血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2與慢性乙型病毒性肝炎患者HBV-DNA載量、肝功能及肝纖維化標(biāo)志物的相關(guān)性分析

劉俊香，畢泗朕

1.山東省濱州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濱州 256600；2.山東省濟(jì)南市平陰縣中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濟(jì)南 250400

慢性乙型病毒性肝炎(CHB)主要是指因乙型肝炎病毒(HBV)感染引發(fā)的一種慢性感染性肝病，如不予以及時(shí)、有效的治療，可能進(jìn)展成肝纖維化，最終導(dǎo)致肝硬化甚至肝癌的發(fā)生[1-2]。HBV-脫氧核糖核酸(HBV-DNA)載量、肝功能及肝纖維化標(biāo)志物均是目前臨床上用來診斷CHB以及評(píng)估病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)[3-4]。然而，HBV-DNA載量檢查費(fèi)用較高，肝功能指標(biāo)則存在特異度及靈敏度不高的缺陷，肝纖維化標(biāo)志物無法對(duì)CHB實(shí)施早期診斷。因此，尋求更為經(jīng)濟(jì)、可靠的生物學(xué)指標(biāo)實(shí)現(xiàn)對(duì)CHB病情的評(píng)估以及肝纖維化的判定具有極其重要的意義。高爾基體蛋白73(GP73)是廣泛存在于高爾基體的跨膜蛋白之一，與肝癌的發(fā)生密切相關(guān)[5-6]。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)是一種具備免疫調(diào)控功能的細(xì)胞因子，可用來評(píng)估肝臟損傷程度[7-8]。纖維蛋白原樣蛋白1(FLP1)屬于特異性促肝增殖因子之一，在肝細(xì)胞增殖以及肝保護(hù)過程中起著至關(guān)重要的作用[9-10]?？扇苄陨L刺激表達(dá)基因2蛋白(sST2)可通過與白細(xì)胞介素(IL)-33結(jié)合，繼而介導(dǎo)系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)[11-12]。鑒于此，本文通過研究血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2與CHB患者HBV-DNA載量、肝功能及肝纖維化標(biāo)志物的相關(guān)性，旨在為臨床診斷提供數(shù)據(jù)支持，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇濱州市中醫(yī)醫(yī)院2021年2月至2022年2月收治的166例CHB患者為研究對(duì)象。CHB患者中男104例，女62例；年齡34～78歲，平均(58.32±10.57)歲；病程1～16年，平均(6.12±1.30)年；體質(zhì)量指數(shù)19～32 kg/m2，平均(23.19±2.10)kg/m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者的診斷均符合《慢性乙型肝炎防治指南：2010年版》[13]中所制定的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)入組前12個(gè)月內(nèi)未接受抗炎或(和)免疫抑制劑治療；(3)年齡18～80歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)心、肺等臟器功能嚴(yán)重障礙者；(2)神志異?；虬橛芯窦膊≌?；(3)合并器質(zhì)性疾病者；(4)正參與其他研究者；(5)丙型或丁型病毒性肝炎者；(6)合并血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病或惡性腫瘤者；(7)伴有可能對(duì)本研究結(jié)果產(chǎn)生影響的疾病者。另選取同期健康體檢人員60例作為健康對(duì)照組。健康對(duì)照組中男36例，女24例；年齡33～78歲，平均(58.41±10.62)歲。本研究所有受試者均已簽署知情同意書，濱州市中醫(yī)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)已批準(zhǔn)本研究。

1.2方法 (1)HBV-DNA載量檢測(cè)：采集所有CHB患者的空腹靜脈血5 mL，進(jìn)行離心處理(離心半徑10 cm，離心速率為3 000 r/min，離心10 min)，獲取血清保存?zhèn)溆?。檢測(cè)方式為聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)結(jié)合熒光探針的體外擴(kuò)增技術(shù)，首先進(jìn)行DNA的提取，隨后遵循試劑盒說明書完成相關(guān)操作。相關(guān)試劑盒購自廣州中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司。其中上游引物序列為5′-ATCCTGCTGCTATGCCTCATCTT-3′，下游引物序列為5′-ACAGTGGGGAAAGCCCTACGAA-3′；探針引物序列：5′-TGGCTCAGTTTACTAGTGCCATTTG-3′。將所有患者根據(jù)HBV-DNA載量的差異分成低載量組(HBV-DNA載量≤105copy/mL)、中載量組(HBV-DNA載量在>105～107copy/mL)、高載量組(HBV-DNA載量>107copy/mL)。(2)血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2檢測(cè)：分別于所有患者入院后翌日、健康體檢人員體檢當(dāng)日采集清晨空腹靜脈血4 mL，離心處理(離心半徑10 cm，離心速率為3 000 r/min，離心10 min)后，獲取血清保存至-80 ℃冰箱中備用待檢。GP73、HMGB1、FLP1、sST2檢測(cè)方法均為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，相關(guān)試劑盒購自美國Bio Rad公司。(3)肝功能檢測(cè)：相關(guān)指標(biāo)有丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)以及γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)，采用全自動(dòng)生化分析儀完成檢測(cè)。(4)肝纖維化標(biāo)志物檢測(cè)：相關(guān)指標(biāo)有透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)及Ⅳ型膠原(CⅣ)，檢測(cè)方法均為放射免疫法，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，相關(guān)試劑盒由北京泰格科信生物有限公司提供。

2 結(jié) 果

2.1各組血清GP73、HMGB1、FLP1以及sST2水平對(duì)比 根據(jù)HBV-DNA載量的差異將所有患者分為低載量組76例、中載量組50例、高載量組40例。低載量組、中載量組、高載量組血清GP73、HMGB1及sST2水平均高于健康對(duì)照組，且中載量組、高載量組血清GP73、HMGB1及sST2水平高于低載量組，高載量組血清GP73、HMGB1及sST2水平高于中載量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(P<0.05)。低載量組、中載量組、高載量組血清FLP1水平均低于健康對(duì)照組，且中載量組、高載量組血清FLP1水平低于低載量組，高載量組血清FLP1水平低于中載量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血清GP73、HMGB1、FLP1以及sST2水平對(duì)比

2.2不同HBV-DNA載量組肝功能指標(biāo)水平比較 中載量組、高載量組ALT、AST及GGT水平均高于低載量組，且高載量組ALT、AST及GGT水平高于中載量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同HBV-DNA載量組肝功能指標(biāo)水平對(duì)比

2.3不同HBV-DNA載量組HA、LN以及CⅣ水平對(duì)比 中載量組、高載量組HA、LN以及CⅣ水平均高于低載量組，且高載量組HA、LN以及CⅣ水平高于中載量組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(P<0.05)。見表3。

表3 不同HBV-DNA載量組HA、LN以及CⅣ水平對(duì)比

2.4血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2與CHB患者HBV-DNA載量、肝功能指標(biāo)及肝纖維化標(biāo)志物的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman/Pearson相關(guān)性分析可得：血清GP73、HMGB1、sST2與CHB患者HBV-DNA載量、ALT、AST、GGT、HA、LN、CⅣ水平均呈正相關(guān)(r>0，P<0.05)，而血清FLP1與CHB患者HBV-DNA載量、ALT、AST、GGT、HA、LN、CⅣ水平呈負(fù)相關(guān)(r<0，P<0.05)。見表4。

表4 血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2與CHB患者HBV-DNA載量、肝功能指標(biāo)及肝纖維化標(biāo)志物的相關(guān)性分析

3 討 論

HBV-DNA載量檢測(cè)是目前臨床應(yīng)用較為廣泛的評(píng)價(jià)病毒復(fù)制活躍程度的指標(biāo)之一，亦是CHB患者治療適應(yīng)證以及評(píng)估療效的指標(biāo)[14-16]。然而，該指標(biāo)存在一定的局限性，加上部分患者出現(xiàn)HBV突變，從而難以獲得真實(shí)的病毒復(fù)制情況，降低了病毒載量檢查的特異度以及準(zhǔn)確度[17-18]。因此，尋求一種更為準(zhǔn)確、特異的無創(chuàng)性血清學(xué)標(biāo)志物顯得尤為重要，亦是臨床研究的熱點(diǎn)。這在針對(duì)有明顯肝纖維化的CHB患者實(shí)施抗病毒治療中至關(guān)重要[19-20]，亦是減緩病情發(fā)展以及降低相關(guān)并發(fā)癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)鍵，因此尋求可準(zhǔn)確反映肝纖維化程度的生化指標(biāo)具有極其重要的意義。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CHB患者血清GP73、HMGB1、sST2水平均呈異常高表達(dá)，而FLP1水平呈異常低表達(dá)，且隨著HBV-DNA載量的增加，上述各項(xiàng)指標(biāo)水平升高或降低。GP73主要是由400個(gè)氨基酸構(gòu)成的相對(duì)分子質(zhì)量約為73×103的Ⅱ型跨膜糖蛋白，正常情況下存在高爾基復(fù)合體上，且在正常肝臟中僅在膽管上皮細(xì)胞中表達(dá)，在肝臟發(fā)生損傷時(shí)，肝臟細(xì)胞和血清中的GP73水平異常升高[21-22]。HMGB1通路在機(jī)體內(nèi)炎癥反應(yīng)過程中具有促進(jìn)炎癥反應(yīng)的作用[23-24]。FLP1屬于肝源性生長因子之一，可促進(jìn)正常肝細(xì)胞增殖，在機(jī)體內(nèi)往往以同源二聚體的形式發(fā)揮自身局部促肝細(xì)胞增殖的活性[25-26]。sST2屬于白細(xì)胞介素(IL)-33的重要受體，在HBV感染時(shí)IL-33會(huì)被釋放至細(xì)胞外，繼而導(dǎo)致IL-4及IL-13等大量細(xì)胞因子分泌，進(jìn)一步引起Th1/Th2的失衡，從而引起炎癥反應(yīng)，加速肝臟功能損害[11,27]。其中侯麗娟等[28]的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，血清sST2與CHB患者病情嚴(yán)重程度有關(guān)，這可為本研究結(jié)果提供佐證。此外，隨著CHB患者HBV-DNA載量的增加，患者的肝功能損傷程度以及肝纖維化程度加劇。分析其原因，HBV-DNA載量的增加往往反映了病毒復(fù)制程度的加劇，患者長期處于持續(xù)感染狀態(tài)之下，肝組織炎癥程度增加，繼而促進(jìn)了病情進(jìn)展[29]。隨著HBV-DNA載量的增加，CHB患者ALT、AST及GGT水平逐漸升高。分析其原因，可能是ALT、AST及GGT均是臨床上反映肝功能的生物學(xué)指標(biāo)，隨著HBV-DNA載量的增加，肝臟受損程度加劇，繼而導(dǎo)致ALT、AST及GGT表達(dá)異常。與此同時(shí)，隨著HBV-DNA載量的增加，CHB患者肝纖維化程度加劇，這可能和HBV-DNA載量越高其活性越強(qiáng)有關(guān)，繼而對(duì)肝臟造成持續(xù)損害，促進(jìn)了肝纖維化。另外，經(jīng)Spearman/Pearson相關(guān)分析可得：血清GP73、HMGB1、sST2與ALT、AST、GGT、HA、LN、CⅣ均呈正相關(guān)，而血清FLP1和上述相關(guān)指標(biāo)呈負(fù)相關(guān)。這提示了血清GP73、HMGB1、FLP1、sST2可輔助評(píng)估CHB患者肝功能以及肝纖維化，同時(shí)也說明這4項(xiàng)指標(biāo)在CHB患者病情發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用。其中GP73、HMGB1、sST2均有一定的促進(jìn)病情進(jìn)展的作用，隨著其水平的升高，會(huì)加重HBV對(duì)肝功能的損害；而FLP1具有肝保護(hù)作用，可通過自分泌途徑刺激肝細(xì)胞增殖，因此在肝臟再生過程中其水平升高。由此推測(cè)，實(shí)際工作中可通過對(duì)血清GP73、HMGB1、sST2及FLP1水平進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，從而為CHB的診斷和病情判定提供參考依據(jù)。

綜上所述，CHB患者血清GP73、HMGB1、sST2水平均呈異常高表達(dá)，而FLP1水平呈異常低表達(dá)，且這4項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)可有效評(píng)估CHB患者的HBV-DNA載量、肝功能和肝纖維化，繼而指導(dǎo)臨床CHB患者治療方案的制訂以及實(shí)施，從而達(dá)到改善CHB患者預(yù)后的目的。