城市生活飲用水微生物檢測方法研究

陳占霞，吳月云

（山東省濰坊市臨朐縣疾病預(yù)防控制中心，山東臨朐 262600）

人們對飲用水的需求量在近十年一直呈現(xiàn)上升趨勢，飲用水的供給質(zhì)量要求也逐年提升，相關(guān)部門須做好居民飲用水的檢測工作，保障居民生活用水安全。因此，建立城市生活飲用水微生物檢測體系，嚴格規(guī)范飲用水的質(zhì)量顯得尤為重要，只有這樣才能保障居民飲用水安全，提高居民飲用水品質(zhì)。

1 城市生活飲用水微生物檢測結(jié)果的影響因素

1.1 檢測環(huán)境的影響

對城市生活飲用水的檢測易受外部環(huán)境的影響，特別是對于環(huán)境因素較為敏感的微生物，在檢測過程中可能會因環(huán)境變化而產(chǎn)生檢測困難。相關(guān)的環(huán)境因素包括溫度、濕度、空氣中的含氧量以及微生物培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分構(gòu)成等，均會對微生物檢測結(jié)果有一定的影響。在環(huán)境因素影響加大的情況下，可能會引發(fā)水樣中微生物的大量死亡，導(dǎo)致微生物檢測技術(shù)無法正常、準確檢測出各項指標含量。同時，微生物檢測的操作環(huán)境也會影響檢測結(jié)果，要保證檢測操作在無菌條件下進行，防止外部環(huán)境菌群污染待檢樣本，給檢測結(jié)果帶來不確定性。

1.2 實驗設(shè)備的影響

實驗設(shè)備的精密度和靈活性也會給飲用水微生物檢測結(jié)果帶來影響，應(yīng)定時對實驗設(shè)備及儀器進行維護保養(yǎng)，并及時更換陳舊設(shè)備，保證設(shè)備的正常運轉(zhuǎn)，避免因設(shè)備失靈導(dǎo)致微生物指標檢測不準確。例如，微生物檢測中常用到恒溫箱，用于對水樣樣品的培養(yǎng)和保存，保持其內(nèi)部溫度穩(wěn)定對檢測結(jié)果有直接影響，若溫度不符合標準就會導(dǎo)致樣品中的菌落培養(yǎng)不到位，造成檢測失誤。相關(guān)人員應(yīng)在樣品放入之前對恒溫箱內(nèi)的溫度進行嚴格細致的檢測，確保每個角落的溫度都在標準規(guī)定的范圍之內(nèi)，之后再放入樣品進行培養(yǎng)，避免失誤的發(fā)生。

1.3 人為因素的影響

水中微生物檢測結(jié)果的準確性與實驗操作過程中的人為因素也有很大關(guān)系，微生物檢測內(nèi)容復(fù)雜，細致煩瑣，對每一步操作要求都較高，檢測操作人員應(yīng)嚴格按照檢測標準，遵循技術(shù)規(guī)范進行操作，若操作不當(dāng)或操作不符合標準規(guī)定，會造成檢測結(jié)果不準確甚至誤差較大。對培養(yǎng)后的待測樣本應(yīng)及時進行檢測，確保檢測的時效性，若檢測人員未能及時對樣本進行檢測，則會因樣本菌落變化甚至死亡而對檢測結(jié)果產(chǎn)生不利影響。

2 城市生活飲用水微生物檢測的主要內(nèi)容

2.1 菌落總數(shù)

菌落總數(shù)能夠表示水樣的整體污染程度[1]。菌落總數(shù)是飲用水微生物檢測的重要指標但不是唯一指標，因為培養(yǎng)環(huán)境的不同對于厭氧菌或微需氧菌等菌種的檢測在菌落總數(shù)中無法體現(xiàn)，需根據(jù)菌種的特殊要求另行計算。

2.2 總大腸菌群

大腸菌群可以反映飲用水被人畜糞便污染的程度，可利用其與乳糖發(fā)酵生成酸液或氣體的原理對其進行測定，在這一過程中需注意創(chuàng)設(shè)良好的反應(yīng)條件。大腸菌群的測定標準為100 mL 水樣中大腸菌群的最近似數(shù)，若數(shù)量超出飲用水微生物含量規(guī)定標準，則表明飲用水已被污染，存在安全隱患[2]。

2.3 耐熱大腸菌群

耐熱大腸菌群屬大腸菌群的一種，又名糞大腸菌群，對其的測定是對總大腸菌群的補充，也是利用其與乳糖發(fā)酵并產(chǎn)生酸液或氣體的原理進行測定，但需要注意的是對其的培養(yǎng)溫度要比其他菌種溫度更高，為44.0 ～44.5 ℃，培養(yǎng)時長為24 h[3]。由于大多數(shù)耐熱大腸菌群直接源于人畜糞便，因此對其的檢出更能說明飲用水源遭受了糞便污染，含有更大的腸道疾病致病可能性。測定耐熱大腸菌群指標可對飲用水污染程度有更明晰的確認，在說明水源是否被人畜糞便污染方面有更明確的指示作用。

3 城市生活飲用水微生物檢測水樣采集規(guī)則及注意事項

3.1 采集原則

水樣的采集需具有代表性，能明確代表水源區(qū)水質(zhì)的整體情況，并在水樣采集后確保水樣不會受外部環(huán)境污染和其他任何因素的影響。因此，對飲用水水樣的采集要有明確的規(guī)劃，制定具體的實施細則，明確采樣地點、采樣數(shù)量和采樣方法，并具體到每份樣品的體積。對水樣的保管和運輸過程進行質(zhì)量控制，保證樣本質(zhì)量。

3.2 采集容器

采樣過程中采集容器的選擇對樣本質(zhì)量也有很大影響，需結(jié)合具體地區(qū)的水樣采集實際情況，選用符合標準且規(guī)格適宜的采樣容器，尤其注意容器的材質(zhì)、開口和體積等基本指標。特別關(guān)注容器內(nèi)壁的構(gòu)造，保證其對水樣成分無吸收或吸附作用，還需特別注意采集容器的防震性能和適應(yīng)性，以保證樣本運輸過程中的穩(wěn)定性。選擇大小合適、形狀適宜、質(zhì)量良好的采集容器能幫助采樣人員快速準確地獲取所需水樣，順利開展后續(xù)工作。

3.3 自來水水樣采集原則

自來水水樣采集需重點關(guān)注出廠水的采集和末梢水的采集兩個方面。出廠水即經(jīng)自來水廠處理后還未經(jīng)城市居民使用的水，一般在自來水經(jīng)處理后被送往城市各用水區(qū)域之前的一個點上進行采集。末梢水是經(jīng)城市居民家中水龍頭流出的水，對其的采集需進行時間控制，取經(jīng)水龍頭流出一定時間段之后的水作為樣品，避免管道中的析出或附著物對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。要對水龍頭進行消毒處理，以免其中的微生物菌種落入待測水樣，影響檢測結(jié)果。

3.4 水源水水樣采集原則

水源水是城市生活飲用水來源地的水，如某條河流、某個水庫等。可通過采集汲水處的水對水源地水樣進行采集。對于河流、湖泊等表層水源地的水，可直接用水桶等容器采集；對于水庫等深度水源地的水可采用直立式取水器進行水樣采集；對于泉水的水樣采集分兩種形式，自噴泉水可直接在泉水涌出口采集水樣，非自噴泉水可使用與井水水樣采集相同的方式，即采用抽水管等協(xié)助機制采集。

4 城市生活飲用水微生物檢測中各項指標的測定方式

4.1 菌落總數(shù)測定方式

先將水樣混合均勻，排除靜止條件下微生物分布不均的情況后，再進行水樣中菌落總數(shù)的測定。移取已混勻的待測樣品至培養(yǎng)皿中，移取儀器和培養(yǎng)皿均需進行嚴格消毒和無菌處理。之后將準備好的培養(yǎng)基按照一定規(guī)格的量倒入培養(yǎng)皿中，使培養(yǎng)皿中的待測水樣與培養(yǎng)基充分混合，可采用旋搖培養(yǎng)皿的方式幫助完成混合，切勿使用攪拌方式。最后，按照菌群的規(guī)定培養(yǎng)方式，對培養(yǎng)皿中水樣和培養(yǎng)基混合物進行一定時長的培養(yǎng)，進行菌落總數(shù)的測定。

4.2 總大腸菌群測定方式

多管發(fā)酵法是進行總大腸菌群測定的主要方法。先進行水樣和乳糖蛋白培養(yǎng)液的初步發(fā)酵，將二者充分混合并置入規(guī)定溫度下培養(yǎng)一定時長，觀察酸液或氣體的產(chǎn)生情況。在有酸液或氣體產(chǎn)生的情況下使用伊紅亞甲藍培養(yǎng)基對樣品進行繼續(xù)培養(yǎng)，以便觀測總大腸菌群的菌落特征，初步判斷菌落種類，再使用革蘭氏染色和顯微鏡對觀察結(jié)果進行進一步的確定。最后進行驗證，重復(fù)以上步驟對檢測結(jié)果進行再次驗證，保證檢出菌群確為大腸菌群。

4.3 耐熱大腸菌群測定方式

可使用與測定總大腸菌群相似的測定方式進行耐熱大腸菌群的測定，不同之處在于在初步發(fā)酵后，需進行耐熱培養(yǎng)，即在檢出大腸菌群的水樣管中加入EC肉湯，在44.5 ℃培養(yǎng)24 h，之后觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。最后進行產(chǎn)酸產(chǎn)氣樣品的平板培養(yǎng)以驗證檢測結(jié)果，將樣品接種于伊紅美藍瓊脂平板上培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)溫度為（36±1）℃[4]。培養(yǎng)后若有典型菌落檢出，則根據(jù)MPN 表中菌落特征的具體信息，出具檢測報告。

4.4 大腸埃希氏菌測定方式

采用EC-MUG 培養(yǎng)基對總大腸菌群檢測中初步發(fā)酵后產(chǎn)酸產(chǎn)氣的樣品進行培養(yǎng)，可測定大腸埃希氏菌的存在情況。先將產(chǎn)酸產(chǎn)氣樣品倒入裝有ECMUG 培養(yǎng)液的試管中，采用恒溫箱或恒溫浴在與培養(yǎng)耐熱大腸桿菌相同的培養(yǎng)條件下進行培養(yǎng)，采用恒溫浴模式時需將培養(yǎng)管中的液體完全淹沒在水中。培養(yǎng)結(jié)束后借助紫外燈查看大腸埃希氏菌的生成情況。

5 城市生活飲用水微生物檢測結(jié)果分析

經(jīng)上述測定方式對城市飲用水中微生物菌落種類的數(shù)量進行檢測后，采用統(tǒng)計學(xué)方法推算出水樣中菌群平均數(shù)量，再根據(jù)國家對飲用水中微生物含量的相關(guān)標準，對檢測結(jié)果進行分析，形成飲用水水質(zhì)檢測報告，對于檢測結(jié)果顯示為不合格的情況，需在報告中指明具體原因，標明具體污染物及污染等級[5]。規(guī)范檢測報告中檢測數(shù)據(jù)的錄入模式，對于菌落數(shù)為1 ～100 CFU 時，可直接錄入真實數(shù)據(jù)，大于100 CFU 時，取兩位有效數(shù)字。若所測水樣中不含總大腸菌群、耐熱大腸菌群以及大腸埃希氏菌，菌落總數(shù)在100 CFU/100 mL 以內(nèi)，則視為水質(zhì)合格。

6 結(jié)語

微生物檢測技術(shù)在城市生活飲用水水質(zhì)檢測中有重要作用，能為飲用水中是否含有致病菌提供數(shù)據(jù)參考，為城市居民的健康飲水提供技術(shù)保證。檢測人員應(yīng)規(guī)范水樣采集操作，嚴格按照不同菌落的測定方式開展微生物檢測工作，提升城市生活飲用水微生物檢測工作質(zhì)量和檢出效果，促進提升城市生活飲用水水質(zhì)，保障城市居民用水安全及身體健康。