枳實的炮制研究進展

王 成,蘇汝彬,趙 斌*

(1.廣東江門中醫(yī)藥職業(yè)學院/國家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心 江門健康產(chǎn)品分中心,廣東 江門529099;2.成都醫(yī)學院 藥學院,四川 成都 610500)

枳實為蕓香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培變種或甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果,現(xiàn)收載于《中華人民共和國藥典》2020版一部,具有破氣消積、化痰散痞之功效,可用于胃腸氣滯、胸痹、結(jié)胸、咳嗽痰多、胸中痞滿、臟器下垂等癥[1]。枳實炮制自漢代《金匱玉函經(jīng)》始載“去瓤”始,其后歷代本草著作記載的枳實炮制方法達20余種?，F(xiàn)代枳實炮制品有炒枳實、麩炒枳實、燙枳實、枳實炭、醋炙枳實、蜜炙枳實、發(fā)酵蒸制枳實等,其中麩炒枳實可緩和其峻烈之性,以散積消痞力勝,減緩破氣之功,在臨床上多用[2]。本研究綜述枳實的歷代炮制方法及沿革、現(xiàn)代炮制、炮制品質(zhì)量標準及藥理作用等,以期為枳實及其炮制品的開發(fā)與利用、炮制規(guī)范的制定提供參考。

1 枳實炮制方法沿革

1.1 古代炮制方法[3]

枳實古代炮制方法分為3種:凈制、飲片切制、炮炙。①凈制又分為去瓤、去核、去白。去瓤最早收載于漢代《金匱玉函經(jīng)》,唐、宋、元、明、清均沿用;去核最早收載于梁代《本草經(jīng)集注》,唐、宋、明、清沿用;去白始載于宋代《女科百問》。②飲片切制又分為切制、制粉。切制最早收載于唐代《備急千金要方》,制粉最早收載于唐代《外臺秘要》,此后宋、元、明、清皆沿用,但具體方法又有些許不同。③炮炙又分為不加輔料制與加輔料制兩類。不加輔料制包括炒制[含清炒法中的炒黃(唐·《外臺秘要》)、炒炭(漢·《金匱玉函經(jīng)》)等]、燒制(宋·《太平惠民和劑局方》)、蒸制(明·《景岳全書》)、焙制(明·《審視瑤函》)、熬制(唐·《備急千金要方》)等方法;加輔料制包括炒制[含加輔料炒法中的麩炒(明·《圣惠方》)、土炒(清·《醫(yī)方叢話》)、面炒(宋·《史載之方》)等]、炙制[包括酒炙(清·《幼幼集成》)、醋炙(宋·《校注婦人良方》)、姜炙(明·《證治準繩》)、蜜炙(明·《本草綱目》)等]、泔浸制(明·《普濟方》)、醋制膏(宋·《圣劑總錄》)等方法。

1.2 不同時代炮制方法概況

在不同歷史時期,枳實炮制方法有所不同,部分方法為后代沿用并加以創(chuàng)新。見表1。

表1 枳實歷代炮制方法[4]

1.3 炮制規(guī)范收載概況

枳實炮制標準在《中華人民共和國藥典》(2020版)及國內(nèi)21個省、自治區(qū)、直轄市的炮制規(guī)范中均有收載(見表2)。結(jié)果顯示,枳實的現(xiàn)代炮制方法包括:凈制、切制、清炒法(炒黃、炒炭)、加固體輔料炒(麩炒、蜜麩炒、沙炒、面炒)、炙法(蜜炙)、特殊制法(發(fā)酵蒸制)等,其中凈制、切制和麩炒最為常用。

表2 枳實炮制規(guī)范收載情況

2 枳實現(xiàn)代炮制研究

2.1 枳實炮制工藝研究

2.1.1 麩炒枳實炮制工藝研究 馬雪松等[5]采用正交設計優(yōu)選麩炒枳實的炮制工藝(炒制時間、炒制溫度、麩用量),選擇出膏率、辛弗林含量、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷總含量等3個評價指標,按加權(quán)平均法進行綜合評分,通過方差分析,顯示炒制溫度對枳實麩炒工藝具有顯著性影響,確定最佳工藝條件定為:每100g枳實用麥麩量為20g,于190～210℃,炒制70～90s。

林桂梅等[6]選擇出膏率、柚皮苷和橙皮苷總含量、辛弗林含量等3個評價指標,采用正交設計優(yōu)選枳實的麩炒工藝(枳實大小、麩用量、炒制溫度、炒制時間),確定最佳炮制工藝為:取直徑1.5～2.5cm大小的枳實,每100g枳實用麥麩10g,在180℃溫度下炒制60s。

彭致鋮等[7]選擇辛弗林、柚皮苷、新橙皮苷等3個成分含量為定量評價指標,并結(jié)合飲片性狀判斷炮制程度,采用正交實驗設計對麩炒枳實炮制工藝(炒制時間、炒制溫度、麩用量)進行優(yōu)選,通過方差分析與主成分分析,確定最佳炮制工藝為:投麩量100∶10,于220℃溫度下炒制5 min。采用HPLC法對15批麩炒枳實進行了分析,建立了麩炒枳實的特征圖譜,并標定出共有色譜峰7個,其中,4個峰指定為辛弗林、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷。

于曉黎等[8]選擇辛弗林含量、總黃酮含量為評價指標,采用正交試驗法對麩炒枳實炮制工藝(炒制溫度、炒制時間、麩用量)進行優(yōu)選。通過方差分析,對炮制結(jié)果有顯著影響的參數(shù)為炒制溫度,炮制時間和麩用量則對炮制結(jié)果無顯著影響,確定最佳工藝為:投麩量100∶5,于180℃,炒制60s。

2.1.2 枳實軟化、切制、水炙工藝研究 尹麗波等[9]選擇出膏率、有效成分含量(柚皮苷、新橙皮苷、辛弗林、橙皮苷)為評價指標,采用正交試驗法對枳實軟化和切制工藝進行了研究。確定浸泡法可作為枳實最佳軟化方法,其工藝參數(shù)為每100g枳實加1倍量水,在30℃條件下浸泡12h;橫切法可作為枳實飲片切制方法,切制為薄片。

董麗萍等[10]以新橙皮苷、柚皮苷含量為評價指標,采用單因素分析法對枳實水炙工藝(加水量、潤藥時間、炒制溫度、炒制時間等)進行研究。確立枳實水炙最佳工藝為:每100g枳實加1.4倍量水,室溫下拌潤55min,炒制溫度120℃,炒制時間7min。結(jié)果顯示,采用優(yōu)選的水炙工藝炮制后,制枳實與生枳實比較,柚皮苷、新橙皮苷等有效成分含量均有增加。

2.2 枳實炮制的成分變化研究

2.2.1 枳實麩炒后成分變化研究 劉振麗[11]選擇辛弗林、橙皮苷和柚皮苷含量(HPLC法),揮發(fā)油含量(藥典法)等指標,對麩炒前后枳實進行了質(zhì)量分析。結(jié)果顯示,枳實經(jīng)麩炒后,橙皮苷等成分和揮發(fā)油含量均有所降低。橙皮苷、柚皮苷和辛弗林的含量變化還與枳實大小有關,其中,藥材直徑增大,橙皮苷與辛弗林隨之減少,柚皮苷含量隨之增加,但柚皮苷與橙皮苷總量與枳實大小關系不大。

彭芳芳等[12]應用UPLC-Q-TOF-MSE技術(shù)對麩炒前后枳實的化學成分、麥麩的化學成分進行了鑒定和分析。經(jīng)UNIFI數(shù)據(jù)庫檢索,共鑒定出生枳實中含有64種化學成分,麩炒枳實中含有58種化學成分,炮制后的麥麩中含有18種化學成分;經(jīng)初步分析,枳實與麩炒枳實存在包括揮發(fā)油、黃酮、香豆素等差異性成分共19個。

2.2.2 枳實不同方法炮制后成分變化研究 王文凱等[13]采用HPLC法測定柚皮苷、新橙皮苷等成分含量,對不同炮制工藝(凈制、炒黃、炒炭、麩炒、砂燙、醋炙、蜜炙)所得枳實炮制品質(zhì)量進行評價。結(jié)果顯示,炮制方法對枳實飲片中柚皮苷和新橙皮苷的含量有較大影響,其中,柚皮苷和新橙皮苷含量由高到低依次是:生枳實>炒枳實>麩炒枳實>醋炙枳實>蜜炙枳實>燙枳實>枳實炭,提示炮制溫度越高,對柚皮苷和新橙皮苷含量影響越大。

陳強等[14]對3個批次的綠衣枳實進行了多種方法炮制,并采用HPLC法測定了枳實生品及不同炮制品中柚皮苷含量。結(jié)果顯示,不同炮制品中柚皮苷含量存在明顯差異,與生枳實比較,枳實炭降低60%～70%,砂燙枳實、土炒枳實降低40%～55%,醋枳實、酒枳實降低10%～20%,麩炒枳實基本不變。

石繼連等[15]采用水蒸氣蒸餾法提取了3種不同枳實炮制品(生枳實、醋枳實及麩炒枳實)的揮發(fā)油,并用GC-MS技術(shù)進行分析。結(jié)果顯示,在枳實不同炮制品中,共鑒定出53個揮發(fā)性成分,其中,生枳實26個,醋枳實37個,麩炒枳實48個。枳實不同炮制品的揮發(fā)油中主要成分均為檸檬烯,但相對含量存在較大差別,生枳實高達64.0%,麩炒品僅為33.0%。

3 枳實炮制品質(zhì)量控制研究

李曉婷等[16]對枳實中黃酮類、揮發(fā)油類成分進行定性鑒別(TLC法),對枳實中多種有效成分(橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷)進行含量測定(HPLC法),認為其所建立的質(zhì)量評價方法可較好地表征枳實有效物質(zhì)基礎。根據(jù)研究結(jié)果,建議枳實藥材含量測定標準如下:按干燥品計算,總黃酮不得少于13.4%(UV法);柚皮苷不得少于5%(HPLC法),新橙皮苷不得少于8%(HPLC法),橙皮苷不得少于0.4%(HPLC法)。

董麗萍等[10]模擬《備急千金要方》溫膽湯組方中關于枳實炮制方法的記載(水炙法),對枳實炮制工藝進行了研究。運用HPLC法對枳實中柚皮苷、新橙皮苷進行含量測定研究,完成了方法學考察,測定了15批枳實藥材和枳實炮制品(水炙)中柚皮苷、新橙皮苷含量。結(jié)果顯示,枳實中柚皮苷、新橙皮苷含量(普遍在5%以上)均遠高于《中國藥典》規(guī)定的辛弗林含量(0.3%),且均為枳實發(fā)揮藥效的有效成分,可作為枳實藥材質(zhì)量控制的定量分析指標。

劉靜等[17]采用TLC法對枳實中多成分(橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、蕓香柚皮苷、辛弗林及N-甲基酪胺)進行了定性鑒別,對定量檢測辛弗林的HPLC法進行了優(yōu)化,認為其所建立的枳實定性、定量方法專屬性強、操作簡便、重復性好,可用于枳實飲片質(zhì)量控制。

4 枳實炮制品藥理作用研究

4.1 對心血管系統(tǒng)的作用

尹麗波等[18]采用測定尾間收縮壓方法測定大鼠血壓,比色法測定大鼠血中NOS(一氧化氮合酶)的含量,以大鼠尾間收縮壓及NOS為指標,比較枳實生、制品對其升壓的不同作用。結(jié)果顯示,生、制品枳實均有顯著的升高大鼠血壓作用,且生品的升壓作用強于制品。

4.2 對子宮的作用

湯容[19]分離取出健康雌性未孕家兔的陰道,觀察枳實提取物(水提醇沉酸堿處理)對離體家兔陰道平滑肌的影響。結(jié)果表明,達到最小劑量(9.06±5.0mg/mL)后,枳實提取物對離體家兔環(huán)行陰道平滑肌發(fā)揮興奮作用,能增強離體子宮收縮力,增加張力,加強收縮節(jié)律。但劑量超過一定量(30.51±15.63mg/mL)后,則主要表現(xiàn)為抑制作用。研究結(jié)果還顯示,枳實和苦參提取物配伍可以起到協(xié)同作用,明顯降低最低有效劑量。

4.3 對胃腸道平滑肌的作用

王翠芬等[20]采用電生理學方法觀察枳實灌胃前后大鼠胃腸電活動,采用免疫組織化學方法,觀察枳實灌胃前后大鼠胃腸切片的P物質(zhì)含量變化。結(jié)果表明,與生理鹽水組比較,枳實組大鼠在灌胃后,其胃竇、十二指腸、空腸的胃腸移行性綜合肌電(MMC)活動相時程與周期比值(A/T)顯著性增大,胃腸肌間神經(jīng)叢內(nèi)P物質(zhì)顯著性增多。結(jié)果證實,枳實對大鼠胃腸MMC具有興奮效應,這一效應可能與P物質(zhì)增加有關。

4.4 對枳實中黃酮類成分的吸收轉(zhuǎn)運研究

彭芳芳等[21]采用Caco-2細胞模型,對枳實和麩炒枳實中黃酮類成分(橙皮苷、新橙皮苷)及橙皮苷、新橙皮苷單體的雙向跨膜轉(zhuǎn)運特征進行研究。結(jié)果表明,麩炒枳實與枳實比較,其黃酮類成分雙側(cè)表觀滲透系數(shù)值較大;各類藥液的雙側(cè)轉(zhuǎn)運速率前期呈上升趨勢,在60 min左右達到峰值,之后則呈現(xiàn)下降趨勢;各樣品在體內(nèi)吸收速率由大到小依次為:麩炒枳實>枳實>橙皮苷、新橙皮苷單體。研究認為,枳實中橙皮苷和新橙皮苷等黃酮類成分具有較好的腸吸收性,且通過麩炒炮制后,能夠增加這類成分的腸吸收。

5 討論

歷代本草對枳實的炮制記載較為詳盡,方法近20余種。目前,國家和地方炮制規(guī)范也基本沿用了本草古籍的方法,以凈制、切制、麩炒為主,但不同地區(qū)的枳實炮制方法各有不同,不同地區(qū)同一炮制方法在炮制工藝上也存在差異(如麥麩炒制工藝中的輔料用量、炮制時間等)。對枳實炮制工藝和炮制成分變化研究表明,不同炮制方法和炮制工藝能明顯影響枳實飲片的質(zhì)量。為避免炮制品質(zhì)量不一,應修訂完善枳實炮制規(guī)范,明確枳實采摘時間、半徑大小、潤制時間、輔料用量、炒制溫度、炒制時間等工藝參數(shù)[22]。

文獻分析結(jié)果顯示,枳實炮制研究報道集中于2005-2010年,近幾年相對減少,主要開展了枳實炮制工藝及其質(zhì)量控制研究,優(yōu)選了枳實的麩炒、切制工藝,采用TLC和HPLC法對枳實飲片中單個或多個成分進行了定性、定量測定研究等。中醫(yī)炮制理論認為,枳實生品性較峻烈,以破氣化痰為主,炮制后(炒或炙)可緩和其峻烈之性,以免損傷正氣,以散結(jié)消痞力勝[23]。但目前有關枳實炮制方面的研究還較少,對枳實炮制前后化學成分、藥理活性的變化研究還不夠全面,枳實炮制前后藥效物質(zhì)仍不明確、炮制機制仍不清晰。筆者認為可從以下幾方面開展枳實炮制研究:①聯(lián)合應用多種現(xiàn)代分析手段,如GC-MS 和HPLC-QTOF 技術(shù),建立枳實及制枳實的指紋圖譜,并結(jié)合化學計量學方法,全面考察枳實炮制前后揮發(fā)性和非揮發(fā)性成分的差異及變化規(guī)律;②在中醫(yī)臨床和中藥炮制理論指導下開展藥效學研究,以明確枳實炮制前后藥效的差異;③綜合運用藥效學、藥代動力學及藥物代謝-藥效相關性等手段,分析枳實炮制前后,差異性成分在體內(nèi)的作用過程及其作用靶點,再結(jié)合代謝組學、蛋白質(zhì)組學等手段闡明其炮制作用機制;④確定枳實質(zhì)量標志物,建立枳實及炮制品專屬性的質(zhì)量標準。