QuEChERS-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定普洱茶中3 種殺蟲劑殘留

王 蕊，李麗鑫，萬 靜，許 秦，代佳和，朱強強*

（1.昆明市食品藥品檢驗所，云南昆明 650032；2.云南省食品藥品審核查驗中心，云南昆明 650000；3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南昆明 650201）

普洱茶是云南特色茶葉，主要產(chǎn)自西雙版納、臨滄、普洱等地區(qū)，本文通過查閱文獻并結(jié)合茶農(nóng)在種植過程中常用的農(nóng)藥種類，參考以往檢驗數(shù)據(jù)，以找出問題、監(jiān)控風(fēng)險點為目的，選取3 種常見的殺蟲劑內(nèi)吸磷、茚蟲威、克百威進行檢測。目前，農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)主要有氣相色譜法、液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法和液質(zhì)譜聯(lián)用法。其中，液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法應(yīng)用廣泛、發(fā)展較為完善[1-2]。在檢測分析中，樣品凈化是較為關(guān)鍵的一個環(huán)節(jié)，目的是對目標(biāo)物最大限度地提取，將干擾降到最低、誤差降到最小，樣品的凈化效果直接影響到檢測結(jié)果的可靠性[3]。QuEChERS 方法是近幾年發(fā)展起來的一種樣品前處理方法，具有便捷、高效及可靠安全等優(yōu)勢[4]。本試驗將高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法與前處理技術(shù)QuEChERS 方法相結(jié)合，建立了一種簡便、高效、靈敏的分析方法應(yīng)用于普洱茶的檢測。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

普洱茶：普洱50 批，市售；茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；乙腈、甲醇、甲酸，色譜純；醋酸、PSA、C18、GCB，分析純；QuEChERS AOAC 萃取鹽提取包（組分：6 g 無水MgSO4、1.5 g 醋酸鈉）。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（型號：4500QTRAP/LC/MS/MS，配ESI 離子源）；電子天平（型號：AL104）；振蕩器（型號：Multi Reax）；高性能通用臺式離心機（型號：ST16）。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品處理

稱取2 g 茶試樣（粉碎均勻）于50 mL 塑料離心管中，加入10 mL 水，旋渦振蕩，靜置30 min。加入20 mL 乙腈-醋酸溶液（體積比99 ∶1）和一個陶瓷均質(zhì)子，渦旋振蕩1 min，在具塞離心管冰浴條件下加入QuEChERS AOAC萃取鹽提取包并劇烈振蕩。待溫度降低后，渦旋振蕩2 min，再以4 200 r?min-1的轉(zhuǎn)速離心5 min，鹽析分層待凈化。

移取上清液8 mL 加到內(nèi)含PSA 400 mg、C18400 mg、GCB 200 mg、MgSO41 200 mg 的塑料離心管中，渦旋振蕩1 min，4 200 r?min-1離心5 min，靜置待分層，移取1 mL 上清液過0.22 μm 微孔濾膜，待測。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制

分別移取茚蟲威、內(nèi)吸磷標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）0.5 mL 至5 mL 容量瓶中，乙腈定容，制成10 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。移取克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 μg·mL-1）0.05 mL 至5 mL 容量瓶中，乙腈定容，制成1 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。用乙腈稀釋標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，分別制得茚蟲威、內(nèi)吸磷濃度為10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1、400 ng·mL-1、500 ng·mL-1及克百威濃度為0.5 ng·mL-1、1.0 ng·mL-1、2.0 ng·mL-1、4.0 ng·mL-1、8.0 ng·mL-1、10.0 ng·mL-1、50.0 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

1.3.3 液相色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC?HCC T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動相A 為甲醇，流動相B 為0.1%甲酸水；柱溫：40 ℃；流速：0.2 mL·min-1；進樣體積：3 μL。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序表

1.3.4 質(zhì)譜條件

采用AB SCIEX 公司的4500QTRAP 質(zhì)譜系統(tǒng)，在電噴霧離子源正離子模式下，使用多反應(yīng)監(jiān)測模式檢測目標(biāo)物。離子源溫度為550.0 ℃，離子源電壓為5.5 kV，氣簾氣30 psi，噴霧氣（Gas1）50 psi，噴霧氣（Gas2）50 psi。優(yōu)化得到各目標(biāo)物質(zhì)譜條件見表2。

表2 茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威質(zhì)譜條件

2 結(jié)果與分析

2.1 提取和凈化條件的選擇

乙腈與水部分互溶，加入萃取鹽包后，鹽析、分層和除雜效果明顯，因此采用乙腈-醋酸作為提取溶劑。茶葉中含有的脂肪酸、生物堿、色素及酚類化合物使得凈化過程具有一定的難度，易對色譜柱產(chǎn)生污染，采用PSA 400 mg+C18400 mg+GCB 200 mg+MgSO41 200 mg 進行凈化[5]。該凈化劑結(jié)合了常用凈化劑的成分，疏水性較強，C18能有效去除脂肪酸和色素；GCB 能有效去除色素，排除干擾；PSA 能有效去除脂肪酸，對色素也有一定的去除能力，同時對農(nóng)藥殘留吸附作用較小，且運用分散固相萃取，操作簡便快速。

2.2 線性關(guān)系、檢出限、定量限

對標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液進行測定，以各標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進行回歸，得到相關(guān)系數(shù)和回歸方程。檢測限以離子對信噪比≥3考察，定量限以離子對信噪比≥10 考察，試驗結(jié)果見表3。茚蟲威、內(nèi)吸磷在10 ～500 ng·mL-1，克百威在0.5 ～50 ng·mL-1線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，檢出限為0.010 9 ～0.019 2 μg·kg-1，定量限為0.036 4 ～0.063 9 μg·kg-1，可以滿足定性、定量分析的需要。

表3 茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威的線性方程、定量限、檢出限、保留時間

2.3 回收率與精密度

稱取2 g 陰性茶試樣進行加標(biāo)試驗，在茶試樣中分別添加5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-13 個濃度水平的茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個水平進行6 次平行試驗，試驗結(jié)果見表4。茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威在3 個加標(biāo)水平下的平均回收率為91.26%～105.66%，RSD 為0.67%～2.58%。符合《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）的規(guī)定，提示本方法加標(biāo)回收率和精密度好，能準(zhǔn)確測定茶葉中茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威含量。

表4 茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威回收率與精密度

2.4 樣品測定

對50 批市售普洱茶中茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威的含量進行測定，結(jié)果顯示在50 個樣品中，茚蟲威、內(nèi)吸磷均未檢出，有2 批次樣品檢出克百威，檢出率為4%，其含量分別為0.014 mg·kg-1、0.013 mg·kg-1?！妒称钒踩珖覙?biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）規(guī)定茶葉中茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威的限量值分別為5 mg·kg-1、0.05 mg·kg-1、0.02 mg·kg-1，本次檢測的50 批普洱茶樣品中3 種殺蟲劑含量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求。

3 結(jié)論

本文建立了一種基于QuEChERS 的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法用于同時檢測普洱茶中3 種殺蟲劑，該方法簡便、高效、靈敏，適合普洱茶中茚蟲威、內(nèi)吸磷、克百威農(nóng)藥殘留的快速檢測及定量分析。此外，該方法也可為茶葉制品及其他茶葉農(nóng)藥殘留檢測提供一定的參考。檢測的50 批普洱茶樣品中3 種殺蟲劑含量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，提示普洱茶中3 種殺蟲劑殘留情況較為樂觀。這與近年來云南建立生態(tài)茶園息息相關(guān)，為了提高普洱茶原料的品質(zhì)，近年來云南省政府及企業(yè)投入大量資金改造有機生態(tài)茶園，茶園病蟲害防控趨向于更安全、可靠、綠色。