• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于脾虛濕阻研究佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型炎性因子、鈉鉀ATP酶及病理組織學(xué)變化

    2023-05-30 10:48:04劉德芳張耀雷劉碧瑩李莞劉濤郭明陽晏姣
    關(guān)鍵詞:炎性因子類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型

    劉德芳 張耀雷 劉碧瑩 李莞 劉濤 郭明陽 晏姣

    【摘 要】目的:建立基于脾虛濕阻環(huán)境下的佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠模型,觀測其炎性關(guān)節(jié)的炎性因子、脾臟鈉鉀ATP酶(Na+,K+-ATPase)表達(dá)及關(guān)節(jié)的病理組織學(xué)變化。方法:將30只Wistar大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、AA對照組、空白對照組,每組10只。模型組在脾虛濕阻環(huán)境下復(fù)制AA大鼠模型,AA對照組在常溫常濕下復(fù)制AA模型,空白對照組給予常溫常濕環(huán)境喂養(yǎng)。28 d后,觀察大鼠的進(jìn)食量、精神狀態(tài)、毛發(fā)、關(guān)節(jié)腫脹度、活動(dòng)情況,以及關(guān)節(jié)的病理組織學(xué);檢測血常規(guī),炎性關(guān)節(jié)的白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)及脾臟的Na+,K+-ATPase活性。結(jié)果:與對照組比較,模型組大鼠精神萎靡,進(jìn)食量減少,部分大鼠腹瀉,毛發(fā)失去光澤,關(guān)節(jié)腫脹,部分足底部潰爛,活動(dòng)遲緩或跛行;模型組大鼠關(guān)節(jié)的病理組織學(xué)表現(xiàn)為滑膜組織中大量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤,滑膜增生呈多層化,纖維血管翳形成。血小板計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞比率和單核細(xì)胞比率明顯升高(P < 0.05),淋巴細(xì)胞比率明顯降低(P < 0.05),IL-6、TNF-α、VEGF表達(dá)明顯升高(P < 0.05),Na+,K+-ATPase活性減退(P < 0.05)。結(jié)論:模型組大鼠表現(xiàn)出關(guān)節(jié)明顯腫脹,足底部潰爛,飲食量減少,大便溏瀉,Na+,K+-ATPase活性減退,類同于中醫(yī)痹病脾虛濕阻的范疇,血細(xì)胞計(jì)數(shù)、比率和IL-6、TNF-α、VEGF等異常表達(dá),以及關(guān)節(jié)的病理組織學(xué)表現(xiàn)與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者表現(xiàn)一致。

    【關(guān)鍵詞】 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎;佐劑性關(guān)節(jié)炎;動(dòng)物模型;炎性因子;鈉鉀ATP酶;大鼠

    Study on Inflammatory Factors,Na+,K+-ATPase and Histopathological Changes of Adjuvant Arthritis Rat Model Based on Spleen Deficiency and Dampness Obstruction

    LIU De-fang,ZHANG Yao-lei,LIU Bi-ying,LI Wan,LIU Tao,GUO Ming-yang,YAN Jiao

    【ABSTRACT】Objective:To establish rat models of adjuvant arthritis(AA)based on the environment of spleen deficiency and dampness obstruction,and observe the inflammatory factors of its inflammatory joints,the expression of sodium potassium ATPase(Na+,K+-ATPase)in the spleen and the pathological changes of the joints.Methods:Thirty Wistar rats were randomly divided into a model group,an AA control group and a blank control group,with 10 rats in each group.The model group reproduced the AA rat model in the environment of spleen deficiency and dampness construction,the AA control group reproduced the AA model at normal temperature and humidity,and the blank control group was fed at normal temperature and humidity.After 28 days,

    observe the rats' food intake,mental state,hair,joint swelling,activity,and joint histopathology,detect blood routine,IL-6,TNF-α,expression of VEGF and activity of Na+,K+-ATPase in spleen.Results:Compared with the control group,the rats in the model group suffered from mental depression,decreased food intake,diarrhea(some rats),loss of luster in hair,joint swelling,partial foot ulceration,slow movement or lameness;the pathological histology of the joints in the model group showed that a large number of inflammatory cells such as lymphocytes,plasma cells and macrophages infiltrated the synovial tissue,the synovial hyperplasia was stratified,and the fibrous pannus were formed.Platelet count,neutrophil ratio and monocyte ratio increased significantly(P < 0.05),lymphocyte ratio decreased significantly(P < 0.05),the expressions of IL-6,TNF-α and VEGF were significantly increased(P < 0.05),and the activity of Na+,K+-ATPase

    was decreased(P < 0.05).Conclusion:The rats in the model group showed obvious joint swelling,foot ulceration,reduced diet,loose stool,decreased Na+,K+-ATPase activity,similar to the category of bi disease of spleen deficiency and dampness construction in traditional Chinese medicine.The abnormal expressions of blood cell count and ratio,IL-6,TNF-α and VEGF and the histopathological manifestations of joints were consistent with those of patients with rheumatoid arthritis.

    【Keywords】 rheumatoid arthritis;adjuvant arthritis;animal model;inflammatory factors;Na+,K+-ATPase;rats

    類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為主的系統(tǒng)性自身免疫性疾病,主要表現(xiàn)為多關(guān)節(jié)腫痛、晨僵及多系統(tǒng)受累。我國RA患病率為0.34%~0.42%[1],患病人數(shù)達(dá)500萬,而且高濕環(huán)境下居民發(fā)病率明顯高于其他地區(qū)[2]。RA病因及發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚?!饵S帝內(nèi)經(jīng)》曰:“正氣存內(nèi),邪不可干;邪之所湊,其氣必虛。”因此,本研究基于脾虛的內(nèi)環(huán)境及高濕的外環(huán)境即脾虛濕阻條件下建立佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠模型,觀察其炎性因子、鈉鉀ATP酶(Na+,K+-ATPase)以及關(guān)節(jié)的病理組織學(xué)變化,現(xiàn)總結(jié)如下。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取Wistar健康雄性大鼠30只,體質(zhì)量150~180 g,均為SPF級實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號SCXK(川)2015-030。

    1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 智能人工氣候箱(RXZ-10000A,寧波市科技園區(qū)新江南儀器有限公司);加濕器(YC-D205,亞都);動(dòng)物麻醉機(jī)(R580S,RWD Life Science);臺式低溫高速離心機(jī)(Thermo ST16R,美國熱電公司);超低溫冰箱(MDF-U53V,日本松下公司);血細(xì)胞分析儀(BC 6900,深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司);酶標(biāo)儀(Multisan,美國熱電公司);Real-time檢測儀(ABI公司);低溫冷凍離心機(jī)(上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司);旋渦振蕩器(青浦瀘西儀器廠);電動(dòng)勻漿機(jī)(FLUKO);液氮容器(東亞醫(yī)療電子器械公司);正置顯微鏡(德國Leica公司);生物安全臺(BSC-130011A2,蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 弗氏完全佐劑(Sigma F5881);異氟烷(瑞沃德生命科技有限公司);大鼠IL-6 ELISA試劑盒、大鼠TNF-α ELISA試劑盒、大鼠VEGF ELISA試劑盒((ExCell Bio);蘇木素-伊紅染色液(Harris,珠海貝索生物技術(shù)有限公司);超微量ATP酶測試盒(南京建成生物工程研究所);RIPA裂解液(碧云天)。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 動(dòng)物分組和造模 按照隨機(jī)數(shù)字表法將30只大鼠隨機(jī)分為模型組、AA對照組和空白對照組,每組10只。

    模型組大鼠每日灌服油脂1 g·(100 g)-1,并置于高濕環(huán)境中喂養(yǎng)(人工氣候箱,每天刺激8 h),相對濕度(90±4)%,溫度(24±2)℃,持續(xù)2周后,采用體積分?jǐn)?shù)為75 %的乙醇對左、右后足跖進(jìn)行消毒,然后左、右后足跖皮下分別注射0.15 mL·kg-1的弗氏完全佐劑(CFA),21 d后等劑量加強(qiáng)免疫1次。AA對照組同樣給予每只大鼠左、右后足的足跖部各皮下注射0.15 mL·kg-1的CFA,21 d后等劑量加強(qiáng)免疫1次,并置于常溫常濕環(huán)境喂養(yǎng),相對濕度(60±4)%,溫度(24±2)℃??瞻讓φ战M僅給予常溫常濕環(huán)境喂養(yǎng),相對濕度(60±4)%,溫度(24±2)℃。

    2.2 標(biāo)本收集及制備 造模后第28天,將大鼠置于麻醉機(jī)里麻醉,仰臥固定手術(shù)臺,碘伏消毒,用手術(shù)剪沿腹正中線剪開腹腔,消毒棉簽輕輕扒開血管周圍組織,直到清晰看見腹主動(dòng)脈,采血針以30°左右角度進(jìn)針采血。分別用淺紫色頭蓋(血常規(guī)管)和黃色頭蓋真空管(生化管)各采1管,完整取下脾臟、左后肢膝關(guān)節(jié)及其以下部分。淺紫色頭蓋管即送檢血常規(guī)。黃色頭蓋管靜置1 h后離心,吸上清保存-80 ℃冰箱。每組隨機(jī)取2只關(guān)節(jié)用甲醛固定,其余關(guān)節(jié)和脾臟采用錫箔紙包裹保存于-80 ℃冰箱。

    2.3 觀察指標(biāo)

    2.3.1 大鼠一般情況的觀測 觀察大鼠的進(jìn)食量、精神狀態(tài)、毛發(fā)、關(guān)節(jié)腫脹度及活動(dòng)情況。

    2.3.2 大鼠關(guān)節(jié)的病理組織學(xué)觀察 按照常規(guī)操作方法進(jìn)行透明及浸蠟→包埋→切片→展片與粘片→烤片→HE染色→封片→光學(xué)顯微鏡下觀察,與空白對照組進(jìn)行對照,觀察模型組、AA對照組大鼠的關(guān)節(jié)組織學(xué)變化。

    2.3.3 血常規(guī)的檢測 采用血細(xì)胞分析儀檢測血常規(guī)。

    2.3.4 骨關(guān)節(jié)IL-6、TNF-α、VEGF的檢測

    2.3.4.1 組織勻漿的提取 在無菌操作平臺上,大鼠左后肢關(guān)節(jié)常溫解凍后,首先取下足跖部軟組織,置于-80 ℃冰箱保存,然后去除周圍附著的組織,稱取處理后的骨關(guān)節(jié)10 g,液氮冷凍,組織粉碎機(jī)粉碎,加入裂解液1.5 mL,組織勻漿機(jī)勻漿,離心,吸出上清,再離心,取上清,置于-80 ℃冰箱保存。

    2.3.4.2 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測 按照ELISA法進(jìn)行檢測,具體步驟:①取出試驗(yàn)所需板條。②空白孔加標(biāo)準(zhǔn)品,其余相應(yīng)孔中加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(每孔100 μL),用封板膠紙封住反應(yīng)孔,37 ℃孵箱孵育90 min。③提前20 min準(zhǔn)備生物素化抗體工作液;洗板5次。④空白孔加生物素化抗體稀釋液,其余孔加入生物素化抗體工作液(每孔100 μL)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔,37 ℃孵箱孵育60 min。⑤提前20 min準(zhǔn)備酶結(jié)合物工作液。避光室溫22~25 ℃放置;洗板5次。⑥空白孔加酶結(jié)合物稀釋液,其余孔加入酶結(jié)合物工作液(每孔100 μL)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔,37 ℃孵箱,避光孵育30 min。⑦打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序;洗板5次。⑧加入顯色底物(TMB)每孔100 μL。避光37 ℃孵箱,避光孵育15 min。⑨加入終止液每孔100 μL,混勻后即刻測量OD450值(3 min內(nèi))。

    2.3.5 脾臟組織Na+,K+-ATPase的檢測

    2.3.5.1 樣本的準(zhǔn)備 電子天平稱取2 g脾臟組織加入2 mL裂解液,離心機(jī)以2500 r·min-1離心10 min,離心半徑8 cm。取上清液100 μL,再加入900 μL生理鹽水。即得到1%的組織勻漿液。

    2.3.5.2 試劑的配制與操作 按照檢測說明書,第一步進(jìn)行基質(zhì)液的配制,第二步定磷。

    2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以表示,組間比較采用成組樣本t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    3 結(jié) 果

    3.1 3組大鼠一般情況比較 與空白對照組比較,AA對照組大鼠表現(xiàn)出精神萎靡,進(jìn)食量減少,部分大鼠腹瀉,毛發(fā)失去光澤,關(guān)節(jié)腫脹,有些出現(xiàn)足底部潰爛,活動(dòng)減緩等;與AA對照組比較,模型組大鼠的精神更加萎靡,進(jìn)食量更少,毛發(fā)光澤度更差。見圖1。

    3.2 3組大鼠關(guān)節(jié)病理組織學(xué)情況 組織病理學(xué)顯示,空白對照組無炎性細(xì)胞浸潤,無纖維組織增生和組織破壞。AA對照組大量的淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤,但是無血管翳形成。模型組滑膜組織中大量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤,滑膜增生呈多層化,纖維血管翳形成。見圖2。

    3.3 3組大鼠脾臟組織Na+,K+-ATPase的含量變化情況 Na+,K+-ATPase含量的標(biāo)本數(shù)來源于8只大鼠,另外2只用于病理組織學(xué)檢測。模型組大鼠脾臟組織Na+,K+-ATPase含量較AA對照組和空白對照組均明顯降低(P < 0.05)。見表1。

    3.4 3組大鼠血細(xì)胞水平比較 模型組白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)較AA對照組明顯降低(P < 0.05),但皆在正常范圍,與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)。模型組血小板、中性粒細(xì)胞比率、淋巴細(xì)胞比率、單核細(xì)胞比率與AA對照組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05),血小板、中性粒細(xì)胞比率、單核細(xì)胞比率較空白對照組明顯升高,淋巴細(xì)胞比率較空白對照組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05)。見表2。

    3.5 3組大鼠骨關(guān)節(jié)IL-6、TNF-α、VEGF的變化情況 模型組大鼠骨關(guān)節(jié)組織IL-6、TNF-α、VEGF的表達(dá)水平與AA對照組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05),較空白對照組明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.05)。見表3。

    4 討 論

    RA屬中醫(yī)學(xué)“痹證”范疇,以風(fēng)寒濕三氣雜至為致病的外在條件,但正氣虛衰則是本病的內(nèi)在因素?!端貑枴ぐ俨∈忌氛f:“風(fēng)雨寒熱不得虛,邪不能獨(dú)傷人,卒然逢疾風(fēng)暴雨而不病者,蓋無虛,故邪不能獨(dú)傷人,此必因虛邪之風(fēng),與其身形,兩虛相得,乃客其形?!盧A的外因多責(zé)之于濕邪,《景岳全書·濕證》云:“濕之為病……在經(jīng)絡(luò)則為痹……。”其內(nèi)因離不開肺脾腎等臟腑功能失調(diào),尤其與脾虛水濕不化密切相關(guān)?!吨酗L(fēng)歷節(jié)病脈證并治第五》第7條曰:“盛人脈澀小……歷節(jié)疼不可屈伸,此皆飲酒汗出當(dāng)風(fēng)所致。”[3]基于上述理論,參考孫曉靜等[4-6]文獻(xiàn)首先對大鼠施加內(nèi)濕因素(肥膩飲食)致脾虛,以及“高濕環(huán)境”的外濕因素(人工氣候箱),然后注射弗氏完全佐劑,從而復(fù)制出脾虛濕困下的AA大鼠模型。AA模型大多復(fù)制21 d開始藥物干預(yù)[7],也有復(fù)制較短時(shí)間就開始藥物干預(yù)的[8-9]。本研究按照常規(guī)的21 d復(fù)制出AA模型,模型大鼠表現(xiàn)出關(guān)節(jié)明顯腫脹,甚至足底潰爛,精神萎靡、進(jìn)食量減少,毛發(fā)失去光澤,脾組織Na+,K+-ATPase的活力明顯降低。臨床報(bào)道濕阻患者多表現(xiàn)出胸悶脘痞納呆、身重肢倦、舌苔厚膩等[10],研究顯示,濕阻證常出現(xiàn)Na+,K+-ATPase活性減低[11-12]。本研究結(jié)果與其他文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。

    RA是一種慢性自身免疫性炎性關(guān)節(jié)疾病,細(xì)胞因子是炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,體內(nèi)的促炎和抗炎細(xì)胞因子活性平衡失調(diào)會導(dǎo)致致病性炎癥反應(yīng),促炎細(xì)胞因子的增加和抗炎細(xì)胞因子的減少可能影響RA的發(fā)展[13]。已有研究顯示,促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α是炎癥的生物標(biāo)志物[14]。KAYA等[15]報(bào)道TNF-α可能是RA的主要病理生理因素,是疾病活動(dòng)的標(biāo)志物。本研究團(tuán)隊(duì)既往研究發(fā)現(xiàn),RA濕熱痹阻證患者外周血血清中IL-1、IL-6、TNF-α較健康對照組明顯升高,關(guān)節(jié)液中IL-1、IL-6、TNF-α較外周血顯著升高[16]。RA受累關(guān)節(jié)的滑膜組織中有大量的炎性細(xì)胞浸潤,在疾病早期,炎性細(xì)胞因子及細(xì)胞因子受體的表達(dá)已經(jīng)增加[17]。VEGF是一種高度特異性的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子,可促進(jìn)RA血管內(nèi)物質(zhì)外滲,導(dǎo)致炎性滑膜組織血管新生,加重組織炎癥,形成血管翳,導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和強(qiáng)直,是炎癥持續(xù)過程起破壞作用的細(xì)胞因子[18]。炎癥細(xì)胞因子之類的免疫相關(guān)分子不僅可加劇RA的炎癥,還會破壞其骨骼[19]。本研究復(fù)制的模型表現(xiàn)出的細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、VEGF升高與RA活動(dòng)期表現(xiàn)是一致的。另外,臨床中,RA患者多數(shù)有輕度的正細(xì)胞正色素性貧血,血小板增多癥也很常見,而且與疾病活動(dòng)性密切相關(guān)。少數(shù)病情較重者,全身性炎癥反應(yīng)明顯的患者可表現(xiàn)出白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞比率升高。本研究發(fā)現(xiàn),模型大鼠的血細(xì)胞變化情況與臨床RA患者的表現(xiàn)基本一致。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 曾小峰,朱松林,譚愛春,等.我國類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病負(fù)擔(dān)和生存質(zhì)量研究的系統(tǒng)評價(jià)[J].中國循證醫(yī)學(xué)雜志,2013,13(3):300-307.

    [2] 吳振彪,王宏坤,鄭朝暉,等.我軍不同兵種在不同地區(qū)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患病的流行病學(xué)調(diào)查[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004,25(23):2190-2192.[3] 中醫(yī)研究院研究生班.《金匱要略》注評典藏版[M].2版.北京:中國中醫(yī)藥出版社,2018:104.

    [4] 孫曉靜,徐澍,賈曉益,等.大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎病程不同階段T細(xì)胞亞群及重要器官的病理學(xué)變化[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2015,31(4):475-481.

    [5] 陳剛.外濕模型大鼠免疫功能變化的研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2007,45(11):1-2.

    [6] 韋嵩,勞紹賢,黃志新,等.濕熱三因素對大鼠胃黏膜水通道蛋白3、4基因表達(dá)的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2008,15(6):34-36.

    [7] 賴梁明,卞儀澤,林振東,等.用全基因組芯片篩選出佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織中表達(dá)熱休克蛋白90客戶蛋白的基因[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2020,36(16):2463-2467.

    [8] 何東初,張倩.從JAK-STAT信號通路探討痹證寧對風(fēng)寒濕痹型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制[J].風(fēng)濕病與關(guān)節(jié)炎,2020,9(4):1-5.

    [9] 徐愿,閻小萍,肖誠,等.補(bǔ)腎祛寒治尪湯對膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠抗炎與抗骨破壞的作用及對Wnt/β-catenin通路的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2020,43(4):289-295.

    [10] 劉德芳,郭明陽,劉太華,等.平胃散加味對濕阻證舌苔的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2007,14(11):64-66.

    [11] 王琦越,楊旭,王吉娥,等.基于Na+-K+-ATP酶活性變化評價(jià)濕阻中焦證Cajal間質(zhì)細(xì)胞模型的研究[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2017,23(5):630-633.

    [12] 楊旭,王琦越,黃秀深,等.基于水協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白KCC1、KCC3、KCC4、NKCC1含量及Na+-K+-ATP酶活性變化研究濕阻中焦證的水液代謝機(jī)制[J].遼寧中醫(yī)雜志,2018,45(3):627-630.

    [13] KRISHNA PRIYA EK,SRINIVAS L,RAJESH S,et al.Pro-inflammatory cytokine response pre-dominates immuno-genetic pathway in development of rheumatoid arthritis[J].Mol Biol Rep,2020,47(11):8669-8677.

    [14] APOSTOLOVA E,LUKOVA P,BALDZHIEVA A,et al.Immunomodulatory and anti-inflammatory effects of fucoidan:a review[J].Polymers(Basel),2020,12(10):2338-2364.

    [15] KAYA F?,CEYLANER Y,?PEK B?,et al.Can cytokines be used as an activation marker in rheumatoid arthritis?[J].Endocr Metab Immune Disord Drug?Targets,2021,21(8):1459-1465.

    [16] 劉德芳,郭明陽,呼永河,等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎濕熱痹阻型患者血清和關(guān)節(jié)液IL-1、IL-6、TNF-α的表達(dá)研究[J].免疫學(xué)雜志,2014,30(5):447-451.

    [17] CHALAN P,BIJZET J,KROESEN BJ,et al.Altered natural killer cell subsets in seropositive arthralgia and early rheumatoid arthritis are associated with autoantibody status[J].J Rheumatol,2016,43(6):1008-1016.

    [18] SONE H,KAWAKAMI Y,SAKAUCHI M,et al.Neutralization of vascular endothelial growth factor prevents collagen-induced arthritis and ameliorates established disease in mice[J].Biochem Biophys Res Commun,2001,281(2):562-568.

    [19] KOMATSU N.Immune molecules and the mechanism of joint destruction[J].Clin Calcium,2016,26(5):683-689.

    收稿日期:2022-10-11;修回日期:2022-11-22

    猜你喜歡
    炎性因子類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型
    肥胖中醫(yī)證候動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    胃癌前病變動(dòng)物模型復(fù)制實(shí)驗(yàn)進(jìn)展
    潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎蒙醫(yī)藥治療現(xiàn)狀與展望
    類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的診斷及其藥物治療研究進(jìn)展
    中西醫(yī)結(jié)合治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的臨床療效觀察
    平喘固本湯治療COPD穩(wěn)定期的療效及其對患者炎性因子的影響
    藥物灌腸前行清潔灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎的護(hù)理觀察
    康復(fù)護(hù)理在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療中的應(yīng)用分析
    今日健康(2016年12期)2016-11-17 14:30:20
    長骨骨折患者急性期外周血各類炎性細(xì)胞因子表達(dá)分析
    久久青草综合色| 天堂8中文在线网| 国产精品三级大全| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产成人aa在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 国产成人免费无遮挡视频| 水蜜桃什么品种好| 日本欧美视频一区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 亚洲综合色网址| 亚洲精品国产av成人精品| 丝袜在线中文字幕| videosex国产| 我的女老师完整版在线观看| 咕卡用的链子| 国产色爽女视频免费观看| 久久久久久久久久久免费av| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产av国产精品国产| 韩国av在线不卡| 午夜视频国产福利| 日本与韩国留学比较| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美人与性动交α欧美软件 | 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 在线精品无人区一区二区三| 国产极品粉嫩免费观看在线| 好男人视频免费观看在线| 大香蕉97超碰在线| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲成色77777| 午夜影院在线不卡| 国产午夜精品一二区理论片| a级片在线免费高清观看视频| 99视频精品全部免费 在线| 伊人亚洲综合成人网| 五月伊人婷婷丁香| 色吧在线观看| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲精品av麻豆狂野| 老司机亚洲免费影院| 欧美日韩亚洲高清精品| 一级毛片我不卡| 亚洲国产精品一区三区| 晚上一个人看的免费电影| 妹子高潮喷水视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 国产 精品1| 国产成人精品一,二区| videosex国产| 色吧在线观看| 久久精品夜色国产| 91精品三级在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 51国产日韩欧美| av视频免费观看在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 性色avwww在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 熟女电影av网| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 热re99久久精品国产66热6| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 咕卡用的链子| h视频一区二区三区| 母亲3免费完整高清在线观看 | 亚洲色图综合在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲中文av在线| 日本av免费视频播放| 黄色怎么调成土黄色| a 毛片基地| 人妻 亚洲 视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久久久人妻精品一区果冻| 亚洲成人一二三区av| 国产精品不卡视频一区二区| 久久精品国产自在天天线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 自线自在国产av| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产男人的电影天堂91| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 日韩成人伦理影院| 亚洲国产av影院在线观看| 99久久综合免费| 亚洲av在线观看美女高潮| 九草在线视频观看| 美女主播在线视频| 美女福利国产在线| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 制服丝袜香蕉在线| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久久久精品性色| 国产成人午夜福利电影在线观看| 超色免费av| 亚洲情色 制服丝袜| 另类精品久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 日韩三级伦理在线观看| 97精品久久久久久久久久精品| 成年女人在线观看亚洲视频| 母亲3免费完整高清在线观看 | 国产免费视频播放在线视频| 午夜精品国产一区二区电影| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 色婷婷av一区二区三区视频| 女性被躁到高潮视频| 久久狼人影院| 69精品国产乱码久久久| 欧美人与性动交α欧美软件 | 校园人妻丝袜中文字幕| 精品亚洲成国产av| 免费高清在线观看视频在线观看| 一级毛片电影观看| 亚洲av综合色区一区| 久久鲁丝午夜福利片| 看非洲黑人一级黄片| 丰满少妇做爰视频| 国产又爽黄色视频| 国产 一区精品| 一二三四中文在线观看免费高清| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产成人精品无人区| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲精品成人av观看孕妇| 一区二区日韩欧美中文字幕 | www日本在线高清视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| videosex国产| 这个男人来自地球电影免费观看 | 99热全是精品| 国产在线一区二区三区精| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久久国产精品麻豆| 2022亚洲国产成人精品| 桃花免费在线播放| 亚洲色图综合在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 97在线人人人人妻| 色5月婷婷丁香| 天天操日日干夜夜撸| 国产男女内射视频| 秋霞在线观看毛片| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日韩中文字幕视频在线看片| 在线观看www视频免费| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲成国产人片在线观看| 国产 精品1| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久99蜜桃精品久久| 国产综合精华液| 亚洲精品456在线播放app| 女人久久www免费人成看片| 少妇人妻 视频| 久久韩国三级中文字幕| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 只有这里有精品99| 久久青草综合色| 妹子高潮喷水视频| 日韩成人伦理影院| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产在线免费精品| 1024视频免费在线观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 最后的刺客免费高清国语| 999精品在线视频| av视频免费观看在线观看| 在线看a的网站| 视频区图区小说| 制服人妻中文乱码| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 中文字幕最新亚洲高清| 九色亚洲精品在线播放| 日韩视频在线欧美| 亚洲人成77777在线视频| 视频区图区小说| 午夜免费鲁丝| 人妻系列 视频| 成人综合一区亚洲| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 久久99蜜桃精品久久| 2018国产大陆天天弄谢| 午夜老司机福利剧场| 国产在线一区二区三区精| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 视频区图区小说| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产免费又黄又爽又色| 国产淫语在线视频| 一本久久精品| 男人爽女人下面视频在线观看| 秋霞在线观看毛片| 美女中出高潮动态图| 久久99精品国语久久久| 亚洲 欧美一区二区三区| 在线观看人妻少妇| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产1区2区3区精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 精品国产乱码久久久久久小说| 日韩欧美精品免费久久| 久久av网站| 女人精品久久久久毛片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 大香蕉97超碰在线| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 少妇的逼好多水| 香蕉精品网在线| 亚洲成人av在线免费| 伦理电影免费视频| tube8黄色片| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 午夜免费鲁丝| 成年女人在线观看亚洲视频| 七月丁香在线播放| 国产亚洲一区二区精品| 免费观看在线日韩| av在线播放精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 精品一区二区免费观看| 国产精品久久久久久久久免| 永久免费av网站大全| 黄片播放在线免费| 在线观看一区二区三区激情| 最黄视频免费看| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲经典国产精华液单| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产精品国产av在线观看| 国产精品无大码| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 搡老乐熟女国产| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 国产成人欧美| 视频在线观看一区二区三区| a 毛片基地| 久久国产精品大桥未久av| 9色porny在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 日本色播在线视频| 97精品久久久久久久久久精品| 黄色配什么色好看| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 69精品国产乱码久久久| 亚洲成人一二三区av| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲国产精品一区三区| av视频免费观看在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 久久精品久久久久久久性| 国产成人精品在线电影| xxxhd国产人妻xxx| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久精品夜色国产| 91精品三级在线观看| 精品国产乱码久久久久久小说| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产成人精品福利久久| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 热re99久久精品国产66热6| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产一区二区三区av在线| 在线观看国产h片| 51国产日韩欧美| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 成人免费观看视频高清| 久久精品国产自在天天线| 婷婷色综合www| 在线观看人妻少妇| 波野结衣二区三区在线| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产 精品1| 国产色爽女视频免费观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 少妇的逼好多水| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲成色77777| 午夜激情久久久久久久| 亚洲欧美一区二区三区国产| 在线精品无人区一区二区三| 美女国产视频在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲精品美女久久av网站| 日本-黄色视频高清免费观看| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲四区av| 午夜福利,免费看| 成人国语在线视频| 999精品在线视频| 在线天堂最新版资源| 中国国产av一级| 99久久人妻综合| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲成国产人片在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 岛国毛片在线播放| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 最近中文字幕高清免费大全6| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲第一区二区三区不卡| 黑人猛操日本美女一级片| 欧美日韩亚洲高清精品| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 波多野结衣一区麻豆| 最后的刺客免费高清国语| 午夜福利乱码中文字幕| 又大又黄又爽视频免费| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产又色又爽无遮挡免| 观看av在线不卡| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 色婷婷av一区二区三区视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 在线精品无人区一区二区三| 日韩制服骚丝袜av| 九色亚洲精品在线播放| 国产欧美亚洲国产| 久久久久久伊人网av| 老司机亚洲免费影院| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 中文字幕最新亚洲高清| 三上悠亚av全集在线观看| 九九在线视频观看精品| 777米奇影视久久| www日本在线高清视频| 人妻 亚洲 视频| 亚洲av国产av综合av卡| 精品一区在线观看国产| 99热这里只有是精品在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久精品国产自在天天线| 2021少妇久久久久久久久久久| 精品视频人人做人人爽| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久久久人妻精品一区果冻| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 黑丝袜美女国产一区| av一本久久久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产精品国产av在线观看| 街头女战士在线观看网站| av在线播放精品| 精品一区二区三卡| 国产精品 国内视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美成人精品欧美一级黄| 看免费成人av毛片| 亚洲av成人精品一二三区| 久久午夜福利片| 97超碰精品成人国产| 国产精品无大码| 国产精品99久久99久久久不卡 | 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲av免费高清在线观看| 街头女战士在线观看网站| 亚洲av欧美aⅴ国产| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 国内精品宾馆在线| 久久精品人人爽人人爽视色| 日韩av免费高清视频| 午夜精品国产一区二区电影| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 一级毛片 在线播放| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 高清av免费在线| 51国产日韩欧美| 天堂中文最新版在线下载| 久久97久久精品| 久久精品国产亚洲av天美| 热99久久久久精品小说推荐| 91国产中文字幕| 日韩中文字幕视频在线看片| 婷婷成人精品国产| 亚洲av电影在线进入| 亚洲精品乱久久久久久| 成人无遮挡网站| 一级爰片在线观看| 国产福利在线免费观看视频| 国产精品三级大全| 激情视频va一区二区三区| 在线天堂最新版资源| 精品少妇久久久久久888优播| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲一码二码三码区别大吗| 人人澡人人妻人| 在线观看一区二区三区激情| 国产 一区精品| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 精品人妻在线不人妻| 国产国语露脸激情在线看| 免费黄色在线免费观看| 伦理电影大哥的女人| 激情五月婷婷亚洲| videos熟女内射| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美人与善性xxx| 精品一区二区免费观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲精品色激情综合| 激情视频va一区二区三区| 国产免费一级a男人的天堂| 搡老乐熟女国产| 中文字幕免费在线视频6| av网站免费在线观看视频| 久久青草综合色| 亚洲丝袜综合中文字幕| 免费在线观看黄色视频的| 美国免费a级毛片| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 国国产精品蜜臀av免费| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 交换朋友夫妻互换小说| 午夜久久久在线观看| 人妻系列 视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 精品久久久久久电影网| 国产精品嫩草影院av在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 宅男免费午夜| 熟女电影av网| 天美传媒精品一区二区| 美女中出高潮动态图| 精品国产一区二区久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 2021少妇久久久久久久久久久| 乱人伦中国视频| 满18在线观看网站| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 香蕉精品网在线| 99国产综合亚洲精品| 欧美性感艳星| 国产精品久久久av美女十八| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲精品,欧美精品| 久久韩国三级中文字幕| 日韩在线高清观看一区二区三区| 一区在线观看完整版| 国产精品久久久久成人av| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 少妇的逼好多水| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 九九在线视频观看精品| 免费av中文字幕在线| 熟妇人妻不卡中文字幕| 午夜福利在线观看免费完整高清在| √禁漫天堂资源中文www| 99久久人妻综合| 久久免费观看电影| 99久久精品国产国产毛片| 久久久国产精品麻豆| 综合色丁香网| 美女中出高潮动态图| 亚洲综合色惰| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产熟女欧美一区二区| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 老熟女久久久| 午夜日本视频在线| 一二三四中文在线观看免费高清| 少妇精品久久久久久久| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 乱人伦中国视频| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲四区av| 女人久久www免费人成看片| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品久久久久久精品古装| 久久国产精品大桥未久av| 日韩成人av中文字幕在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 男男h啪啪无遮挡| 久久久国产欧美日韩av| 男人操女人黄网站| a 毛片基地| 插逼视频在线观看| 9191精品国产免费久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久国产精品人妻蜜桃| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 一级作爱视频免费观看| 国产精品1区2区在线观看. | 欧美日韩一级在线毛片| 岛国在线观看网站| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久人妻av系列| 亚洲国产看品久久| 久9热在线精品视频| 国产精品免费视频内射| 久久精品人人爽人人爽视色| 高清av免费在线| 精品视频人人做人人爽| 精品午夜福利视频在线观看一区| 涩涩av久久男人的天堂| av片东京热男人的天堂| 精品国产亚洲在线| 99riav亚洲国产免费| 一级a爱视频在线免费观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 国精品久久久久久国模美| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 黄色丝袜av网址大全| 国产主播在线观看一区二区| 国产亚洲欧美精品永久| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产成人影院久久av| 妹子高潮喷水视频| 免费看十八禁软件| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 精品国产国语对白av| 久久久国产精品麻豆| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产午夜精品久久久久久| 怎么达到女性高潮| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产精品一区二区免费欧美| 精品人妻在线不人妻| 欧美日韩福利视频一区二区| 麻豆成人av在线观看| 亚洲黑人精品在线| 不卡av一区二区三区| 成人免费观看视频高清| 怎么达到女性高潮| 人妻一区二区av| av天堂久久9| 欧美激情 高清一区二区三区| 高清av免费在线| 黄片播放在线免费| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 日韩大码丰满熟妇| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 曰老女人黄片| 又大又爽又粗| 亚洲熟女毛片儿| 高清毛片免费观看视频网站 | 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 两个人免费观看高清视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 一级a爱片免费观看的视频| 国产亚洲欧美精品永久| 精品久久久久久,| 女人被狂操c到高潮| 在线视频色国产色| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 极品少妇高潮喷水抽搐| 成人国语在线视频| 精品亚洲成国产av| 欧美一级毛片孕妇| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 中文亚洲av片在线观看爽 | 热re99久久国产66热| 亚洲av电影在线进入| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 电影成人av| 一边摸一边做爽爽视频免费| 18在线观看网站| 国产精品99久久99久久久不卡| 黄片大片在线免费观看| 国产高清视频在线播放一区| 三级毛片av免费| 精品亚洲成国产av| 成人三级做爰电影| 亚洲第一av免费看| svipshipincom国产片| 黄色女人牲交| 精品国产乱子伦一区二区三区| 大陆偷拍与自拍| 在线十欧美十亚洲十日本专区| av网站免费在线观看视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 在线看a的网站| 97人妻天天添夜夜摸| 国产精品 国内视频| 国产精品免费视频内射| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲一区中文字幕在线|