血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與肺結(jié)核患者肺部受累情況的相關(guān)性

唐 瑩,唐 釗

1.武漢市金銀潭醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖北武漢 430000;2.赤壁市人民醫(yī)院感染科,湖北赤壁 437300

肺結(jié)核是我國(guó)重點(diǎn)防治的疾病之一,有效消除傳染源、控制結(jié)核病是改善患者生命質(zhì)量、提高國(guó)民健康水平的關(guān)鍵。目前,HRZE方案[異煙肼(H)+(R)+吡嗪酰胺(Z)+乙胺丁醇(E)]是治療肺結(jié)核的主要化療方案,但該方案化療時(shí)間長(zhǎng),不良反應(yīng)多,部分患者難以耐受[1-2]。4MRZE方案[莫西沙星(M)+利福平(R)+吡嗪酰胺(Z)+乙胺丁醇(E)化療,療程4個(gè)月]是超短程化療方案,與傳統(tǒng)化療方案相比,療程更短,不良反應(yīng)更少[3]。血清可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(sTREM-1)是反映細(xì)菌感染的敏感指標(biāo)[4],可溶性T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白3(sTim-3)能誘導(dǎo)性表達(dá)于活化T細(xì)胞表面,其表達(dá)水平與活動(dòng)性肺結(jié)核病情呈正相關(guān)[5]。泛素連接酶4A(cullin4A)是一類E3泛素連接酶,具有調(diào)控細(xì)胞周期、維持基因組穩(wěn)定性等功能。有研究發(fā)現(xiàn),肺結(jié)核患者體內(nèi)cullin4A水平下調(diào),提示其可能參與肺結(jié)核的發(fā)生與發(fā)展[6]。但關(guān)于血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平與肺結(jié)核患者4MRZE治療效果之間的關(guān)系并不明確。本研究對(duì)肺結(jié)核患者4MRZE、2HRZE/4HR及2H3R3Z3E3/4H3R3標(biāo)準(zhǔn)四聯(lián)療法方案治療前后血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平進(jìn)行監(jiān)測(cè),初步探討上述指標(biāo)在肺結(jié)核患者治療過(guò)程中的變化,現(xiàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2018年1月至2021年1月武漢市金銀潭醫(yī)院及赤壁市人民醫(yī)院收治的265例肺結(jié)核患者作為研究對(duì)象,根據(jù)化療方案的不同分為2H3R3Z3E3/4H3R3標(biāo)準(zhǔn)四聯(lián)療法方案治療的對(duì)照組(n=97)、4MRZE超短程化療方案治療的4MRZE組(n=88)和2HRZE/4HR方案治療的2HRZE/4HR組(n=80)。納入標(biāo)準(zhǔn):符合《中國(guó)結(jié)核病病理學(xué)診斷專家共識(shí)》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);初治肺結(jié)核;痰涂片或痰培養(yǎng)陽(yáng)性;年齡18～60歲。排除標(biāo)準(zhǔn):糖尿病、心臟病、肝腎疾病、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病合并惡性腫瘤者;存在精神障礙不能配合研究者。4MRZE組男50例,女38例;年齡20～56歲,平均(39.41±14.62)歲;2HRZE/4HR組男47例,女33例;年齡21～56歲,平均(39.57±14.33)歲;對(duì)照組男56例,女41例;年齡19～55歲,平均(38.18±15.82)歲。3組患者一般資料對(duì)比,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有參與者均知情同意,并簽署書(shū)面知情同意文件。

1.2方法

1.2.1治療方法 4MRZE組患者采用4MRZE方案治療:莫西沙星(廣東陽(yáng)光藥業(yè)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H20183246)每次0.4 g,每天1次,利福平(成都錦華藥業(yè)有限責(zé)任公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H51020786)每次 0.45 g,每天1次,吡嗪酰胺(沈陽(yáng)紅旗制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H21022354)每次0.5 g,每天1次,乙胺丁醇(杭州民生藥業(yè)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H33021602)每次0.5 g,每天1次;療程4個(gè)月。2HRZE/4HR組患者采用2HRZE/4HR方案治療:異煙肼(廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H44020699)每次0.3 g,每天1次,利福平(廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H44020771)每次0.45 g,每天1次,吡嗪酰胺(廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H44020761)每次0.5 g,每天2次,每周3 d,乙胺丁醇(廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H44020758)每次0.5 g,每天2次,每周3 d;療程6個(gè)月(2個(gè)月強(qiáng)化期+4個(gè)月鞏固期)。對(duì)照組患者采用2H3R3Z3E3/4H3R3標(biāo)準(zhǔn)四聯(lián)療法方案治療:異煙肼(廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H44020699)每次0.3 g,隔日1次,利福平(成都錦華藥業(yè)有限責(zé)任公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H51020786)每次0.45 g,隔日1次,吡嗪酰胺(沈陽(yáng)紅旗制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H21022354)每次 0.5 g,隔日1次,乙胺丁醇(杭州民生藥業(yè)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H33021602)每次 0.5 g,隔日1次;療程2個(gè)月;隨后,異煙肼(廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H44020699)每次 0.3 g,隔日1次,利福平(成都錦華藥業(yè)有限責(zé)任公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H51020786)每次0.45 g,隔日1次;療程4個(gè)月。

1.2.2療效評(píng)價(jià) 分別在治療2、4個(gè)月時(shí),統(tǒng)計(jì)3組患者痰菌轉(zhuǎn)陰情況及胸部X線病灶吸收情況。痰菌轉(zhuǎn)陰標(biāo)準(zhǔn):連續(xù)2次痰液分離培養(yǎng)陰性,且之后痰菌檢查均為陰性。顯吸:X線片顯示病灶縮小≥50%,空洞閉合;吸收:X線片顯示病灶縮小<50%,但空洞變小;不變(未吸收):X線片顯示病灶無(wú)明顯變化;惡化:X線片顯示病灶播散或增大。有效吸收=顯吸+吸收。

1.3檢測(cè)方法 (1)分別于治療前及治療2、4個(gè)月后,采集3組患者外周靜脈血5 mL,3 000 r/min離心,分離上層血清,置于-80 ℃冰箱內(nèi)保存待用。(2)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清sTREM-1及sTim3水平,試劑盒均購(gòu)自美國(guó)R&D公司。嚴(yán)格按照試劑盒相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測(cè)血清cullin4A mRNA表達(dá)水平。采用Trizol法提取總RNA,Nanodrop2000c超微量分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度。cullin4A正向引物為5′-CTACTGGCCAACATACACGC-3′,反向引物為5′-AAGCCATCTCCCTCGTTGCC-3′。內(nèi)參GAPDH正向引物為5′-AACTCCATCATGAAGTGTGA-3′,反向引物為5′-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3′。RT-qPCR反應(yīng)體系:SYBR Rremix ExTaq Ⅱ(2×)10 μL,cDNA 2 μL,正、反向引物各0.8 μL,ROX Reference Dye(50×)0.4 μL,雙蒸水6 μL。反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性2 min,95 ℃變性15 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,循環(huán)40次。以GAPDH為內(nèi)參,采用2-ΔΔCt法計(jì)算cullin4A mRNA相對(duì)表達(dá)量。

1.4觀察指標(biāo) (1)3組患者臨床療效。(2)3組患者治療前后患者血清sTREM-1、sTim3水平及血清cullin4A mRNA表達(dá)情況。(3)血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與痰菌轉(zhuǎn)陰的關(guān)系。(4)血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與肺結(jié)核患者病灶吸收情況的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.13組患者臨床療效比較 4MRZE組、2HRZE/4HR組在治療2、4個(gè)月時(shí)的痰菌轉(zhuǎn)陰率及病灶有效吸收率均顯著高于對(duì)照組,且4MRZE組高于2HRZE/4HR組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。療程完成后,3組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組患者臨床療效[n(%)]

2.23組肺結(jié)核患者治療前后血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平比較 3組患者治療后血清sTREM-1、sTim3呈下降趨勢(shì),而cullin4A mRNA呈上升趨勢(shì),4MRZE組患者治療2、4個(gè)月時(shí)血清sTREM-1、sTim3顯著低于2HRZE/4HR組、對(duì)照組,而cullin4A mRNA顯著高于2HRZE/4HR組、對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但療程結(jié)束后3組血清sTREM-1、sTim3水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 3組肺結(jié)核患者治療前后血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平比較

2.3血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與痰菌轉(zhuǎn)陰的關(guān)系 治療4個(gè)月,4MRZE組共81例患者痰菌轉(zhuǎn)陰,2HRZE/4HR共69例患者痰菌轉(zhuǎn)陰,對(duì)照組共83例患者痰菌轉(zhuǎn)陰。痰菌轉(zhuǎn)陰及未轉(zhuǎn)陰在治療前及治療2、4個(gè)月時(shí),血清sTREM-1、sTim3水平均呈依次下降趨勢(shì),cullin4A mRNA均呈依次上升趨勢(shì),組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但痰菌轉(zhuǎn)陰者治療前及治療2、4個(gè)月時(shí),血清sTREM-1、sTim3水平均顯著低于痰菌未轉(zhuǎn)陰者,血清cullin4A mRNA顯著高于痰菌未轉(zhuǎn)陰者(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與痰菌轉(zhuǎn)陰的關(guān)系

2.4血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與肺結(jié)核患者病灶吸收情況的關(guān)系 治療4個(gè)月時(shí),4MRZE組80例患者病灶有效吸收,2HRZE/4HR共65例患者病灶有效吸收,對(duì)照組共79例患者病灶有效吸收;病灶有效吸收者及病灶未吸收或惡化者在治療前及治療2、4個(gè)月時(shí),血清sTREM-1、sTim3水平均呈依次下降趨勢(shì),cullin4A mRNA均呈依次上升趨勢(shì),組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但病灶有效吸收者治療前及治療2、4個(gè)月時(shí),血清sTREM-1、sTim3水平均顯著低于病灶未吸收或惡化者,血清cullin4A mRNA顯著高于痰菌未轉(zhuǎn)陰者病灶未吸收或惡化者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 血清sTREM-1、sTim3、cullin4A與肺結(jié)核患者病灶吸收情況的關(guān)系

3 討 論

肺結(jié)核主要由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染性疾病,結(jié)核分枝桿菌主要寄存于巨噬細(xì)胞內(nèi),通過(guò)降低患者機(jī)體免疫力促進(jìn)肺結(jié)核的發(fā)生與發(fā)展[7-9]。HRZE是目前治療肺結(jié)核最常見(jiàn)的化療方案,其中異煙肼是合成抗菌藥物,能有效抑制烯?；d體蛋白還原酶,殺滅細(xì)菌,并降低超氧化物歧化酶活性,抑制結(jié)核分枝桿菌增殖;吡嗪酰胺是一線抗結(jié)核藥物,利福平為廣譜抗生素,能與結(jié)核分枝桿菌轉(zhuǎn)錄酶的β亞基單位牢固結(jié)合,阻斷其DNA復(fù)制,有效中止蛋白合成;乙胺丁醇能干擾其RNA合成,抑制其增殖。但傳統(tǒng)HRZE化療方案治療時(shí)間長(zhǎng),不良反應(yīng)多。4MRZE將異煙肼更換為莫西沙星,莫西沙星對(duì)多重耐藥菌株均具有良好的體外抗菌活性,能縮短治療療程,降低藥物不良反應(yīng)。本研究中4MRZE組患者治療2、4個(gè)月的痰菌轉(zhuǎn)陰率分別為62.50%、87.50%,病灶有效吸收率分別為55.68%、80.68%,痰菌轉(zhuǎn)陰率及病灶有效吸收率均顯著高于2HRZE/4HR組(P<0.05),而3組治療完成后最終療效差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表明4MRZE的最終治療效果與2HRZE/4HR及經(jīng)典方案相近,但是所需的治療時(shí)間明顯縮短。這與蔡青山等[10]、馮雄等[11]研究結(jié)果相近。

血清sTREM是髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體(TREM)的可溶性形式,sTREM-1是其超家族中的重要成員,其在中性粒白細(xì)胞、CD14+單核-巨噬細(xì)胞、肺巨噬細(xì)胞等單核細(xì)胞源性上皮樣細(xì)胞上呈高表達(dá),在觸發(fā)、擴(kuò)大炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要的功效[12]。朱俊等[13]研究發(fā)現(xiàn),血清sTREM-1水平升高將增加肺結(jié)核患者病情控制不良風(fēng)險(xiǎn),并在預(yù)測(cè)患者預(yù)后方面也具有一定的作用,提示血清sTREM-1在提示肺結(jié)核病情中具有一定的價(jià)值。sTim-3表達(dá)于活化的T細(xì)胞表面,能抑制抗γ-干擾素等細(xì)胞因子分泌,降低巨噬細(xì)胞吞噬能力,并誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫耐受[14-15]。cullin4A屬于泛素蛋白酶體系,可介導(dǎo)蛋白質(zhì)降解,調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,維護(hù)基因組穩(wěn)定性等。閆書(shū)娜等[6]研究發(fā)現(xiàn),與健康者及潛伏肺結(jié)核患者相比,肺結(jié)核患者血清cullin4A水平明顯下降,并與miR-194-5p呈負(fù)相關(guān),推測(cè)cullin4A可能參與肺結(jié)核的發(fā)生及發(fā)展。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),3種化療方案治療2、4個(gè)月及療程結(jié)束后,肺結(jié)核患者血清sTREM-1、sTim3水平呈依次下降趨勢(shì),血清cullin4A mRNA水平呈依次上升趨勢(shì),提示血清sTREM-1、sTim3、cullin4A在反映肺結(jié)核患者治療效果中具有一定價(jià)值。進(jìn)一步分析4MRZE方案治療4個(gè)月后痰菌轉(zhuǎn)陰者與未轉(zhuǎn)陰者、病灶有效吸收及未吸收患者血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平發(fā)現(xiàn)81例患者痰菌轉(zhuǎn)陰者及7例未轉(zhuǎn)陰者在治療前、治療2個(gè)月及4個(gè)月時(shí),血清sTREM-1、sTim3水平均呈依次下降趨勢(shì),cullin4A mRNA均呈依次上升趨勢(shì),組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)差異顯著,但痰菌轉(zhuǎn)陰者治療前、治療2個(gè)月及4個(gè)月時(shí),血清sTREM-1、sTim3水平均顯著低于痰菌未轉(zhuǎn)陰者,血清cullin4A mRNA顯著高于痰菌未轉(zhuǎn)陰者,且病灶有效吸收與未吸收者血清sTREM-1、sTim3、cullin4A RNA也呈現(xiàn)一致的規(guī)律。這提示血清sTREM-1、sTim3、cullin4A水平可反映肺結(jié)核患者病情及療效。

綜上所述,4MRZE化療方案在治療肺結(jié)核中具有良好的效果,隨著治療的進(jìn)行,患者血清sTREM-1、sTim3水平呈下降趨勢(shì),cullin4A水平呈上升趨勢(shì),三者在反映痰菌轉(zhuǎn)陰及病灶有效吸收中也具有良好的價(jià)值。