性腦卒中大鼠,加重海馬神經(jīng)元病理?yè)p傷,減小大鼠新異臂進(jìn)入次數(shù)、新異臂停留時(shí)間比、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期、腦組織抑炎因子IL-10水平表達(dá),增加大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)犯錯(cuò)次數(shù)、神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦梗死面積、腦組織IL-17、IL-18水平及CCR5 mRNA表達(dá),表明下調(diào)miR-221-3p mRNA可促使神經(jīng)炎癥進(jìn)展,進(jìn)一步降低大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,加重神經(jīng)損傷,減弱針灸干預(yù)對(duì)神經(jīng)炎癥的抑制,拮抗其對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的提升作用,最終逆轉(zhuǎn)針灸對(duì)大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用。雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,大鼠海馬神經(jīng)元中miR-221-3p可靶向下調(diào)CCR5表達(dá),表明針灸治療減輕缺血性腦卒中大鼠神經(jīng)炎癥及腦損傷是通過(guò)上調(diào)miR-221-3p表達(dá)、下調(diào)CCR5表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述,針灸通過(guò)促進(jìn)miR-221-3p表達(dá),進(jìn)而降低CCR5表達(dá),減小缺血性腦卒中大鼠腦梗死面積,調(diào)控抗炎因子與促炎因子平衡,抑制炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng),減輕大鼠腦內(nèi)神經(jīng)炎癥損傷,增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶功能,緩解神經(jīng)功能障礙。本研究為深入闡釋針灸治療缺血性腦卒中的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),有利于臨床推廣及改進(jìn)發(fā)展。