液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法分析激素代謝譜在腎上腺疾病診斷中的應(yīng)用進(jìn)展*

陳璐璐綜述，劉傳鑫，段佳佳，江 濤，姜宏衛(wèi)△審校

1.河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌代謝中心內(nèi)分泌代謝科/河南省遺傳罕見病醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/國(guó)家代謝性疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心洛陽分中心，河南洛陽 471000；2.河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南洛陽 471000

大氣壓離子化技術(shù)在20世紀(jì)80年代被科學(xué)家首次發(fā)明，它的出現(xiàn)進(jìn)一步推動(dòng)了液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的迅速發(fā)展[1]。近年來隨著液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術(shù)的不斷進(jìn)步，其被應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化工、環(huán)境等各行各業(yè)，特別是在臨床檢驗(yàn)診斷方面，其發(fā)展的速度尤為迅猛[2]，已逐漸由科研應(yīng)用轉(zhuǎn)變?yōu)橛糜谂R床檢測(cè)和輔助診斷，為精準(zhǔn)醫(yī)療提供服務(wù)。

自2010年以來，在內(nèi)分泌領(lǐng)域涉及LC-MS/MS技術(shù)的臨床研究文獻(xiàn)每年增加超過100篇，研究?jī)?nèi)容主要涵蓋了新生兒遺傳代謝病、罕見病、激素代謝紊亂疾病等領(lǐng)域[3]。據(jù)報(bào)道，目前LC-MS/MS技術(shù)可同時(shí)篩查有機(jī)酸、氨基酸代謝及脂質(zhì)代謝紊亂等多種代謝性指標(biāo)[4]，在內(nèi)分泌檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用有了飛速進(jìn)展，為庫欣綜合征(CS)、原發(fā)性醛固酮增多癥(PA)等疑難病例的診斷及鑒別提供了更準(zhǔn)確的檢測(cè)技術(shù)和新的特異性診斷標(biāo)志物[5]。目前臨床實(shí)驗(yàn)室采用傳統(tǒng)免疫學(xué)方法測(cè)定激素也暴露出諸多缺點(diǎn)：對(duì)激素代謝物的結(jié)構(gòu)類似性不能進(jìn)行特異性鑒別檢測(cè)；抗體交叉反應(yīng)干擾；動(dòng)態(tài)線性范圍狹窄，不能滿足檢測(cè)波動(dòng)較大的激素水平的需求；對(duì)水平過低的激素檢測(cè)靈敏度較低等等。這些缺點(diǎn)一定程度上導(dǎo)致傳統(tǒng)免疫學(xué)方法已經(jīng)不能滿足內(nèi)分泌疾病領(lǐng)域全面精準(zhǔn)診斷疾病的需求，而LC-MS/MS技術(shù)作為內(nèi)分泌疾病診療領(lǐng)域新興的檢驗(yàn)技術(shù)，因其靈敏度高、特異度高、一個(gè)標(biāo)本多種檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，可為疾病診斷提供更精準(zhǔn)、全面的診療信息[6]。本文通過對(duì)LC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)類固醇代謝譜在腎上腺疾病診療領(lǐng)域中的應(yīng)用進(jìn)行深入闡述，以期能夠進(jìn)一步提升其在內(nèi)分泌疾病篩查診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 LC-MS/MS分析激素代謝譜

1.1激素代謝譜 人體內(nèi)的激素是一種弱極性的小分子物質(zhì)，主要產(chǎn)生于腎上腺、胎盤和生殖腺等器官，臨床上所測(cè)定的激素主要指包括糖皮質(zhì)激素、鹽皮質(zhì)激素、孕激素和性激素在內(nèi)的類固醇激素，以及由腎上腺髓質(zhì)分泌的兒茶酚胺(CA)類激素，這些激素的中間代謝產(chǎn)物包括11-脫氧皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮等20多種化學(xué)物質(zhì)。類固醇激素是由膽固醇經(jīng)過各種酶的催化反應(yīng)，最終相互轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的激素來調(diào)節(jié)內(nèi)分泌代謝[7]；CA類激素是一類應(yīng)激擬交感激素，其產(chǎn)生部位主要在腎上腺髓質(zhì)，對(duì)于人體最重要的CA類激素主要包括腎上腺素(E)、去甲腎上腺素(NE)和多巴胺(DA)。

1.2LC-MS/MS技術(shù)優(yōu)勢(shì) 激素代謝譜檢測(cè)是目前臨床化學(xué)領(lǐng)域最具挑戰(zhàn)性的實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目，因?yàn)樵S多激素代謝物具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，對(duì)方法的特異度要求高，并且許多激素中間代謝物的水平很低，又存在結(jié)合、游離形式和性別、年齡之分，對(duì)方法的靈敏度要求也很高，即使大多數(shù)免疫學(xué)方法可測(cè)到10 pg/mL，但其準(zhǔn)確度、特異度較差。LC-MS/MS技術(shù)適用范圍遠(yuǎn)超過放射性免疫檢測(cè)和化學(xué)檢測(cè)范圍，它的物質(zhì)水平檢測(cè)下限是其他常規(guī)免疫化學(xué)方法所無法相比的，最低檢測(cè)限可<4 pg/mL[8]，并且可同時(shí)檢測(cè)20多種激素代謝物水平，所以近年來LC-MS/MS的應(yīng)用得到了廣泛的關(guān)注和發(fā)展。復(fù)旦大學(xué)中山醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科對(duì)LC-MS/MS檢測(cè)20種類固醇代謝物血漿樣品進(jìn)行性能和方法學(xué)驗(yàn)證，并采用LC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)多囊卵巢綜合征(PCOS)患者和亞臨床庫欣綜合征(SCS)患者血漿中20種類固醇激素，證實(shí)LC-MS/MS方法檢測(cè)類固醇代謝物可以很好地鑒別這兩種疾病患者與健康人群，進(jìn)一步驗(yàn)證了該方法的高特異度和靈敏度[9]。近年來國(guó)內(nèi)外多數(shù)內(nèi)分泌學(xué)家逐漸意識(shí)到LC-MS/MS檢測(cè)方法的高特異度和多種物質(zhì)共分析等優(yōu)勢(shì)，選擇其作為檢測(cè)類固醇激素優(yōu)選方法，將LC-MS/MS應(yīng)用于激素代謝譜檢測(cè)，以輔助篩查和診斷相關(guān)內(nèi)分泌疾病。在檢測(cè)標(biāo)本的選擇方面，LC-MS/MS技術(shù)不僅可以檢測(cè)血清標(biāo)本中的激素水平，還可以檢測(cè)唾液、尿液、精液、卵泡液等體液標(biāo)本，標(biāo)本的可選擇范圍十分廣泛[10-11]。目前已有用LC-MS/MS測(cè)定血漿、唾液或者尿液中糖皮質(zhì)激素的相關(guān)標(biāo)本處理方法，特別是尿液游離皮質(zhì)醇或者唾液皮質(zhì)醇和可的松，以及微量的激素中間代謝物，相比免疫分析有很大的優(yōu)勢(shì)[10]。采用LC-MS/MS測(cè)定血漿或者尿液中鹽皮質(zhì)激素醛固酮，其靈敏度比免疫學(xué)方法高10倍[12]，并且一些性激素的檢測(cè)項(xiàng)目包括睪酮、雌二醇、孕酮等相關(guān)代謝產(chǎn)物，這些激素因性別、年齡和生理狀態(tài)不同水平差別很大，只有采用靈敏度高、線性范圍廣的LC-MS /MS技術(shù)才能覆蓋不同情況下的激素水平的差異性。

2 LC-MS/MS技術(shù)在腎上腺疾病診斷的臨床應(yīng)用

2.1先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥(CAH)的篩查 CAH是一種常染色體隱性遺傳性疾病，由于基因突變引起體內(nèi)類固醇激素合成過程中相關(guān)酶缺乏，導(dǎo)致腎上腺皮質(zhì)激素合成障礙同時(shí)引起腎上腺皮質(zhì)增生和激素代謝紊亂[13]。臨床上篩查CAH的常用方法為采集出生3 d的新生兒足跟血滴于特制的濾紙片上，采用時(shí)間分辨熒光免疫分析法或酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定干濾紙血片中17-羥孕酮水平是否升高，然而由于免疫方法的交叉反應(yīng)干擾，新生兒初篩的結(jié)果可能會(huì)出現(xiàn)假陽性，且假陽性率高[14]，而采用LC-MS/MS分析方法，對(duì)新生兒初篩陽性結(jié)果進(jìn)行二級(jí)篩查，通過同位素內(nèi)標(biāo)法定量對(duì)類固醇激素代謝譜進(jìn)行檢測(cè)，可盡可能避免基質(zhì)和交叉反應(yīng)的干擾。LC-MS/MS技術(shù)不僅可以檢測(cè)17-羥孕酮，還可檢測(cè)包括21-脫氧皮質(zhì)醇、雄烯二酮、11-脫氧皮質(zhì)醇等多種類固醇代謝物，并且計(jì)算代謝產(chǎn)物與前體的水平比值，例如(17-羥孕酮+雄烯二酮)/皮質(zhì)醇或(17-羥孕酮+21-脫氧皮質(zhì)醇)/皮質(zhì)醇的比值，根據(jù)比值的大小可以判斷代謝途徑中酶的活性大小[15]。LC-MS/MS技術(shù)不僅可以有效降低假陽性率，提高準(zhǔn)確度，還可以對(duì)21-羥化酶的經(jīng)典型和非經(jīng)典型進(jìn)行診斷和分型。雖然通過CYP21A2基因分型檢測(cè)雜合子和無癥狀患者對(duì)遺傳咨詢很有價(jià)值，但成本高、檢測(cè)步驟復(fù)雜且結(jié)果較難獲得。通過LC-MS/MS技術(shù)同時(shí)測(cè)量促腎上腺皮質(zhì)激素刺激的血清17-羥孕酮和21-脫氧皮質(zhì)醇水平，可有效區(qū)分21-羥化酶缺乏的表型，COSTA-BARBOSA等[16]運(yùn)用此方法成功篩選出92.3%的非經(jīng)典型CAH患者和無癥狀患者，為CAH的診斷分型提供了更全面的參考信息。

2.2PA的篩查與分型 PA是由于腎上腺皮質(zhì)病變導(dǎo)致自主性醛固酮分泌過多引起水鈉潴留并進(jìn)一步抑制腎素血管緊張素系統(tǒng)所致，其主要臨床表現(xiàn)為高血壓伴低鉀血癥[17]。PA患者的治療方案根據(jù)腎上腺分泌醛固酮的情況而定，單側(cè)腎上腺分泌醛固酮過多可通過腎上腺手術(shù)治愈，雙側(cè)腎上腺均過多分泌醛固酮?jiǎng)t需要終生接受鹽皮質(zhì)激素拮抗劑的治療[18]，在臨床上鑒別單側(cè)腎上腺腺瘤(APAs)還是雙側(cè)腎上腺增生(BAH)引起的PA需要通過腎上腺靜脈采血(AVS)并測(cè)量雙側(cè)腎上腺靜脈血內(nèi)的醛固酮和皮質(zhì)醇水平是否存在顯著差異來判斷。EISENHOFER等[19]評(píng)估了LC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)類固醇代謝譜對(duì)PA患者進(jìn)行分型的效用，證實(shí)該方法優(yōu)于傳統(tǒng)的醛固酮和皮質(zhì)醇免疫分析方法，并擴(kuò)展了18-羥皮質(zhì)醇等作為鑒別PA不同亞型的額外生物標(biāo)志物，同時(shí)提供數(shù)據(jù)說明BAH和APAs患者腎上腺激素生成模式的差異可以轉(zhuǎn)化為外周靜脈血類固醇譜的差異，通過對(duì)外周靜脈血激素類固醇代謝譜的差異性分析也可用于對(duì)PA亞型的分類。臨床上高血壓患者常規(guī)篩查PA主要是通過測(cè)定醛固酮與腎素活性比值(ARR)進(jìn)行，需要抽血檢測(cè)并且有采血時(shí)間及采血體位要求，運(yùn)用常規(guī)免疫分析方法進(jìn)行檢測(cè)，標(biāo)本前處理復(fù)雜，檢測(cè)成本較高。馬文君等[20]研究的采用LC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)24 h尿醛固酮水平，能夠有效地避免測(cè)定血液醛固酮和腎素時(shí)受到激素脈沖式分泌的影響，較單次測(cè)定血醛固酮水平更能反映醛固酮的整體分泌情況，并且在對(duì)高血壓患者進(jìn)行PA篩查時(shí)測(cè)定24 h尿醛固酮的特異度和靈敏度較高，具有更好的臨床應(yīng)用價(jià)值，并且尿液相對(duì)于血液留取更方便，通過應(yīng)用LC-MS/MS技術(shù)測(cè)定可將尿皮質(zhì)醇、尿甲氧基腎上腺素類物質(zhì)等其他內(nèi)分泌性高血壓相關(guān)的激素進(jìn)行同步檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了一次檢測(cè)篩查多種疾病。在國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心2019年實(shí)行的《全國(guó)內(nèi)分泌正確度驗(yàn)證計(jì)劃》顯示，常規(guī)采用免疫學(xué)方法檢測(cè)的醛固酮水平結(jié)果普遍較實(shí)際靶值偏高，而采用LC-MS/MS技術(shù)檢測(cè)的結(jié)果更接近于實(shí)際靶值，進(jìn)一步說明了LC-MS/MS技術(shù)在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域具有很廣闊的應(yīng)用前景[21]。

2.3CS的篩查與診斷 CS是由于腎上腺皮質(zhì)分泌過多皮質(zhì)醇導(dǎo)致以滿月臉、向心性肥胖等多種內(nèi)分泌代謝紊亂伴隨精神心理異常的一組綜合征。除了典型的CS患者之外，還有部分皮質(zhì)醇分泌異常而缺乏典型高皮質(zhì)醇血癥臨床表現(xiàn)的患者，稱為SCS[22]，還有部分患者是在進(jìn)行常規(guī)CT掃描檢查中偶然發(fā)現(xiàn)存在腎上腺無功能性意外瘤，在健康人群和這3種疾病患者之間，血液、尿液皮質(zhì)醇水平的差異性呈現(xiàn)“連續(xù)性”升高，即從正常分泌到明顯升高間的皮質(zhì)醇水平界限并不明確，各種類型之間存在激素水平重疊，這種分界不明確現(xiàn)象造成CS鑒別診斷十分困難，因此迫切需要尋找一種靈敏度和特異度高，能夠區(qū)分患者、亞臨床患者和非患者的檢測(cè)方法來對(duì)CS進(jìn)行篩查和診斷，而LC-MS/MS技術(shù)憑借其高靈敏度和特異度被作為篩查和診斷CS的首選方法。

對(duì)于CS的初始篩查，內(nèi)分泌學(xué)會(huì)指南推薦以下試驗(yàn)之一：1 mg地塞米松抑制試驗(yàn)(DST)或深夜唾液皮質(zhì)醇(LNSC)或24 h尿游離皮質(zhì)醇(UFC)測(cè)量。CECCATO等[23]在一系列患者中檢查了上述幾種測(cè)試的診斷性能，證實(shí)在疑似皮質(zhì)醇增多癥的患者中，通過LC-MS/MS測(cè)量UFC在診斷CS方面實(shí)現(xiàn)了最優(yōu)準(zhǔn)確度，建議用LC-MS/MS測(cè)量UFC作為診斷CS的一線篩選方法，用1 mg DST或LNSC試驗(yàn)測(cè)定來進(jìn)一步確診高皮質(zhì)醇血癥。由于皮質(zhì)醇在唾液中的水平極低，因此對(duì)分析方法的靈敏度要求較高，2013年有研究報(bào)道采用LC-MS/MS測(cè)定唾液皮質(zhì)醇[24]，通過采用LC-MS/MS對(duì)皮質(zhì)醇化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行特異性分析，避免了免疫法檢測(cè)中出現(xiàn)可的松等內(nèi)源性激素化合物和強(qiáng)的松龍等外源性激素類藥物的交叉反應(yīng)所造成的干擾，使檢測(cè)的特異性更高，并且LC-MS/MS檢測(cè)皮質(zhì)醇下限可達(dá)到0.07～0.11 nmol/L[25]，除了超高靈敏度外，LC-MS/MS在評(píng)估唾液標(biāo)本中是否存在潛在污染或外用合成類固醇激素干擾方面非常有效。臨床上如果出現(xiàn)免疫法檢測(cè)唾液皮質(zhì)醇值大于參考值上限的20倍，但患者臨床癥狀卻并不典型，懷疑是否為外源性藥物干擾引起的結(jié)果偏高，這種情況可采用LC-MS/MS技術(shù)根據(jù)唾液游離皮質(zhì)醇和可的松的化合物檢測(cè)譜峰的差異進(jìn)行區(qū)分來判斷干擾物來源。

由于目前各個(gè)國(guó)家研究所選取的CS患者和對(duì)照組的對(duì)象不盡相同，導(dǎo)致研究所得的診斷切點(diǎn)值也各不相同，通常臨床上將LC-MS/MS檢測(cè)24 hUFC診斷CS的切點(diǎn)值定義為170 nmol/24 h[26]，與2014年所發(fā)表文獻(xiàn)中提到的診斷CS的UFC切點(diǎn)為166～170 nmol/24 h[27]的結(jié)果是相近的，但該切點(diǎn)值對(duì)于一些亞臨床、輕微患者的診斷仍然缺乏敏感性。目前國(guó)際上對(duì)于LNSC的檢測(cè)還沒有較一致的診斷CS的切點(diǎn)值，需要同時(shí)采用LC-MS/MS和免疫法檢測(cè)24 hUFC,但隨著LC-MS/MS技術(shù)的普及，采用LC-MS/MS同時(shí)檢測(cè)LNSC和24 hUFC將成為提高診斷CS的靈敏度和特異度的有效方法。目前國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)中不僅是采用LC-MS/MS測(cè)定皮質(zhì)醇，而且進(jìn)行皮質(zhì)醇及其代謝產(chǎn)物或糖皮質(zhì)激素代謝指紋譜的分析，這將為臨床精準(zhǔn)診療提供更好的支持。

2.4嗜鉻細(xì)胞瘤(PPGL)的篩查和診斷 PPGL是起源于神經(jīng)外胚層嗜鉻組織的腫瘤，主要分泌CA，PPGL患者可因長(zhǎng)期高血壓導(dǎo)致嚴(yán)重的心、腦、腎損害或者因突發(fā)嚴(yán)重高血壓而導(dǎo)致高血壓危象，危及生命[28]。CA可代謝為3-甲氧基酪胺(3-MT)、3-甲氧基腎上腺素(MN)、3-甲氧基去甲腎上腺素(NMN)。PPGL以往常規(guī)篩查生化指標(biāo)包括血液、尿液中的CA和尿香草扁桃酸等，缺乏診斷特異性，最新的研究結(jié)果顯示MN和NMN相較于常規(guī)篩查的生化指標(biāo)對(duì)PPGL的輔助診斷具有更高的臨床價(jià)值，特別是血漿中的游離MN和NMN水平，其代謝的半衰期較CA長(zhǎng)，因此診斷性能較CA更加穩(wěn)定，可更直觀地反映腫瘤細(xì)胞的分泌狀態(tài)[29]。國(guó)內(nèi)外關(guān)于PPGL的診療指南[30-31]中提到，診斷PPGL首選的生化指標(biāo)為CA，MN、NMN、NE、E和DA可協(xié)助診斷，并推薦采用LC-MS/MS進(jìn)行激素檢測(cè)。黃斐等[32]建立了LC-MS/MS平臺(tái)檢測(cè)MN和NMN的方法，參考范圍設(shè)定為MN<64.97 pg/mL和NMN<185.83 pg/mL，當(dāng)患者M(jìn)N和NMN結(jié)果均低于參考范圍上限時(shí)，可基本上排除患有PPGL的可能，若患者M(jìn)N或NMN任意一項(xiàng)超過參考范圍上限，即可初步診斷為PPGL，通過運(yùn)用ROC曲線分析所得出的特異性診斷切點(diǎn)為參考范圍上限的2.04倍和1.99倍，若患者M(jìn)N和NMN均高于參考上限但未達(dá)到特異性診斷切點(diǎn)時(shí)，則推薦進(jìn)一步檢測(cè)血MN和尿分餾MN,以排除假陽性升高的情況。SMY等[33]考慮到由于血漿里非常低的內(nèi)源性3-MT水平(<0.1 nmol/L)導(dǎo)致常規(guī)免疫方法難以檢測(cè)，因此開發(fā)了一種簡(jiǎn)單的3-MT測(cè)量方法：使用固相微萃取進(jìn)行樣品制備，將洗脫液直接注入LC-MS/MS進(jìn)行分析并以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式采集數(shù)據(jù)，這種方法可以準(zhǔn)確測(cè)定患者標(biāo)本中的3-MT，為臨床醫(yī)生診斷或監(jiān)測(cè)PPGL提供有價(jià)值的信息，并且在標(biāo)本中MN和NMN水平正常的患者如果存在高水平的3-MT可提醒臨床醫(yī)生該患者可能患有分泌激素的腫瘤。由于CA及其代謝物的化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，存在眾多干擾物，并且在血液和尿液中的水平較低，因此準(zhǔn)確測(cè)定其水平是當(dāng)前臨床檢測(cè)難題，LC-MS/MS技術(shù)能夠進(jìn)行大量的血液和尿液樣品的快速篩查，激素代謝物檢測(cè)下限更低，亟待廣泛應(yīng)用，但由于實(shí)驗(yàn)室間所選用的檢測(cè)儀器和廠家不完全相同，尚未建立CA及其代謝物的統(tǒng)一參考方法和參考區(qū)間，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)無法有效進(jìn)行，是當(dāng)前臨床檢驗(yàn)亟待解決的問題[34]。

3 LC-MS /MS 技術(shù)臨床應(yīng)用局限性

LC-MS/MS 技術(shù)與現(xiàn)有的臨床實(shí)驗(yàn)室中廣泛使用的生化免疫技術(shù)相比，具有靈敏度高、特異性好、檢測(cè)下限低和高通量檢測(cè)等諸多優(yōu)勢(shì)，特別是對(duì)于臨床檢測(cè)小分子激素及代謝產(chǎn)物有重要意義，但在國(guó)內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室的使用率卻不高。分析其原因包括幾個(gè)方面：首先，由于質(zhì)譜檢測(cè)原理與臨床生化免疫檢測(cè)不同，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果之間存在一定差異，同一激素水平參考區(qū)間的設(shè)立由于檢測(cè)方法間的區(qū)別往往不完全一致，這就給臨床醫(yī)生診療疾病帶來困惑；其次，LC-MS/MS技術(shù)目前的臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法大多數(shù)是由儀器廠家和實(shí)驗(yàn)室聯(lián)合開發(fā)的自建方法，主要服務(wù)于本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目，在市場(chǎng)上缺乏相應(yīng)的可以通用的檢測(cè)試劑盒以及質(zhì)控品，導(dǎo)致各實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果難以溯源其公認(rèn)的參考方法或參考物質(zhì)，并且不同實(shí)驗(yàn)室所選用的儀器、標(biāo)準(zhǔn)品、試劑也存在差異，不同儀器類型所建立的方法學(xué)也存在差異，導(dǎo)致LC-MS/MS技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化面臨很大困難，加上色譜質(zhì)譜儀的運(yùn)行維護(hù)成本普遍較高，且自動(dòng)化程度不高，與目前臨床實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)普及的全自動(dòng)生化儀、化學(xué)發(fā)光儀等檢測(cè)儀器相比，LC-MS/MS技術(shù)較低的自動(dòng)化程度限制了其在臨床實(shí)驗(yàn)室的普及[35]；最后一方面也是最為重要的一點(diǎn)，目前在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域中應(yīng)用LC-MS/MS技術(shù)的行業(yè)政策、標(biāo)準(zhǔn)指南等一系列指南規(guī)范性文件出臺(tái)較少，對(duì)于各地區(qū)普及LC-MS/MS技術(shù)缺乏一個(gè)全面指導(dǎo)和建議，并且LC-MS/MS檢測(cè)設(shè)備目前還處于一個(gè)快速發(fā)展的階段，但有臨床應(yīng)用相關(guān)證書的設(shè)備往往卻并不是最新研發(fā)的檢測(cè)設(shè)備，導(dǎo)致設(shè)備更新?lián)Q代也滯后，在醫(yī)療市場(chǎng)應(yīng)用方面，LC-MS/MS檢驗(yàn)項(xiàng)目針對(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)的收費(fèi)定價(jià)、準(zhǔn)入等方面也缺乏相關(guān)的規(guī)定和政策[36]。以上這些原因均制約了LC-MS/MS技術(shù)在臨床實(shí)驗(yàn)室的推廣和應(yīng)用。

4 小 結(jié)

雖然LC-MS/MS技術(shù)在推廣應(yīng)用過程中仍存在較大的挑戰(zhàn)，但是隨著國(guó)家對(duì)質(zhì)譜技術(shù)臨床應(yīng)用的關(guān)注度提高以及國(guó)內(nèi)外醫(yī)療器械生產(chǎn)廠商、醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)LC-MS/MS技術(shù)的不斷研發(fā)和提升，隨著各種指南和政策文件的相繼出臺(tái)，目前存在的困難正在被逐步解決?？傊?，LC-MS/MS技術(shù)在內(nèi)分泌激素檢測(cè)領(lǐng)域已展現(xiàn)出強(qiáng)大應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，不僅可與現(xiàn)有常規(guī)生化免疫自動(dòng)化檢測(cè)技術(shù)互補(bǔ)，在發(fā)現(xiàn)及驗(yàn)證腎上腺疾病新的潛在生物標(biāo)志物方面亦將發(fā)揮重要作用。