T細(xì)胞亞群與遷延性細(xì)菌性支氣管炎氣道損害相關(guān)性研究

黃 龍,王水蓉,蔡 雪,何金州,陶 沛

1.成都市龍泉驛區(qū)婦幼保健院兒科,四川成都 610100;2.廣元市中心醫(yī)院兒科;四川廣元 628000;3.成都市婦女兒童中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科,四川成都 610000

遷延性細(xì)菌性支氣管炎(PBB)是兒童常見的一種由卡他莫拉菌、肺炎鏈球菌等細(xì)菌引起的氣道慢性感染類疾病,若病情未得到及時(shí)有效診治,可導(dǎo)致氣道破壞、重塑、擴(kuò)張,嚴(yán)重降低患兒生活質(zhì)量,并增加不良病情轉(zhuǎn)歸的風(fēng)險(xiǎn),故對(duì)其進(jìn)行研究意義重大[1-2]。根據(jù)既往報(bào)道及長(zhǎng)期臨床工作經(jīng)驗(yàn),PBB患兒氣道損害發(fā)生率及嚴(yán)重程度不盡相同,提示某些個(gè)性化的因素參與了PBB患兒氣道損害與進(jìn)展[3-4]。NTESOU等[5]報(bào)道,對(duì)年齡在5～14歲PBB兒童進(jìn)行支氣管內(nèi)活檢及蘇木精-伊紅染色發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)期PBB可激活先天性免疫通路,導(dǎo)致包括淋巴細(xì)胞在內(nèi)的免疫炎癥微環(huán)境的改變與氣道損害,提示淋巴細(xì)胞與PBB氣道損害有關(guān)。T淋巴細(xì)胞是占人體數(shù)量最多的淋巴細(xì)胞,能識(shí)別抗原,調(diào)控機(jī)體對(duì)細(xì)菌等病原菌的免疫應(yīng)答,其水平紊亂被證實(shí)參與毛細(xì)支氣管炎、喘息性支氣管炎等多種呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)生[6-7]。但現(xiàn)階段關(guān)于T細(xì)胞亞群與PBB氣道損害相關(guān)性的報(bào)道較少,是否能為臨床防治PBB氣道損害提供一個(gè)新思路尚不明確?；诖吮狙芯刻接慣淋巴細(xì)胞亞群與PBB氣道損害相關(guān)性,旨在為臨床深入認(rèn)識(shí)PBB氣道損害機(jī)制、促進(jìn)病情良好轉(zhuǎn)歸等提供參考,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年6月至2022年1月在成都市龍泉驛區(qū)婦幼保健院就診或體檢的112例PBB患兒(PBB組)、112例非PBB患兒(非PBB組)及112例健康體檢兒童(對(duì)照組)作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):PBB組符合PBB診斷標(biāo)準(zhǔn)[8];非PBB組符合細(xì)菌性支氣管炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[8];均無先天性呼吸系統(tǒng)解剖畸形。排除標(biāo)準(zhǔn):先天性免疫功能缺陷者;合并血液系統(tǒng)疾病者;合并其他感染性疾病患者;哮喘、慢性阻塞性肺疾病、支氣管擴(kuò)張癥患者。PBB組女65例,男47例;年齡2～14歲,平均(5.87±1.60)歲;體重12～49 kg,平均(19.53±3.62)kg;非PBB組女59例,男53例;年齡2～13歲,平均(5.69±1.72)歲;體重11～51 kg,平均(20.02±4.14)kg;對(duì)照組女61例,男51例;年齡2～15歲,平均(5.73±1.65)歲;體重11～52 kg,平均(20.38±4.55)kg。3組性別、年齡等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),均衡可比。3組兒童法定監(jiān)護(hù)人知曉本研究?jī)?nèi)容,自愿加入,并簽署知情同意書。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過(倫理批號(hào):KY-YS-2022-002)。

1.2方法

1.2.1T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè) 于就診或體檢時(shí)采集受試兒童外周靜脈血5 mL,采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD3+T細(xì)胞(參考范圍:61%～77%)、CD4+T細(xì)胞(參考范圍:33%～58%)、CD8+T細(xì)胞(參考范圍:13%～39%),計(jì)算CD4+/CD8+(參考范圍:0.71～2.78)。流式細(xì)胞儀(BriCyte E6 型)及抗CD3、抗CD4、抗CD8、溶血素、細(xì)胞洗液、FACS清洗液均購(gòu)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.2.2氣道損害程度評(píng)估[8]PBB組就診時(shí)均行支氣管鏡檢查評(píng)估氣道損害及其嚴(yán)重程度。重度:黏膜腫脹、充血,氣道黏膜分泌物增多,管腔被形成的黏液栓阻塞;中度:氣道黏膜分泌物增多,黏膜腫脹、充血,管壁附著有膜狀分泌物;輕度:氣道黏膜呈慢性化膿性炎癥性改變,黏膜水腫、蒼白;無:尚無氣道損害。

1.3觀察指標(biāo) (1)比較各組T細(xì)胞亞群水平。(2)比較PBB組不同氣道損害程度患兒T細(xì)胞亞群。(3)分析PBB不同T細(xì)胞亞群水平者氣道損害的危險(xiǎn)度。(4)分析T細(xì)胞亞群與PBB氣道損害程度關(guān)系。(5)分析PBB氣道損害的相關(guān)影響因素。(6)分析T細(xì)胞亞群評(píng)估PBB氣道損害的價(jià)值。

2 結(jié) 果

2.1各組T細(xì)胞亞群比較 3組CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組T細(xì)胞亞群比較

2.2PBB組不同氣道損害程度患兒T細(xì)胞亞群比較 與無氣道損害者比較,輕度、中度、重度氣道損害兒童CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞呈降低趨勢(shì),CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+呈升高趨勢(shì),組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 PBB組不同氣道損害程度患兒T細(xì)胞亞群比較

2.3PBB不同T細(xì)胞亞群水平者氣道損害的危險(xiǎn)度RR分析顯示,CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+/CD8+異常者發(fā)生氣道損害的風(fēng)險(xiǎn)分別是正常者的3.226、22.636、8.376、39.316倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 PBB不同T細(xì)胞亞群水平者氣道損害的危險(xiǎn)度分析

2.4T細(xì)胞亞群與PBB氣道損害程度的相關(guān)性 CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞與PBB氣道損害程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.802、-0.833,均P<0.001),CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+與PBB氣道損害程度呈正相關(guān)(r=0.704、0.817,均P<0.001)。

2.5多因素Logistic回歸分析 以PBB氣道損害情況作為因變量(無=0,有=1),納入T細(xì)胞亞群作為自變量(均按實(shí)際值賦值)進(jìn)行多因素Logistic回歸分析顯示,CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+/CD8+均與PBB氣道損害顯著相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 PBB氣道損害的多因素Logistic回歸分析

2.6T細(xì)胞亞群評(píng)估PBB氣道損害的ROC曲線 繪制T細(xì)胞亞群評(píng)估PBB氣道損害的ROC曲線,結(jié)果顯示,單一指標(biāo)中,CD4+/CD8+的AUC最大,但低于各T細(xì)胞亞群聯(lián)合評(píng)估的AUC。見表5。

表5 T細(xì)胞亞群評(píng)估PBB氣道損害的ROC曲線分析結(jié)果

3 討 論

PBB主要癥狀體征包括長(zhǎng)期慢性濕性咳嗽、痰咳、哮鳴音、喘息、肺部濕啰音、喘鳴等,病情嚴(yán)重程度及預(yù)后效果與患兒氣道損害情況密切相關(guān),所以對(duì)PBB氣道損害機(jī)制進(jìn)行研究是必要的[9]。

CD3+T細(xì)胞可傳遞抗原信號(hào),其水平降低提示機(jī)體免疫功能減弱[10]。CD4+T細(xì)胞可直接反映機(jī)體免疫力,是對(duì)抗病原菌重要免疫細(xì)胞,其水平降低可導(dǎo)致急性感染類疾病的發(fā)生[11]。CD8+T細(xì)胞在生理狀態(tài)下與CD4+T細(xì)胞保持動(dòng)態(tài)平衡,可避免過度的細(xì)胞免疫反應(yīng)[12]。本研究結(jié)果顯示,與健康對(duì)照人群相比,PBB與非PBB的T淋巴細(xì)胞呈現(xiàn)出不同的變化特點(diǎn),其中非PBB組CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞減少,CD8+T細(xì)胞增多,這是典型T淋巴細(xì)胞免疫功能減弱的表現(xiàn),從而增加急性感染風(fēng)險(xiǎn)。本研究結(jié)果顯示,PBB組CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞減少,CD4+T細(xì)胞增多,CD4+/CD8+升高,各T淋巴細(xì)胞亞群變化趨勢(shì)較為復(fù)雜,與羅云等[13]報(bào)道一致,這提示T淋巴細(xì)胞亞群紊亂與慢性支氣管炎發(fā)生有關(guān)。CD3+T細(xì)胞減少反映PBB患兒免疫功能低下,所以導(dǎo)致病程較長(zhǎng)、病情遷延不愈;CD4+T細(xì)胞增多,CD8+T細(xì)胞減少,可誘發(fā)白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子-α等免疫炎癥介質(zhì)活化與大量分泌,從而對(duì)機(jī)體造成慢性炎癥損傷[14-15]?？梢姍z測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群評(píng)估PBB患兒免疫功能時(shí),應(yīng)結(jié)合CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞,以及CD4+/CD8+進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

本研究還發(fā)現(xiàn),與無氣道損害者比較,輕度、中度、重度氣道損害患兒CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞呈降低趨勢(shì),CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+呈升高趨勢(shì),且CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+/CD8+異常者發(fā)生氣道損害的風(fēng)險(xiǎn)分別是正常者的3.226、22.636、8.376、39.316倍,提示T淋巴細(xì)胞紊亂程度與PBB患兒氣道損害程度有關(guān)。蔡利紅等[16]報(bào)道,與單純痰栓堵塞組及無阻塞組比較,存在氣道重度損害患兒CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞減少,T淋巴細(xì)胞亞群比例紊亂,本研究觀點(diǎn)與之存在相似之處。細(xì)菌在PBB患兒氣道形成生物膜,T淋巴細(xì)胞免疫功能低下和抑制性T淋巴細(xì)胞缺陷,不僅使細(xì)菌擁有良好的生存環(huán)境,還導(dǎo)致白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子-α等炎癥介質(zhì)失去抑制性的限制機(jī)制,大量合成,對(duì)氣道黏膜、上皮細(xì)胞造成炎性損傷,從而導(dǎo)致水腫、分泌物增多、黏膜充血等氣道損害[17-18]。本研究結(jié)果顯示,CD3+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞與PBB氣道損害程度呈負(fù)相關(guān),CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+與PBB氣道損害程度呈正相關(guān),提示針對(duì)PBB患兒,提升CD3+T細(xì)胞及在一定程度范圍內(nèi)保證CD8+T細(xì)胞水平,有利于保護(hù)氣道,避免長(zhǎng)期炎癥刺激導(dǎo)致的繼發(fā)性支氣管軟化、擴(kuò)張等,從而促進(jìn)預(yù)后的改善,這為臨床防治PBB及氣道損害提供了一個(gè)新思路。但徐柯等[19]研究指出,支氣管炎患兒CD4+/CD8+下降,本研究結(jié)果不同,其原因可能是:(1)納入患兒樣本量不同;(2)PBB為長(zhǎng)期、慢性、遷延性疾病,機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)急性支氣管炎與PBB的應(yīng)答不同。因此,下一步仍需增加研究對(duì)象數(shù)量,比較分析急性支氣管炎、PBB患兒T淋巴細(xì)胞亞群的變化,以進(jìn)一步闡明問題。

目前支氣管鏡是臨床評(píng)估氣道損害的重要方法,但其為侵入性檢查,且常需提前預(yù)約,延長(zhǎng)患兒就醫(yī)時(shí)間,影響疾病診治效率。雖然以上有學(xué)者研究了T淋巴細(xì)胞亞群在PBB氣道損害中作用,但大多單純局限于不同分組水平的比較,運(yùn)用T淋巴細(xì)胞亞群定量評(píng)估氣道損害的報(bào)道鮮見。本研究通過ROC曲線分析發(fā)現(xiàn),CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+/CD8+評(píng)估PBB氣道損害的AUC依次為0.783、0.751、0.764、0.804,其中CD4+/CD8+的AUC最大,提示檢測(cè)外周血CD4+/CD8+可作為評(píng)估PBB患兒氣道損害的指標(biāo)。同時(shí)CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+/CD8+聯(lián)合評(píng)估患兒氣道損害的AUC為0.892,表明聯(lián)合檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群能進(jìn)一步提高評(píng)估的可靠性,為臨床評(píng)估PBB氣道損害提供了一個(gè)非侵入性、易于獲取的方案。值得注意的是,不同醫(yī)療單位CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+/CD8+的參考范圍可能不同,本研究在分析危險(xiǎn)度時(shí)依據(jù)的是成都市龍泉驛區(qū)婦幼保健院的,可能會(huì)降低研究結(jié)果在其他單位的適用性,這也是本研究的不足所在,后續(xù)仍需完善質(zhì)量控制方法深入探討。

綜上所述,PBB患兒T淋巴細(xì)胞亞群紊亂,CD3+T淋巴細(xì)胞免疫功能低下和CD8+抑制性T淋巴細(xì)胞缺陷與氣道損害及其嚴(yán)重程度密切相關(guān),聯(lián)合檢測(cè)有望為氣道損害的評(píng)估提供一種非侵入、便捷性的手段,為臨床防治PBB及氣道損害提供了一個(gè)新思路。