鹽酸溴己新葡萄糖注射液中鹽酸溴己新含量測定方法改進(jìn)*

王婷婷，陳乃江

（江蘇省連云港市食品藥品檢驗檢測中心，江蘇 連云港 222006）

鹽酸溴己新有較強的黏痰溶解作用，主要用于治療慢性支氣管炎及其他呼吸道疾?。?-2］。國內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)有石家莊四藥有限公司和江西科倫藥業(yè)有限公司，目前分別執(zhí)行局頒標(biāo)準(zhǔn)YBH04412004 - 2016Z［3］和YBH10902004-2016Z［4］，均采用高效液相色譜法測定鹽酸溴己新的含量。實際操作中，以2 種流動相體系測定鹽酸溴己新時會發(fā)生粘針現(xiàn)象，重復(fù)性差，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)難執(zhí)行［5］。為了更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床療效，本研究中改進(jìn)了鹽酸溴己新的含量測定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗證，以為鹽酸溴己新葡萄糖注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U3000型高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技有限公司）；BP211D 型電子分析天平（德國賽多利斯公司，精度為十萬分之一）；KH - 700DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司，功率為700 W，頻率為40 kHz）；Milli-Q型超純水儀（德國默克密理博公司）。

1.2 試藥

鹽酸溴己新對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100427-201903，含量為99.8%，規(guī)格為100 mg）；乙腈為色譜純，磷酸二氫鉀、氫氧化鈉均為分析純，水為超純水；鹽酸溴己新葡萄糖注射液（石家莊四藥有限公司，批號分別為1808023102，1809113102，1809113103；江西科倫藥業(yè)有限公司，批號分別為B18051902，B18080804、B18080901），規(guī)格均為每瓶100 mL，含鹽酸溴己新4 mg、葡萄糖5 g。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀1.0 g，加900 mL 水使溶解，用0.5 mol/ mL 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 至7.0，用水稀釋至1 000 mL）-乙腈（20∶80，V/V）；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；檢測波長：249 nm；進(jìn)樣量10μL。理論板數(shù)按鹽酸溴己新峰計應(yīng)不低于2 000。

2.2 溶液制備

取鹽酸溴己新對照品20.89 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，作為鹽酸溴己新對照品貯備液（質(zhì)量濃度為0.208 5 mg/ mL）。精密量取鹽酸溴己新對照品貯備液適量，加甲醇定量稀釋成每1 mL 含鹽酸溴己新20.85 μg 的溶液，濾過，取續(xù)濾液，作為對照品溶液。精密量取樣品5 mL，置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋成每1 mL含鹽酸溴己新20μg的溶液，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。按處方工藝制備不含鹽酸溴己新的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：精密量取2.2 項下3 種溶液各適量，按2.1項下色譜條件進(jìn)樣測定。色譜圖見圖1。

1. 鹽酸溴己新A. 對照品溶液 B，C. 供試品溶液（批號分別為1808023102，B18051902） D. 陰性對照品溶液圖1 高效液相色譜圖1.Bromhexine hydrochlorideA.Reference solution B，C.Test solution（batch numbers were 1808023102 and B18051902，respectively） D.Negative reference solutionFig.1 HPLC chromatograms

線性關(guān)系考察：分別精密吸取鹽酸溴己新對照品貯備液（質(zhì)量濃度為0.208 5 mg/ mL）適量，加甲醇稀釋，得質(zhì)量濃度分別為5.21，10.42，20.85，31.27，41.70，52.12，62.54，83.39 μg/ mL 的系列對照品溶液，按2.1項下色譜條件進(jìn)樣測定，以對照品溶液質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0.26X-0.102 3（r=0.999 9，n=8）。結(jié)果表明，鹽酸溴己新質(zhì)量濃度在5.21～83.39μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密吸取對照品溶液（質(zhì)量濃度為20.85μg/mL）10 μL，按2.1 項下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣測定6 次，記錄峰面積。結(jié)果鹽酸溴己新峰面積的RSD為0.81%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取同一批（批號B18051902）樣品，依法平行制備供試品溶液6 份，按2.1 項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結(jié)果鹽酸溴己新平均含量為41.16μg/mL，RSD為1.03%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一批（批號B18051902）樣品，依法制備供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，16，24 h 時按2.1 項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的RSD為0.98%（n= 7），表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗：精密量取9 份已知含量的樣品（批號B18051902）5 mL，置20 mL容量瓶中，分為3組，每組分別精密加入對照品溶液（質(zhì)量濃度52.12 μg / mL）2，4，6 mL，加流動相稀釋并定容，搖勻，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

耐用性試驗：選取不同型號的色譜柱［CAPCELL PAK C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），Waters Symmetry C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）］，按2.1 項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果樣品中的鹽酸溴己新峰與其他峰分離完全，表明方法耐用性良好。

2.4 樣品含量測定

分別取6 批樣品，各2 份，依法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，并計算含量。結(jié)果見表2。

表2 鹽酸溴己新含量測定結(jié)果（μg/mL，n=2）Tab.2 Results of the content determination of bromhexine hydro-chloride in samples（μg/mL，n=2）

3 討論

標(biāo)準(zhǔn)YBH04412004-2016Z中，以甲醇-0.05 mol/L醋酸銨溶液（89∶11，V/V）為流動相，取供試品溶液于249 nm 波長處測定；標(biāo)準(zhǔn)YBH10902004- 2016Z 中，以甲醇-水-0.01 mol/mL三乙胺的甲醇溶液（95∶5∶1.5，V/V/V）為流動相，取供試品溶液于249 nm 波長處測定。但實際操作中發(fā)現(xiàn)，供試品溶液中的葡萄糖遇到流動相中的甲醇時會析晶，造成色譜峰鬼峰，重復(fù)進(jìn)樣時峰面積的RSD為17%，提示儀器精密度差。究其原因，供試品溶液和流動相中甲醇濃度過高，故本研究中改進(jìn)局頒標(biāo)準(zhǔn)YBH04412004 - 2016Z 和YBH10902004 -2016Z中鹽酸溴己新的含量測定方法。

查閱文獻(xiàn)［6-10］，片劑、注射劑、滴丸劑、滴鼻劑、吸入粉霧劑等單一制劑中鹽酸溴己新含量測定已有相關(guān)報道，但關(guān)于復(fù)方制劑鹽酸溴己新葡萄糖注射液中鹽酸溴己新含量尚無報道。曾采用原標(biāo)準(zhǔn)的色譜條件，將樣品分別用流動相、水稀釋2 倍后再次進(jìn)樣，結(jié)果供試品溶液的粘針現(xiàn)象未明顯改善。分別考察了流動相甲醇- 水溶液、乙腈- 水溶液、乙腈- 磷酸鹽緩沖液，發(fā)現(xiàn)乙腈洗脫能力強，出峰較快，流動相中不加磷酸鹽時色譜峰理論板數(shù)達(dá)不到要求，定量不準(zhǔn)確。故選擇乙腈-磷酸鹽緩沖液作為流動相。將供試品溶液用乙腈-磷酸鹽緩沖液稀釋1倍后進(jìn)樣，進(jìn)一步減少葡萄糖的進(jìn)樣量，原方法存在問題是鬼峰和重復(fù)進(jìn)樣精密度差及粘針。更換流動相、稀釋供試品溶液后，鹽酸溴己新色譜峰的理論板數(shù)均大于2 000。

綜上所述，改進(jìn)后的方法操作簡便、專屬性強、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，符合定量要求，可用于鹽酸溴己新葡萄糖注射液的質(zhì)量控制。