苗藥黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊研究進(jìn)展及質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測分析

何畑林,劉育辰,劉 剛

(貴州中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,貴州 貴陽 550025)

苗藥黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊是根據(jù)苗醫(yī)藥理論,以青風(fēng)藤為君藥[1],與黑骨藤、追風(fēng)傘配伍研制而成,具有祛風(fēng)除濕、通絡(luò)止痛功效,是用于治療風(fēng)、寒、濕痹所致肩、臂、腰、腿疼痛[2]的苗藥大品種,是治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的代表藥物之一,該產(chǎn)品自上市以來市場占有率位居同類產(chǎn)品前列。目前,黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行的是“中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)(WS-10232(ZD-0232)2002)”,僅有薄層鑒別、顯微鑒別[3-4]及青藤堿單一指標(biāo)成分的含量測定,檢測指標(biāo)單一,難以控制制劑質(zhì)量,也無法反映該制劑質(zhì)量的整體性。本研究旨在總結(jié)黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊及各單味藥化學(xué)成分、各單味藥藥理作用并預(yù)測其質(zhì)量標(biāo)志物(Quality marker,Q-Marker),為建立以Q-Marker為指標(biāo)的黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供理論依據(jù),構(gòu)建既體現(xiàn)中醫(yī)藥特色,又關(guān)聯(lián)臨床療效的中藥復(fù)方制劑質(zhì)量評價新模式,以期解決中藥復(fù)方制劑質(zhì)量評價體系不全面、指標(biāo)成分與功效關(guān)聯(lián)性不強(qiáng)等關(guān)鍵問題,為完善中藥復(fù)方制劑質(zhì)量評價體系提供新思路。

1 化學(xué)成分

班小紅[1]從黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊中分離并鑒定出19種化合物(化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1),其中,7個生物堿類化學(xué)成分:尖防己堿(1)、青藤堿(2)、dauricumine(3)、青藤酮堿(4)、尖防己定堿(5)、蝙蝠葛波酚堿(6)、蝙蝠葛寧(7);5個木質(zhì)素類化學(xué)成分:丁香樹脂雙葡萄糖苷(8)、thero-1-C-syringyl-glycerol(9)、(-)-丁香樹脂酚(10)、Cleomiscosin C(11)、Icariol A2(12);3個甾體類成分:滇杠柳苷元(13)、杠柳苷(14)、β-谷甾醇(15);1個三萜類成分:熊果酸(16);3個其他類成分:丁香醛(17)、丁香酸(18)、鄰苯二酚(19)。

圖1 黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊化合物結(jié)構(gòu)

2 藥理作用

2.1 抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)

古金華等[5]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊能減少miR-146a、miR-16 的表達(dá),從而達(dá)到減輕RA癥狀的效果。駱鏡妃等[6]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊降低大鼠足腫脹效果,在第21天較強(qiáng)的松、吲哚美辛明顯;能降低IL-1β、TNF-α 水平,治療效果與強(qiáng)的松、吲哚美辛相當(dāng),但I(xiàn)L-10較給藥前有所升高。包喜文等[7]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊可以抑制促炎因子IL-1β、IFN-γ、IL-15 的異常表達(dá)。邰灣等[8]通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)推斷出STAT1-ERKs 相關(guān)通路可能是其抗RA 潛在的作用方向。另外,黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊可抑制IL-12信號通路,并抑制此通路誘導(dǎo)的IL-12R及Stat4的產(chǎn)生[9]。劉楊等[10]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊能降低大鼠足跖腫脹度,降低滑膜組織 p-PI3K、p-AKT、HIF-1α、Bcl-2 等蛋白的表達(dá),上調(diào)血漿中IL-4的表達(dá)并下調(diào)血漿中IL-2、IL-17的表達(dá),以此得出黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊能通過調(diào)節(jié) PI3K/AKT/HIF-1α 信號通路,對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠炎性反應(yīng)起到抑制作用的結(jié)論。梁江等[11]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊可以降低CIA大鼠足跖腫脹度,降 低 CIA 大 鼠 NF-κBp65、p-NF-κBp65、RANKL 蛋白水平,增加 IκBα 蛋白表達(dá),并得出結(jié)論,黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊通過抑制NF-κB 通路相關(guān)蛋白活性起到減輕關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)的作用。

2.2 抗骨關(guān)節(jié)炎(OA)

盧云[12]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊可能通過MPAK、NF-κB、PI3K/AKT、VEGF等信號通路,抑制血清中MMP9、PRKCA的表達(dá)水平,改善寒濕痹阻型KOA患者關(guān)節(jié)癥狀、功能,從而延緩疾病發(fā)展。古金華等[13]發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊可以顯著緩解風(fēng)寒濕痹型膝骨關(guān)節(jié)炎患者疼痛及功能障礙,患者服藥6周后,血清中TGF-β1、IL-1、CTX-β、CRP濃度明顯下降。結(jié)果提示,黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊可通過調(diào)節(jié)免疫、抗炎、鎮(zhèn)痛,覆蓋風(fēng)寒濕痹型膝骨關(guān)節(jié)炎的多重發(fā)病機(jī)理,從源頭抑制炎性細(xì)胞及炎性因子活性,改善患者臨床癥狀,從根本上治療風(fēng)寒濕痹型膝骨關(guān)節(jié)炎。

3 臨床應(yīng)用

目前,黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊主要用于關(guān)節(jié)類疾病,以治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎為主。

3.1 治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)

黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊可聯(lián)合甲氨蝶呤治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,可協(xié)同發(fā)揮作用,增強(qiáng)藥效,促進(jìn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎癥狀改善。較單一用藥,聯(lián)合用藥的不良反應(yīng)更少,療效更優(yōu)[14-16]。古金華等[5]研究發(fā)現(xiàn),患者在服用洛索洛芬鈉基礎(chǔ)上,加用黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊治療后,關(guān)節(jié)腫脹個數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛個數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)、休息痛分?jǐn)?shù)及晨僵時間減少,雙手平均握力增加,患者血清中ERS、CRP、RF含量降低,關(guān)節(jié)液IL-17A、IL-18、IL-27含量降低,關(guān)節(jié)液miR-146a、miR-16表達(dá)降低,且上述指標(biāo)均優(yōu)于洛索洛芬鈉與氨甲蝶呤片聯(lián)合用藥組,療效更加顯著?，F(xiàn)有研究證明,黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊與洛索洛芬鈉、氨甲蝶呤片聯(lián)合用藥后,輔以針刺療效更優(yōu)。王可博等[17]在上述條件下輔以針刺后,臨床效果優(yōu)于服藥組;呂曉薇[18]在上述服藥條件下,得到黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊與洛索洛芬鈉、氨甲蝶呤片聯(lián)合用藥并結(jié)合針法,較單獨服用西藥療效更顯著。

3.2 治療關(guān)節(jié)炎(OA)

盧云[12]研究發(fā)現(xiàn),予美洛昔康、鹽酸氨基葡萄糖膠囊聯(lián)合黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊的治療效果優(yōu)于單獨服用美洛昔康、鹽酸氨基葡萄糖膠囊。古金華等[13]研究了黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊治療風(fēng)寒濕痹型膝骨關(guān)節(jié)炎的臨床效果,結(jié)果說明,黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊可顯著緩解風(fēng)寒濕痹型膝骨關(guān)節(jié)炎疼痛及功能障礙,并有利于軟骨修復(fù)。

4 Q-Marker預(yù)測分析

質(zhì)量標(biāo)志物(Q-Marker)是劉昌孝院士提出的新型概念,指存在于中藥材和中藥產(chǎn)品(中藥飲片、中藥煎劑、中藥提取物、中成藥制劑等)中固有的或加工制備過程中形成的,與中藥的功能屬性密切相關(guān)的化學(xué)物質(zhì),作為反映中藥安全性和有效性的標(biāo)志性物質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量控制[19]。近年來,諸多學(xué)者基于此概念對保元湯[20]、痹祺膠囊[21]、桃紅四物湯[22]、當(dāng)歸補(bǔ)血湯[23]、玉泉丸[24]等復(fù)方藥物進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)志物的預(yù)測分析。

中藥質(zhì)量標(biāo)志物具有有效性高度關(guān)聯(lián)、整體且多元質(zhì)控的特點[24],中藥復(fù)方藥的質(zhì)量標(biāo)志物是基于質(zhì)量傳遞與溯源、成分特有性、成分與藥效關(guān)聯(lián)、復(fù)方配伍環(huán)境、成分可測性[25]等5項原則預(yù)測。研究路徑見圖2。

圖2 基于“五原則”的黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊Q-Marker研究路徑

4.1 基于質(zhì)量傳遞與溯源的Q-Marker預(yù)測分析

筆者通過搜索中國知網(wǎng)、萬方、維普等數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn),黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊、苗藥追風(fēng)傘的藥代動力學(xué)研究尚未見報道,因而調(diào)研了制劑中黑骨藤與青風(fēng)藤的入血成分,以此作為分析該膠囊Q-Marker的依據(jù)。

4.1.1 黑骨藤 根據(jù)現(xiàn)有藥代動力學(xué)研究,黑骨藤共有17個入血成分,其中,10個為原型成分,7個為代謝產(chǎn)物。經(jīng)鑒定,7個原型吸收入血成分為3-O-咖啡?；鼘幩?綠原酸)、4-O-咖啡?；鼘幩?隱綠原酸)、5-O-咖啡?；鼘幩?新綠原酸)、3,4-O-二咖啡酰基奎寧酸(異綠原酸B)、3,5-O-二咖啡?；鼘幩?異綠原酸A)、4,5-O-二咖啡?；鼘幩?異綠原酸C)和杠柳毒苷[26-30]。

4.1.2 青風(fēng)藤 青風(fēng)藤入血成分有7種:4-hydroxy-3,6-dimethoxyl-17-methyl-morphinan-7-one、尖防己堿、青藤堿、丁香苷、土藤堿、青風(fēng)藤堿、木蘭花堿,其中,青藤堿、土藤堿、青風(fēng)藤堿、木蘭花堿為原型吸收入血成分[31-32]。

新學(xué)期不少年輕教師要組建運動隊（以田徑隊為例）進(jìn)行業(yè)余訓(xùn)練，新團(tuán)隊的凝聚力培養(yǎng)是團(tuán)隊建設(shè)與管理的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是對年輕教師執(zhí)教能力的考驗與管理能力的挑戰(zhàn)。年輕教師要善于學(xué)習(xí)與借鑒優(yōu)秀教師的管理藝術(shù)，從團(tuán)隊建設(shè)的幾個關(guān)鍵點著手，加強(qiáng)團(tuán)隊凝聚力的培養(yǎng)和引導(dǎo)，運動隊管理才能取得良好的效果。

根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)推測,綠原酸、隱綠原酸、新綠原酸、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、杠柳毒苷、4-hydroxy-3,6-dimethoxyl-17-methyl-morphinan-7-one、尖防己堿、青藤堿、丁香苷、土藤堿、青風(fēng)藤堿、木蘭花堿這些成分可能是黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊發(fā)揮藥理作用的有效成分。

4.2 基于成分特有性的Q-Marker預(yù)測分析

4.2.1 青風(fēng)藤特有成分分析 青風(fēng)藤是防己科植物青藤Sinomeniumacuturn(Thunb.)Rehd.et Wils.及毛青藤Sinomeniumacutum(Thunb.)Rehd.et Wils.Var.cinereum Rehd.et Wils.的干燥藤莖。青風(fēng)藤中主要含有生物堿、三萜、木脂素等成分[33-34],其中,生物堿是其主要的活性成分,如青藤堿、木蘭花堿等。現(xiàn)有研究證明,青風(fēng)藤中的青藤堿是治療RA的有效成分之一[35-37],特征性較強(qiáng)。

4.2.2 黑骨藤特有成分分析 黑骨藤為蘿藦科杠柳屬植物黑龍骨PeriplocaforrestiiSchltr.的干燥根或全株,主要含有黃酮類、苯丙素類、甾體等成分[38],其中的咖啡?；鼘幩犷惓煞质侵委烺A的有效成分[39-40],且含量較高[41],具有特征性。

4.2.3 追風(fēng)傘特有成分分析 追風(fēng)傘為報春花科植物狹葉落地梅LysimachiaparidiformisFranch.var.Stenophylla.Franch.和落地梅LysimachiaparidiformisFranch.的全草。追風(fēng)傘主要含有黃酮、甾體、苯丙素及揮發(fā)油等主要成分[42],其中,總黃酮具有生物活性[43],具有特征性。

4.3 基于成分與藥效關(guān)聯(lián)的Q-Marker預(yù)測分析

質(zhì)量控制的最終目的是提升藥效。因此,“有效”是Q-Marker的核心要素。本研究調(diào)研發(fā)現(xiàn),有關(guān)黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊研究多集中于藥理作用、臨床病例觀察研究,對其抗RA作用的具體化學(xué)成分尚未見報道,因此本課題組后續(xù)也將在此領(lǐng)域展開研究。

青風(fēng)藤其味苦、辛,性平,歸肝、脾經(jīng),具有祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)、利小便之功,可用于風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)腫脹、麻痹瘙癢,常用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,現(xiàn)被收載于2020版《中華人民共和國藥典》[44]。青風(fēng)藤治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的有效成分為生物堿類,其中,青藤堿與青風(fēng)藤堿抗炎活性較好[35-36];黑骨藤有祛風(fēng)除濕、通經(jīng)活絡(luò)之功效,用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、跌打損傷、乳腺炎、閉經(jīng)等病癥[45]?，F(xiàn)有研究表明,黑骨藤治療RA的關(guān)鍵成分可能為咖啡酰基奎寧酸類成分,其中,以綠原酸、1,3-O-二咖啡?；鼘幩岬捏w外抗RA效果最好[39-40];追風(fēng)傘具有祛風(fēng)通絡(luò)、活血止痛之功效,用于治療風(fēng)濕痹痛、四肢拘攣、半身不遂、小兒驚風(fēng)、跌仆、骨折[46-47]。目前,追風(fēng)傘具體有效成分尚不明晰。根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn),追風(fēng)傘所含有的黃酮類成分刺槐素(又稱金合歡素)、槲皮素、山柰酚、木犀草素具有抗RA的作用[48-52]。其中,木犀草素對關(guān)節(jié)起保護(hù)作用[52],其苷類成分具有抗炎作用[53-54]。

綜上所述,推測黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊抗RA的Q-Marker可能為青藤堿、青風(fēng)藤堿、3-O-咖啡?；鼘幩?綠原酸)、刺槐素、槲皮素、山柰酚、木犀草素及其苷類成分。

4.4 基于復(fù)方配伍環(huán)境的Q-Marker預(yù)測分析

4.5 基于成分可測性的Q-Marker預(yù)測分析

“成分可測性”是質(zhì)量標(biāo)志物應(yīng)用的必備條件,包括指標(biāo)成分、指示性成分、類成分和全息成分[55]?！吨袊幍洹?020版規(guī)定青風(fēng)藤含量測定的成分為青藤堿[44];安蘭蘭等[41]已建立HPLC測量黑骨藤咖啡?；鼘幩犷惓煞趾康姆椒?追風(fēng)傘中綠原酸、蘆丁、異鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素及刺槐素相關(guān)含量測定也已見報道[56]。

在Q-Marker的預(yù)測過程中,應(yīng)將上述5點相結(jié)合,選取方便檢測、有藥效且特征明顯的成分,綜合推斷綠原酸、1,3-O-二咖啡?；鼘幩帷⒛鞠菟?、刺槐素、青藤堿、青風(fēng)藤堿可作為黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊的Q-Marker。

5 結(jié)語

中藥復(fù)方藥質(zhì)量評價較為復(fù)雜,學(xué)界對少數(shù)民族經(jīng)驗用藥研究尚有限,許多藥物的化學(xué)成分、有效成分、藥理作用、藥代動力學(xué)研究較為空缺,這更加增加了評價民族藥復(fù)方藥質(zhì)量評價的難度。

以黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊為例,其作為上市多年的苗藥,深受廣大類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的好評,但其仍存在藥效基礎(chǔ)不明確、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)低等不足。單味藥是組成復(fù)方藥的基礎(chǔ),黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊中的追風(fēng)傘,學(xué)界對其研究較少,今后應(yīng)分析其有效成分。因此,黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊今后的研究方向或?qū)⒓杏诨瘜W(xué)成分、藥代動力學(xué)、研究量效關(guān)系控制等方面。

本研究基于質(zhì)量傳遞與溯源、成分特有性、成分與藥效關(guān)聯(lián)、復(fù)方配伍環(huán)境、成分可測性等原則,推斷黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的Q-Marker可能為綠原酸、1,3-O-二咖啡酰基奎寧酸、木犀草素、刺槐素、青藤堿、青風(fēng)藤堿。今后將著重研究以上成分是否能作為評價黑骨藤追風(fēng)活絡(luò)膠囊抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的質(zhì)量標(biāo)志物。