不同基原吳茱萸藥材中質(zhì)量標(biāo)志物預(yù)測(cè)分析:基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和指紋圖譜

邢菊玲,羅宇琴,吳文平,楊曉東,劉曉琳,李國(guó)衛(wèi),鄧成程,羅文匯1,*

(1.廣東一方制藥有限公司,廣東 佛山 528244;2.廣東省中藥配方顆粒企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 佛山 528244;3.湖南一方天江藥業(yè)有限公司,湖南 常德 415000)

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Euodiarutaecarpa(Juss.)Benth.、石虎Euodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.officinalis(Dode)Huang 或疏毛吳茱萸Euodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang的干燥近成熟果實(shí),又名食茱萸、吳萸、茶辣、漆辣子等,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,列為中品,其味辛、苦,熱,有小毒,歸肝、脾、胃、腎經(jīng),具有溫脾止瀉、散寒止痛、降逆止嘔等功效,常用于厥陰頭痛、寒疝腹痛、寒濕腳氣、經(jīng)行腹痛、脘腹脹痛、嘔吐吞酸、五更泄瀉等[1]。原植物以栽培為主,全國(guó)各地都有大面積的栽種,主產(chǎn)于江西、廣西、安徽、重慶等地區(qū)[2],但因各地采收季節(jié)差異、異地引種及基原多樣等原因,導(dǎo)致各地吳茱萸藥材的質(zhì)量差異非常大[3],因此,建立一套完善的吳茱萸藥材質(zhì)量控制及評(píng)價(jià)體系,對(duì)于確保優(yōu)質(zhì)及穩(wěn)定的藥材資源十分重要。

2016年劉昌孝院士首次提出中藥質(zhì)量標(biāo)志物(Quality markers,Q-Marker)概念,提出基于溯源與傳遞性、特有性、可測(cè)性、有效性以及處方配伍這5項(xiàng)核心原則,進(jìn)行中藥安全性及有效性的標(biāo)示性物質(zhì)的質(zhì)量研究[4-5]。另外,網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)(Network pharmacology)作為新興學(xué)科,是以系統(tǒng)生物學(xué)和藥理學(xué)為理論基礎(chǔ),應(yīng)用生物分子網(wǎng)絡(luò)分析方法揭示了“藥物-基因-靶點(diǎn)-疾病”之間復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系[6]。目前,已廣泛將其運(yùn)用于單味中藥及復(fù)方中藥的研究[7-8]。本研究整合化學(xué)、數(shù)理統(tǒng)計(jì)及生物信息學(xué)等多種方法,進(jìn)行吳茱萸網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及指紋圖譜的潛在Q-Marker預(yù)測(cè),旨在建立吳茱萸藥材的質(zhì)量控制方法,為吳茱萸的質(zhì)量控制及后續(xù)開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters高效液相色譜儀(Waters H-Class,沃特世公司);YMC Triart C18色譜柱(100mm×2.1mm,1.9μm);萬(wàn)分之一分析天平(ME204E,梅特勒-托利多公司);百萬(wàn)分之一分析天平(XP26,梅特勒-托利多公司);數(shù)控超聲波清洗器(KQ500D,昆山市超聲儀器有限公司);恒溫水浴鍋(上海一恒科技有限公司,型號(hào):HWS28型);超純水系統(tǒng)(默克股份有限公司,Milli-Q Direct)。

1.2 試藥

新綠原酸(批號(hào):wkq18030107,含量98%,四川維克奇生物科技有限公司);綠原酸(批號(hào):110753-202018,含量96.1%);金絲桃苷(批號(hào):111521-201809,含量94.9%);橙皮苷(批號(hào):110721-202019,含量95.3%);去氫吳茱萸堿(批號(hào):112075-202101,含量99.6%)、吳茱萸堿(批號(hào):110802-201710,含量99.6%)、吳茱萸次堿(批號(hào):110801-201608,含量99.7%),均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;乙醇(天津市富宇精細(xì)化工有限公司,分析純);甲醇(天津市富宇精細(xì)化工有限公司,分析純);磷酸(天津市富宇精細(xì)化工有限公司,色譜純);乙腈(默克股份有限公司,色譜純);水為超純水(實(shí)驗(yàn)室自制)。研究所用藥材,經(jīng)廣東一方制藥有限公司主任中藥師魏梅進(jìn)行鑒定。鑒定結(jié)果,見(jiàn)表1。

表1 吳茱萸藥材來(lái)源

2 方法與結(jié)果

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)吳茱萸藥材的Q-Marker預(yù)測(cè)分析

2.1.1 吳茱萸活性成分的篩選 通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(tái)(TCMSP(http://tcmspw.com/tcmsp.php)和中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺(tái)(http://www.tcmip.cn/TCMIP/index.php/Home/),以“吳茱萸”為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索,其中TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)獲得口服生物利用度(OB≥30%)及類藥性(DL≥0.18)的化學(xué)成分共30個(gè),相關(guān)靶點(diǎn)共201個(gè);TCMIP數(shù)據(jù)庫(kù)獲得16個(gè)有效成分,相關(guān)靶點(diǎn)共133個(gè);再通過(guò)靶點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)庫(kù)UniProt(https://www.uniprot.org/)上傳上述得到藥物成分靶點(diǎn)(target name),蛋白種屬設(shè)置為“Homo sapiens(Human)”,刪除重復(fù)靶點(diǎn)后共得到活性成分相關(guān)靶點(diǎn),共209個(gè)。

2.1.2 蛋白質(zhì)相互作用(PPI)的構(gòu)建及其核心網(wǎng)絡(luò)篩選 將上述靶點(diǎn)導(dǎo)入在線網(wǎng)站STRING 11.5(https://string-db.org),選用Multiple proteins 工具,種屬設(shè)置為“Homo sapiens(Human)”,獲取蛋白相互作用關(guān)系,根據(jù)最高級(jí)篩選條件“highest confidence(≥0.9)”,得到聯(lián)系最緊密的PPI網(wǎng)絡(luò),并保存TSV格式文件。將文件中的node1,node2,combined score整理導(dǎo)入Cytoscape 3.6.1軟件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)分析,得到蛋白質(zhì)相互作用圖(圖1),該網(wǎng)絡(luò)含有119節(jié)點(diǎn)和736條邊,網(wǎng)絡(luò)中靶點(diǎn)大小和顏色可反映節(jié)點(diǎn)degree值和節(jié)點(diǎn)之間的combined score,并應(yīng)用插件Network Analyzer分析網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)度Degree,其中,degree值排名前3的基因分別是ESR1(degree=23)、RELA(degree=22)、PIK3R1(degree=20)、RXRA(degree=20)。

圖1 蛋白-蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)

2.1.3 GO生物過(guò)程和KEGG通路富集分析 通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù),上傳上述得到的209個(gè)靶蛋白基因并進(jìn)行GO生物過(guò)程及KEGG信號(hào)通路的富集分析。以P<0.05為篩選條件,共得到了119個(gè)GO條目,主要涉及神經(jīng)遞質(zhì)受體、類固醇激素受體、核受體活性及配體門控離子通道活性、門控氯離子通道活性等分子功能。另外,KEGG結(jié)果分析,共富集157條信號(hào)通路(P<0.05),主要涉及脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化、鈣信號(hào)通路、小細(xì)胞肺癌、甲狀腺激素信號(hào)通路、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子信號(hào)通路、AGE-RAGE信號(hào)通路和cAMP等信號(hào)通路,并根據(jù)P值從小到大排序,選擇P值在Top20條的KEGG信號(hào)通路進(jìn)行可視化處理。見(jiàn)圖2。

圖2 KEGG通路富集分析氣泡圖

2.1.4 “活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)”的構(gòu)建 將上述Top20條的KEGG信號(hào)通路及對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)及成分導(dǎo)入軟件Cytoscape 3.6.1得到吳茱萸活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)圖(圖3),該網(wǎng)絡(luò)包含173個(gè)節(jié)點(diǎn)、609條邊,其中紫色菱形代表活性成分(30)、黃色橢圓代表靶點(diǎn)(123)、紅色六邊形代表信號(hào)通路(20),可見(jiàn)一種活性成分對(duì)應(yīng)多個(gè)靶點(diǎn),一個(gè)靶點(diǎn)也對(duì)應(yīng)多種成分、多條通路,從而更加直觀地體現(xiàn)了中藥多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn),其中,網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)度Degree值較高的成分有槲皮素(degree=49)、Goshuyic Aci(degree=22)、異鼠李素(degree=12)、β-谷甾醇(degree=12)、花色苷(degree=10)、Synephrine(degree=8)、吳茱萸酰胺甲(degree=8)、吳茱萸堿(degree=6)、Rutalinidine(degree=5)、1-甲基-2-壬基-4-喹諾酮(degree=5)、小檗堿(degree=4)、吳茱萸次堿(degree=4)、1-甲基-2-十五烷基-4-喹諾酮(degree=4)、吳茱萸卡品堿(degree=4)、穆茱萸酰胺(degree=4),Degree值較高的靶點(diǎn)有AR(degree=19)、PIK3R1(degree=15)、PIK3CA(degree=15)、RELA(degree=14)、RAF1(degree=14)、CHRM1(degree=13)、CHRM3(degree=12)、CASP9(degree=12)、PRKCA(degree=12),表明吳茱萸能通過(guò)以上核心活性成分及核心靶點(diǎn)作用于AGE-RAGE信號(hào)通路、cAMP等信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮作用。

圖3 活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)

2.2 吳茱萸指紋圖譜定性分析

2.2.1 色譜條件 色譜柱為YMC Triart C18(100mm×2.1mm,1.9μm);流動(dòng)相為乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B),梯度洗脫:0～9min,92% B;9～18min,92%～70% B;18～28min,70%～20% B;28～33min,20%～0% B;體積流量為0.3mL/min;柱溫為30℃;進(jìn)樣量為1μL;檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm,理論板數(shù)按吳茱萸堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 取新綠原酸對(duì)照品、綠原酸對(duì)照品、金絲桃苷對(duì)照品、橙皮苷對(duì)照品、去氫吳茱萸堿對(duì)照品、吳茱萸堿對(duì)照品、吳茱萸次堿對(duì)照品適量,精密稱定,加70%甲醇溶液制成每1mL各含5μg的混合溶液,即得。

2.2.3 供試品溶液制備 取吳茱萸藥材(過(guò)四號(hào)篩)約0.3g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入70%甲醇50mL,稱定重量,超聲處理(功率300W,頻率40kHz)40min,放冷,再稱定重量,用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.2.4 方法學(xué)考察 (1)精密度考察:取同一供試品溶液,按照“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件,重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄色譜圖,以與吳茱萸堿參照物相應(yīng)的峰為S峰,計(jì)算各特征峰與S峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間與相對(duì)峰面積RSD值<3%,表明儀器精密度良好。

(2)重復(fù)性考察:取同一批吳茱萸藥材粉末(過(guò)四號(hào)篩)適量,共6份,按照“2.3.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按照“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件,進(jìn)樣分析,記錄色譜圖,以吳茱萸堿峰為S峰,計(jì)算各特征峰與S峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積的RSD值<3%,表明該方法的重復(fù)性良好。

(3)穩(wěn)定性考察:取同一供試品溶液,按照“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件,分別在0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣分析,記錄色譜圖,以吳茱萸堿峰為S峰,計(jì)算各特征峰與S峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果顯示各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積的RSD值<3%,表明供試溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.5 樣品測(cè)定 取18批吳茱萸樣品,按照“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按照“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析,得到18批吳茱萸UPLC指紋圖譜。將所得數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》(2012 年版),建立指紋圖譜并生成指紋圖譜共有模式(圖4)。指紋圖譜中共標(biāo)定出18個(gè)共有峰,通過(guò)與對(duì)照品比對(duì),分別指認(rèn)出新綠原酸(峰4)、綠原酸(峰6)、金絲桃苷(峰9)、橙皮苷(峰11)、去氫吳茱萸堿(峰12)、吳茱萸堿(峰14)、吳茱萸次堿(峰15)等7個(gè)共有峰,其中,吳茱萸堿(峰14)出峰位置適宜,色譜峰較穩(wěn)定、響應(yīng)值高,故確定為參照峰S。

圖4A 吳茱萸UPLC指紋圖譜疊加

2.2.6 數(shù)據(jù)分析 (1)相似度分析:對(duì)18批樣品的指紋圖譜峰面積(表2),通過(guò)《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》(2012B)軟件進(jìn)行匹配,以平均數(shù)法進(jìn)行共有峰標(biāo)識(shí),分別得到不同來(lái)源樣品相似度。計(jì)算結(jié)果,見(jiàn)表3。

表3 18批吳茱萸樣品指紋圖譜相似度分析結(jié)果

從上述相似度分析結(jié)果來(lái)看,結(jié)合基原差異,得到18批樣品與對(duì)照模式相似度為:吳茱萸基原相似度為0.993～0.984、石虎基原相似度為0.531～0.816,從整體來(lái)看,以吳茱萸基原樣品相似度較高。

(2)聚類分析:對(duì)18批吳茱萸藥材指紋圖譜峰面積進(jìn)行分析,通過(guò)SPSS 20.0版軟件進(jìn)行系統(tǒng)聚類,采用組間連接法,選用平方歐氏距離為樣品間距離計(jì)算方法,得到聚類分析結(jié)果,見(jiàn)圖5。

從上圖可知,可將吳茱萸藥材分為2類,其中S1～S10為第一類,均為吳茱萸基原藥材;S11～S18為第二類,均為石虎基原藥材,說(shuō)明不同基原吳茱萸藥材差異顯著,與相似度分析結(jié)果一致。

(3)主成分分析:應(yīng)用SPSS 20.0軟件對(duì)不同產(chǎn)地吳茱萸藥材指紋圖譜峰面積進(jìn)行分析,進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理后進(jìn)行主成分分析,得出相關(guān)矩陣的特征值及其方差,抽樣適合性檢驗(yàn)系數(shù)KMO值=0.624>0.6,巴特利特球形度P= 0.00<0.05,主成分分析結(jié)果見(jiàn)表4、圖6。由表4可知,前2個(gè)成分的特征值>1,對(duì)總方差的累積貢獻(xiàn)率達(dá)88.737%,故選擇上述兩個(gè)成分作為第1和第2主成分,且碎石圖中前2個(gè)特征值的變化曲線陡峭,表明這2個(gè)主成分因子可作為吳茱萸藥材整體質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)。

圖6 碎石圖

表4 解釋的總方差

成分矩陣見(jiàn)表5,由表5可知,峰主成分峰1～3、9、11、13～16、18在主成分1上載荷絕對(duì)值最大,峰12主成分3上的載荷量最大。說(shuō)明包括峰14(吳茱萸堿)、峰15(吳茱萸次堿)等在內(nèi)的生物堿類成分及其他有機(jī)酸類成分對(duì)吳茱萸藥材整體質(zhì)量影響較大。

表5 成分矩陣

應(yīng)用主成分分析方法,根據(jù)因子得分系數(shù)矩陣及特征向量法,得出綜合評(píng)價(jià)函數(shù)Y綜合得分表達(dá)式為:Y=0.079 528×Y1+0.009 209×Y2,其中Y1、Y2為各批次樣品與2個(gè)主成分得分。計(jì)算所得18批樣品的主成分得分,見(jiàn)表6,從分析結(jié)果可知,相較于石虎,吳茱萸基原綜合得分較高,藥材質(zhì)量總體上較好。

表6 樣品得分

3 討論

吳茱萸為臨床常用中藥,其原植物來(lái)源于蕓香科吳茱萸屬植物吳茱萸、石虎或疏毛吳茱萸的干燥未成熟果實(shí)。其植物形態(tài)特征較為相似,目前藥用的吳茱萸主要以栽培為主,野生較少,從分布情況來(lái)看,吳茱萸主要分布于江西、貴州、重慶部分地區(qū),石虎主要分布在江西、湖南等地,疏毛吳茱萸主要分布于貴州、浙江、陜西等省的部分地區(qū)[9]。熊紅紅[10]對(duì)吳茱萸商品藥材流通情況進(jìn)行了調(diào)查,發(fā)現(xiàn)吳茱萸主要商品藥材以原植物來(lái)源的吳茱萸的各種栽培品種為主,以石虎來(lái)源為輔,疏毛吳茱萸在市場(chǎng)上所占比例很小,且疏毛吳茱萸產(chǎn)地較少,種植面積較小。因此,本研究結(jié)合吳茱萸資源分布情況及研究的代表性,綜合收集了來(lái)自江西、廣東等產(chǎn)地的多批吳茱萸、石虎樣本,由相似度分析結(jié)果可知,吳茱萸基原相似度在0.993～0.984,石虎基原相似度在0.531～0.816,即吳茱萸基原樣品相似度較高,且與石虎基原樣品有顯著區(qū)別;由聚類分析結(jié)果可知,18批次吳茱萸樣品可分為2類,其中S1～S10吳茱萸基原藥材歸為第一類,S11～S18石虎基原藥材歸為第二類,結(jié)果同相似度分析。說(shuō)明不同產(chǎn)地、不同生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)吳茱萸藥材質(zhì)量有一定的影響。

本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法進(jìn)行吳茱萸藥材Q-Marker的預(yù)測(cè)分析,共涉及有效成分30個(gè)、相關(guān)靶點(diǎn)209個(gè),通過(guò)PPI網(wǎng)絡(luò)篩選出ESR1、RELA、PIK3R1、RXRA等關(guān)鍵靶點(diǎn);通過(guò)GO、KEGG通路富集分析篩選出癌癥通路、AGE-RAGE信號(hào)通路和cAMP等關(guān)鍵通路;構(gòu)建的“活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)”進(jìn)一步表明,吳茱萸中槲皮素、異鼠李素、吳茱萸堿、吳茱萸次堿等活性成分能通過(guò)激活A(yù)R、PIK3R1、PIK3CA等核心靶點(diǎn)作用于癌癥通路、cAMP等信號(hào)通路,發(fā)揮關(guān)鍵性作用?，F(xiàn)代研究表明,吳茱萸中的喹唑啉咔生物堿吳茱萸堿能在不影響線粒體功能的前提下激活293T細(xì)胞AMPK信號(hào)通路,從而發(fā)揮作用[11,12]。另外,陽(yáng)霞[13]研究發(fā)現(xiàn),吳茱萸堿還可作為Notch3表觀遺傳修飾劑,抑制Notch通路激活,有效阻滯細(xì)胞周期,抑制細(xì)胞增殖,具有預(yù)防肺癌發(fā)生及降低腫瘤惡性等作用。本研究結(jié)果與以上報(bào)道相符,反映了本研究數(shù)據(jù)的可靠性。在活性成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)中degree值排名靠前的核心成分有槲皮素、Goshuyic Acid、異鼠李素、β-谷甾醇、花色苷、Synephrine、吳茱萸果酰胺I、吳茱萸堿、Rutalinidine、1-甲基-2-壬基-4-喹諾酮、小檗堿、吳茱萸次堿、1-甲基-2十五烷基-4(1H)-喹諾酮、吳茱萸卡品堿、穆茱萸酰胺,其中槲皮素、異鼠李素、β-谷甾醇、花色苷以及小檗堿存在于多種中藥材中,具有多種生物活性[14-16],因此不能作為辨別藥材質(zhì)量的標(biāo)志性成分;其余的均為吳茱萸生物堿類化合物,根據(jù)其結(jié)構(gòu)類型可分為三類、吲哚類生物堿(吳茱萸果酰胺甲、吳茱萸堿、吳茱萸次堿)、喹諾酮類生物堿(1-甲基-2-壬基-4-喹諾酮、1-甲基-2-十五烷基-4-喹諾酮、吳茱萸卡品堿)及其他類生物堿(辛弗林、Rutalinidine、穆茱萸酰胺),其中吳茱萸堿和吳茱萸次堿的含量最高,為吳茱萸的主要活性成分,同時(shí)也是《中國(guó)藥典》中吳茱萸的含量檢測(cè)指標(biāo)性成分,具有強(qiáng)心、調(diào)節(jié)心律、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂、降血糖、抗炎、抗腫瘤、抗多種癌癥(肺癌、肝癌、胃癌、結(jié)直腸癌、宮頸癌)等多重藥理功效[17-27]。因此,基于化學(xué)成分的有效性,可將吳茱萸堿和吳茱萸次堿作為吳茱萸的Q-Marker。

本研究通過(guò)收集18批吳茱萸基源和石虎基原藥材,通過(guò)UPLC法建立指紋圖譜,共確立了18個(gè)共有峰,并指認(rèn)了7個(gè)色譜峰(新綠原酸、綠原酸、金絲桃苷、橙皮苷、去氫吳茱萸堿、吳茱萸堿、吳茱萸次堿)。該方法具有良好的精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性,能有效定性鑒別吳茱萸、石虎基原藥材;同時(shí),數(shù)理統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,吲哚類生物堿類成分吳茱萸堿、吳茱萸次堿類對(duì)吳茱萸藥材整體質(zhì)量影響較大,說(shuō)明吳茱萸Q-Marker的選取符合化學(xué)特性。

由于中藥化學(xué)成分復(fù)雜,具有多成分、多靶點(diǎn)、多通路的特點(diǎn),建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行質(zhì)量控制研究是保障臨床療效和促進(jìn)中醫(yī)藥發(fā)展的關(guān)鍵性問(wèn)題,本研究基于Q-Marker“五原則”,通過(guò)吳茱萸網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、指紋圖譜及數(shù)理統(tǒng)計(jì)等多種方法,從化學(xué)和生物信息學(xué)等角度預(yù)測(cè)吳茱萸藥材潛在的Q-Marker,為后期吳茱萸質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的提升及作用機(jī)制的深入研究提供了參考依據(jù)。